P77PMC大鼠脑内孤啡肽含量低于Wistar大鼠
作者：袁立 韩宙 韩济生
单位：北京医科大学神经科学研究所，北京 100083
关键词：
990319 孤啡肽(orphanin FQ，OFQ)是1995 年底发现的孤儿阿片受体样受体的内源性配体[1]，其结构和细胞内信号转导通路方面类似于阿片肽但功能在脑内则与阿片肽相反。OFQ 作为一种新的抗阿片样物质广泛存在于中枢神经系统，原位杂交[2]和Northern杂交[3]结果表明其前体mRNA在中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray, PAG)、杏仁核、丘脑和下丘脑等部位有较多的分布与表达。本工作运用放射免疫分析方法对P77PMC大鼠和Wistar大鼠的这4个脑区及脑室灌流液中OFQ免疫活性(immunoreactivity, ir)进行了测定。
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1 材料与方法
选用体重为200～250g雄性Wistar大鼠和P77PMC大鼠，以0.1kg.L-1的水合氯醛麻醉(350mg.kg-1,i.p.)，进行侧脑室恒速灌流，每只动物连续灌流30min(约1ml)，灌流液收集在冰浴内Eppendorf管内。灌流一结束，立即断头取脑，按Paxinos&Watson鼠脑定位图谱，用植皮刀片剔取出PAG、双侧杏仁核、丘脑和下丘脑，分别放入预先盛有1ml0.5mol.L-1乙酸的Eppendorf管，连同收集灌流液的Eppendorf管一起置于沸水中加热10min。灌流液放置-70℃冷冻再抽干，测定前用130μl双蒸水复溶。脑组织经超声匀浆1min后，于4℃静置4h，离心(4℃，12000r.min-1，25min)，取上清分装贮于-70℃保存。匀浆液的蛋白浓度用考马司亮蓝法测定。
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放免药盒由美国PhoenixPharmaceuticals公司产，放免系统的非特异结合为4.78%，最小检测每管为11pg，整个实验过程在4℃冰浴中进行。
2 结果与讨论
由表1可以看出，与Wistar大鼠相比，P77PMC大鼠的下丘脑、PAG和脑室灌流液中OFQ-ir分别降低了33%(P<0.01)、23%(P<0.05)和21%(P<0.05)。结果表明，P77PMC大鼠脑内OFQ生成和释放较Wistar大鼠减少。
表1 Wistar大鼠和P77PMC大鼠不同脑区及脑室灌流液中OFQ-ir比较(
±s)
Table 1 The content of OFQ-ir in different brain
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region and cerebrovetricular perfusate (ng per mg protein)
in Wistar rats and P77PMC rats (±s) Rats
Hypothalamus(n)
PAG(n)
Amygdala(n)
Thalamus(n)
Ventricular perfusate(n)
Wistar
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5.78±0.47(11)
2.98±0.23(10)
1.62±0.17(10)
2.23±0.27(10)
63.77±4.87(12)
P77PMC
3.86±0.22**(12)
2.29±0.14*(11)
2.03±0.24(12)
2.45±0.34(10)
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50.10±4.26*(11)
n, the number of animals in each group. P<0.05, **P<0.01 compared with Wistar rats, tested by Student's two tailed t test.
P77PMC大鼠是我校裴耕源教授1977年培育的先天遗传性听源性惊厥易感大鼠，其电针效果明显优于Wistar大鼠，原因之一是其脑内抗阿片肽CCK-8的含量特别低。本次实验发现P77PMC大鼠的下丘脑、PAG和脑室灌流液中OFQ-ir含量明显低于Wistar大鼠。由于侧脑室注射OFQ能剂量依赖性翻转大鼠吗啡镇痛和电针镇痛[4～6]，因此推测P77PMC 大鼠脑内OFQ的生物合成和基础释放量的减少也是其电针效果优于Wistar大鼠的另一原因。
参考文献
, http://www.100md.com
1 Reinscheid RK, Nothacker HP, Bourson A, et al. Orphanin FQ: A neuropeptide that activates an opioid-like G protein-coupled receptor. Science, 1995, 270:792-794
2 Houtani T, Nishi M, Takeshima H, et al. Structure and regional distribution of nociceptin/orphanin FQ precursor. Biochem Biophys Res Commun, 1996, 219:714-719
3 Nothacher HP, Reinscheids RK, Mansour A, et al. Primary structure and tissue distribution of orphanin FQ precursor. Proc Natl Acad Sci USA, 1996, 93:8677-8682
, http://www.100md.com
4 Grise JE, Moril JS, Belknap JK, et al. Orphanin FQ acts as a supraspinal, but not a spinal, anti-opioid peptide. Neuroreport， 1996, 7 :2125-2129
5 Tian JH, Wu W, Fang Y, et al. Bidirectional modulatory effect of orphanin FQ on morphine-induced analgesia: Antagonism in brain and potentiation in spinal cord of the rat. Br J pharmacol, 1997， 120(4):676-680
6 Tian JH, Xu W, Zhang ZK， et al.Involvement of endogenous orphanin FQ in electroacupuncture-induced analgesia. Neuroreport, 1997, 8(2):497-500
(1998-08-27收稿)
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单位：北京医科大学神经科学研究所，北京 100083
关键词：
990319 孤啡肽(orphanin FQ，OFQ)是1995 年底发现的孤儿阿片受体样受体的内源性配体[1]，其结构和细胞内信号转导通路方面类似于阿片肽但功能在脑内则与阿片肽相反。OFQ 作为一种新的抗阿片样物质广泛存在于中枢神经系统，原位杂交[2]和Northern杂交[3]结果表明其前体mRNA在中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray, PAG)、杏仁核、丘脑和下丘脑等部位有较多的分布与表达。本工作运用放射免疫分析方法对P77PMC大鼠和Wistar大鼠的这4个脑区及脑室灌流液中OFQ免疫活性(immunoreactivity, ir)进行了测定。
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1 材料与方法
选用体重为200～250g雄性Wistar大鼠和P77PMC大鼠，以0.1kg.L-1的水合氯醛麻醉(350mg.kg-1,i.p.)，进行侧脑室恒速灌流，每只动物连续灌流30min(约1ml)，灌流液收集在冰浴内Eppendorf管内。灌流一结束，立即断头取脑，按Paxinos&Watson鼠脑定位图谱，用植皮刀片剔取出PAG、双侧杏仁核、丘脑和下丘脑，分别放入预先盛有1ml0.5mol.L-1乙酸的Eppendorf管，连同收集灌流液的Eppendorf管一起置于沸水中加热10min。灌流液放置-70℃冷冻再抽干，测定前用130μl双蒸水复溶。脑组织经超声匀浆1min后，于4℃静置4h，离心(4℃，12000r.min-1，25min)，取上清分装贮于-70℃保存。匀浆液的蛋白浓度用考马司亮蓝法测定。
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放免药盒由美国PhoenixPharmaceuticals公司产，放免系统的非特异结合为4.78%，最小检测每管为11pg，整个实验过程在4℃冰浴中进行。
2 结果与讨论
由表1可以看出，与Wistar大鼠相比，P77PMC大鼠的下丘脑、PAG和脑室灌流液中OFQ-ir分别降低了33%(P<0.01)、23%(P<0.05)和21%(P<0.05)。结果表明，P77PMC大鼠脑内OFQ生成和释放较Wistar大鼠减少。
表1 Wistar大鼠和P77PMC大鼠不同脑区及脑室灌流液中OFQ-ir比较(
±s)Table 1 The content of OFQ-ir in different brain
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region and cerebrovetricular perfusate (ng per mg protein)
in Wistar rats and P77PMC rats (
±s) RatsHypothalamus(n)
PAG(n)
Amygdala(n)
Thalamus(n)
Ventricular perfusate(n)
Wistar
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5.78±0.47(11)
2.98±0.23(10)
1.62±0.17(10)
2.23±0.27(10)
63.77±4.87(12)
P77PMC
3.86±0.22**(12)
2.29±0.14*(11)
2.03±0.24(12)
2.45±0.34(10)
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50.10±4.26*(11)
n, the number of animals in each group. P<0.05, **P<0.01 compared with Wistar rats, tested by Student's two tailed t test.
P77PMC大鼠是我校裴耕源教授1977年培育的先天遗传性听源性惊厥易感大鼠，其电针效果明显优于Wistar大鼠，原因之一是其脑内抗阿片肽CCK-8的含量特别低。本次实验发现P77PMC大鼠的下丘脑、PAG和脑室灌流液中OFQ-ir含量明显低于Wistar大鼠。由于侧脑室注射OFQ能剂量依赖性翻转大鼠吗啡镇痛和电针镇痛[4～6]，因此推测P77PMC 大鼠脑内OFQ的生物合成和基础释放量的减少也是其电针效果优于Wistar大鼠的另一原因。
参考文献
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1 Reinscheid RK, Nothacker HP, Bourson A, et al. Orphanin FQ: A neuropeptide that activates an opioid-like G protein-coupled receptor. Science, 1995, 270:792-794
2 Houtani T, Nishi M, Takeshima H, et al. Structure and regional distribution of nociceptin/orphanin FQ precursor. Biochem Biophys Res Commun, 1996, 219:714-719
3 Nothacher HP, Reinscheids RK, Mansour A, et al. Primary structure and tissue distribution of orphanin FQ precursor. Proc Natl Acad Sci USA, 1996, 93:8677-8682
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4 Grise JE, Moril JS, Belknap JK, et al. Orphanin FQ acts as a supraspinal, but not a spinal, anti-opioid peptide. Neuroreport， 1996, 7 :2125-2129
5 Tian JH, Wu W, Fang Y, et al. Bidirectional modulatory effect of orphanin FQ on morphine-induced analgesia: Antagonism in brain and potentiation in spinal cord of the rat. Br J pharmacol, 1997， 120(4):676-680
6 Tian JH, Xu W, Zhang ZK， et al.Involvement of endogenous orphanin FQ in electroacupuncture-induced analgesia. Neuroreport, 1997, 8(2):497-500
(1998-08-27收稿)
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