肾上腺髓质素对转化生长因子-β促心肌成纤维细胞胶原生成作用的影响
作者：曹静 张钧华 徐雅琴 符民桂 王晓红 唐朝枢
单位：曹静 张钧华 徐雅琴 北京医科大学第一医院心内科；符民桂 王晓红 唐朝枢 心血管病研究所，北京 100034
关键词：
北京医科大学学报990626 肾上腺髓质素(adrenomedullin, Adm)是一种具有广泛生物学效应的血管活性肽，可通过多种方式参与机体内稳态调节[1]。本研究通过观察Adm对心肌成纤维细胞胶原生成的影响，探讨Adm的心脏保护作用。
1 材料与方法
心肌成纤维细胞培养：参考Clderone等[2]的方法。实验用第2～3代细胞。根据显微镜下梭状细胞形态及α-actin 染色阴性确定实验用细胞为成纤维细胞。3H-脯氨酸参入：心肌成纤维细胞按1×105细胞/孔接种于24孔板，正常培养48 h后无血清培养24h，然后随机分为6组(n=6):(1)对照组：不加任何药物；(2)TGF-β组：每孔加TGF-β(Sigma 公司)至终质量浓度为20 μg.L-1；(3)Adm组：每孔加Adm (Phoenix pharmac Inc. USA)至终浓度为10-7 mol.L-1；(4)TGF-β+Adm组：分3个亚组。TGF-β终质量浓度均为20μg.L-1，Adm终浓度分别为10-9, 10-8和10-7 mol.L-1。细胞加处理因素后孵育12h，每孔加入3H-脯氨酸(中国科学院原子能所)3.7×104Bq继续孵育12h。
, 百拇医药
细胞及介质中3H放射性的测定参考李玉瑞[3]方法在β液闪仪上测定参入的3H放射活性(Bq/well)。
统计学分析：实验结果以
±s表示。两组间数据比较行t检验。P<0.05为差异有显著性，P<0.01为差异有极显著性。
2 结果
本实验条件下，与对照组比较，TGF-β(20 μg.L-1)显著刺激心肌成纤维细胞3H-脯氨酸摄取和胶原蛋白的释放(用细胞内及介质中3H放射活性Bq值表示，P<0.01)。
, 百拇医药
单独应用Adm(10-7 mol.L-1)对心肌成纤维细胞胶原生成无明显影响(P>0.05),但不同浓度Adm+TGF-β组与单独应用TGF-β组相比，细胞内及介质中3H放射活性均呈浓度依赖性降低(图1)。
n=6, A,activity; A,control; B,TGF-β; C,Adm; D,TGF-β+Adm(10-9 mol.L-1); E,TGF-β+Adm(10-8 mol.L-1); F,TGF-β+Adm(10-7 mol.L-1)； *P<0.05, **P<0.01 vs TGF-β group.
, 百拇医药
图1 肾上腺髓质素对心肌成纤维细胞胶原生成的影响
Figure 1 The effect of adm on collagen production in cardiac fibroblasts
3 讨论
肾上腺髓质素具有扩张血管、排尿利钠、抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖等多种生物学效应[1]。在多种心血管系统疾病如高血压、急性心肌梗死、慢性心衰及心肌肥大时Adm生成增加[1]，被认为是机体为维持自稳态的一种适应性调节。
目前认为 Adm不仅是一种循环激素，更重要的是可通过旁、自分泌方式直接参与组织器官的功能调节。最近有报道，培养的成纤维细胞株Swiss 3T3可分泌Adm[4]。我们发现心肌成纤维细胞也可分泌Adm，并且存在Adm受体(待发表资料)，提示成纤维细胞也是Adm的旁、自分泌作用的靶细胞。
, 百拇医药
成纤维细胞的增殖和胶原合成增加是高血压和心肌梗死后心室重塑、心肌肥大及纤维化等心血管病理过程的重要发病环节。TGF-β是体内最强的胶原合成刺激剂。本实验观察到TGF-β刺激心肌成纤维细胞胶原生成的作用为Adm呈浓度依赖地抑制。推测Adm可能具有改善心肌重塑、延缓心肌肥大、心肌纤维化的心肌保护作用。
参考文献
1 Nagaya N, Nishikimi T, Uematsu M, et al. Plasma adrenomedullin as an indicator of prognosis after acute myocardial infarction. Heart, 1999,81:483-487
2 Calderone A, Thaik CM, Takahashi N, et al. Nitric oxide, atrial natriuretic peptide and cyclic GMP inhibit the growth-promoting effects of norepinephrine in cardiac myocytes and fibroblasts. J Clin Invest, 1998,101:812-818
3 李玉瑞.细胞外间质的生物化学及研究方法. 北京：人民卫生出版社，1998.222-223
4 Ishumi Y, Minamino N, Katafuchi T, et al. Adrenomedullin production in fibroblasts: its possible function as growth regulator of Swiss 3T3 cells. Endocrinology, 1998,139:2552-2563
(1999-01-07收稿), http://www.100md.com
单位：曹静 张钧华 徐雅琴 北京医科大学第一医院心内科；符民桂 王晓红 唐朝枢 心血管病研究所，北京 100034
关键词：
北京医科大学学报990626 肾上腺髓质素(adrenomedullin, Adm)是一种具有广泛生物学效应的血管活性肽，可通过多种方式参与机体内稳态调节[1]。本研究通过观察Adm对心肌成纤维细胞胶原生成的影响，探讨Adm的心脏保护作用。
1 材料与方法
心肌成纤维细胞培养：参考Clderone等[2]的方法。实验用第2～3代细胞。根据显微镜下梭状细胞形态及α-actin 染色阴性确定实验用细胞为成纤维细胞。3H-脯氨酸参入：心肌成纤维细胞按1×105细胞/孔接种于24孔板，正常培养48 h后无血清培养24h，然后随机分为6组(n=6):(1)对照组：不加任何药物；(2)TGF-β组：每孔加TGF-β(Sigma 公司)至终质量浓度为20 μg.L-1；(3)Adm组：每孔加Adm (Phoenix pharmac Inc. USA)至终浓度为10-7 mol.L-1；(4)TGF-β+Adm组：分3个亚组。TGF-β终质量浓度均为20μg.L-1，Adm终浓度分别为10-9, 10-8和10-7 mol.L-1。细胞加处理因素后孵育12h，每孔加入3H-脯氨酸(中国科学院原子能所)3.7×104Bq继续孵育12h。
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细胞及介质中3H放射性的测定参考李玉瑞[3]方法在β液闪仪上测定参入的3H放射活性(Bq/well)。
统计学分析：实验结果以
±s表示。两组间数据比较行t检验。P<0.05为差异有显著性，P<0.01为差异有极显著性。2 结果
本实验条件下，与对照组比较，TGF-β(20 μg.L-1)显著刺激心肌成纤维细胞3H-脯氨酸摄取和胶原蛋白的释放(用细胞内及介质中3H放射活性Bq值表示，P<0.01)。
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单独应用Adm(10-7 mol.L-1)对心肌成纤维细胞胶原生成无明显影响(P>0.05),但不同浓度Adm+TGF-β组与单独应用TGF-β组相比，细胞内及介质中3H放射活性均呈浓度依赖性降低(图1)。
n=6, A,activity; A,control; B,TGF-β; C,Adm; D,TGF-β+Adm(10-9 mol.L-1); E,TGF-β+Adm(10-8 mol.L-1); F,TGF-β+Adm(10-7 mol.L-1)； *P<0.05, **P<0.01 vs TGF-β group.
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图1 肾上腺髓质素对心肌成纤维细胞胶原生成的影响
Figure 1 The effect of adm on collagen production in cardiac fibroblasts
3 讨论
肾上腺髓质素具有扩张血管、排尿利钠、抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖等多种生物学效应[1]。在多种心血管系统疾病如高血压、急性心肌梗死、慢性心衰及心肌肥大时Adm生成增加[1]，被认为是机体为维持自稳态的一种适应性调节。
目前认为 Adm不仅是一种循环激素，更重要的是可通过旁、自分泌方式直接参与组织器官的功能调节。最近有报道，培养的成纤维细胞株Swiss 3T3可分泌Adm[4]。我们发现心肌成纤维细胞也可分泌Adm，并且存在Adm受体(待发表资料)，提示成纤维细胞也是Adm的旁、自分泌作用的靶细胞。
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成纤维细胞的增殖和胶原合成增加是高血压和心肌梗死后心室重塑、心肌肥大及纤维化等心血管病理过程的重要发病环节。TGF-β是体内最强的胶原合成刺激剂。本实验观察到TGF-β刺激心肌成纤维细胞胶原生成的作用为Adm呈浓度依赖地抑制。推测Adm可能具有改善心肌重塑、延缓心肌肥大、心肌纤维化的心肌保护作用。
参考文献
1 Nagaya N, Nishikimi T, Uematsu M, et al. Plasma adrenomedullin as an indicator of prognosis after acute myocardial infarction. Heart, 1999,81:483-487
2 Calderone A, Thaik CM, Takahashi N, et al. Nitric oxide, atrial natriuretic peptide and cyclic GMP inhibit the growth-promoting effects of norepinephrine in cardiac myocytes and fibroblasts. J Clin Invest, 1998,101:812-818
3 李玉瑞.细胞外间质的生物化学及研究方法. 北京：人民卫生出版社，1998.222-223
4 Ishumi Y, Minamino N, Katafuchi T, et al. Adrenomedullin production in fibroblasts: its possible function as growth regulator of Swiss 3T3 cells. Endocrinology, 1998,139:2552-2563
(1999-01-07收稿), http://www.100md.com