结直肠癌患者可溶性CD44v6的检测
作者：欧启水 兰斌 徐海滨 林淑玲
单位：欧启水 徐海滨 林淑玲(福建医科大学附属第一医院检验科 福州 350005)；兰斌(福建医科大学附属第一医院外科)
关键词：抗原；CD；结肠直肠肿瘤；酶联免疫吸附测定
中华检验医学杂志000602 【摘要】 目的 探讨检测血清可溶性细胞表面分化抗原(sCD)44v6在结直肠癌诊断中的价值。方法 以酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测81例结直肠癌患者术前及术后第1、5、10天共4个时间点sCD44v6的变化，并结合临床资料进行分析。结果 结直肠癌组sCD44v6的水平[(200.5±31.1) μg/L]明显高于正常对照组[(45.6±9.5) μg/L]和结肠炎组[(48.3±7.6) μg/L]，差异均有显著意义(P均<0.05)；结直肠癌伴转移组sCD44v6水平[(280.1±26.9) μg/L]，明显高于未转移组[(160.9±34.4) μg/L]，差异有显著意义(P<0.05)；术后第1、5、10天sCD44v6水平逐渐下降，至第10天降至正常。结论 sCD44v6水平与结直肠癌及其转移有明显关联，其可作为结直肠癌的诊断、预后诊断的参考指标，及是否伴有转移的预测指标。
, http://www.100md.com
sCD44v6 in the diagnosis of colorectum cancer
OU Qishui LAN Bin XU Haibing
(First Affiliated Hospital, Fujian Medical University, Fuzhou, 350005, China)
【Abstract】 Objective To explore the role of sCD44v6 in the diagnosis of colorectum cancer. Methods ELISA was used to detect the concentration of sCD44v6 of 81 patients after or before surgery.Results The level of sCD44v6 in the group of colorectum cancer was 200.5±31.1 ng/ml, which was higher than that of normal controls (45.6±9.5ng/ml) and that of patients with coloritis (48.3±7.6ng/ml). The concentration of sCD44v6 in the group of colorectum cancer with metastasis(280.1±26.9ng/ml) was higher than that of the group without metastasis(160.9±34.4ng/ml). The level of sCD44v6 was related to tumor burden.Conclusions The level of sCD44v6 is closely related to colorectal cancer and its metastasis. It would be useful in the diagnosis, prognosis, and forcasting of metastasis.
, 百拇医药
【Key words】 Antigens, CD;Colorectal neoplasms;Enzyme-linked immunosorbent assay
细胞表面分化抗原(CD)44是一条糖基化的跨膜多肽链。除了标准型CD44外，由于mRNA水平的交替拼接，在标准型CD44分子的胞外近膜区插入各种片段，形成各种相应的CD44变构体(CD44v)，包括CD44v2～10。有研究表明，CD44v6与结直肠癌及其转移和预后有密切关联，CD44v6有望成为一种新的肿瘤标记物[1，2]。我们动态检测结直肠癌病人手术前后血清可溶性CD44v6(sCD44v6)的变化，并结合临床其他资料探讨其在结直肠癌诊断中的价值。
材料和方法
1.标本来源：129份外周血标本均由本院肿瘤外科提供，其中结直肠癌81份(转移组47份，未转移组34份)，肠炎病人13份，正常体检标本35份。129例病人中，男50例，女79例，年龄30～76岁。所有结直肠癌病人的诊断均经肠镜检查和病理切片证实。抽取病人术前及术后第1、5、10 d外周血，分离血清于-20℃冻存。
, 百拇医药
2.主要试剂和仪器：sCD44v6试剂盒由澳大利亚BMD公司生产。
3.sCD44v6检测：ELISA操作根据试剂盒说明书。将收集到的标本和试剂盒提供的标准品一次性检测，同时设立复孔空白对照、阴性对照、阳性对照。根据标准品定值和吸光度(A)值绘制标准曲线。
4.结果计算：根据每孔最后所得的A值，查标准曲线可得该份标本的sCD44v6含量。
结果
1.正常对照组、结肠炎组和结直肠癌组3组标本的sCD44v6的含量如表1，可见：结直肠癌病人外周血sCD44v6含量明显高于正常对照组和结肠炎组，结直肠癌伴转移组sCD44v6水平明显高于未转移组，其差异均有显著意义。表1还显示81例病人手术前及手术后第1、5、10天共4个时间点sCD44v6的动态检测结果。可见术后sCD44v6呈明显下降趋势，至术后第10天sCD44v6水平已降至正常。
, 百拇医药
表1 各实验组sCD44v6含量的比较(ng/ml) 组别
例数
±s
P值
正常对照组
35
45.6± 9.5
结直肠炎组
13
48.3± 7.6
>0.05*
结直肠癌组(术前)
, 百拇医药
81
200.5±31.1
<0.05*
术后第1天
81
102.1±19.9
<0.05**
术后第5天
81
48.0± 7.4
<0.05**
术后第10天
, 百拇医药 81
46.0± 8.9
<0.05**
结直肠癌伴转移组
34
280.1±26.9
<0.05*
结直肠癌未转移组
47
160.9±34.4
<0.05*/***
*与对照组比较，**与结直肠癌术前比较，***与转移组比较 2.性别、年龄、细胞分化程度、肿瘤位置及癌胚抗原(CEA)水平不同的病人sCD44v6含量比较：可见血清sCD44v6水平(μg/L)与性别(男195±31，女208±26)、年龄(≤60岁212±21，>60岁192±19)、肿瘤位置(结肠210±18，直肠181±26)及CEA水平(<5 μg/L 184±20，>5 μg/L 214±6)没有关联，但与细胞分化程度有关，未分化和低分化者48例的sCD44v6含量为259±16，中分化和高分化者33例的sCD44v6含量为181±31，可见细胞分化程度越高，sCD44v6水平越低，其差异均有显著意义(P值<0.05)。
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讨论
大量的分子生物学研究表明，CD44及其拼接变构体在结直肠癌的发生、发展中起重要作用，其中尤以CD44v6与结直肠癌的关系最为密切。CD44v6引发结直肠癌的机理涉及CD44标准型及其变构体的表达失衡，CD44v6变构体可能执行一种“配体引导的多向性行为”[3]。重要的是，跨膜糖蛋白CD44v6能从肿瘤细胞表面脱落到血中，从而为利用外周血检测sCD44v6奠定了基础。本组结果显示，转移组sCD44v6明显高于未转移组，提示CD44v6可能在肿瘤转移中起作用，这与已有的分子生物学研究结果[4]一致。传统的肿瘤诊断常依赖于肉眼观察和病理切片判断肿瘤是否转移。近年来，人们企图利用分子生物学手段检测CD44v6的表达以判断肿瘤是否发生转移。已有的文献称能测出10 ml血液中含有的1个癌细胞中的CD44v6[5]。ELISA法不如分子生物学检测敏感，但与肉眼和病理切片相比，其灵敏度提高了许多。我们认为：鉴于sCD44v6与结直肠癌转移之间的关联性，sCD44v6有望被用来判断肿瘤是否发生转移。另外，随着细胞分化程度的提高，sCD44v6的水平呈下降趋势，提示CD44v6与细胞分化可能有关联。众所周知，癌细胞的分化程度越低，其恶性度越大。据此更加确定了CD44v6参与肿瘤发生、发展的可能性。
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本文结果提示，sCD44v6水平与性别、年龄、血清CEA水平及肿瘤部位无关，但与肿瘤转移及细胞分化有关。CEA是临床上普遍应用的胃肠道肿瘤的标志物之一，其灵敏度过低，一些临床上已确证为结直肠癌的病人，其CEA常为阴性。我们的结果显示，在结直肠癌病人中，不论CEA水平是否大于5，其sCD44v6均明显升高。据此可知，与CEA相比，sCD44v6是一个较为敏感的结直肠肿瘤标志物。
基金项目：福建省卫生厅青年科技基金(编号：99C002)资助
参考文献
1，Finke LH, Terpe HJ, Zorb C, et al. Colorectal cancer prognosis and expression of exon-v6-containing CD44 proteins. The Lancet, 1995,345:583-584.
, 百拇医药
2，Yamane N, Tsujitani S, Makino M, et al. Soluable CD44 variant 6 as a prognostic indicator in patients with colorectal cancer. Oncology,1999,56:232-238.
3，欧启水. CD44与肿瘤关系研究进展. 国外医学临床生化与检验学分册，1998，19：161-163.
4，Reeder JA, Gotley DC, Walsh MD,et al.Expression of antisense CD44 variant 6 inhibits colorectal tumor metastasis and tumor growth in a wound enviroment. Cancer Res, 1998,58:3719-3726.
5，Matsumura Y, Tarin D. Significance of CD44 gene products for cancer diagnosis and disease evalation. Lancet,1992,340:1053-1058.
(收稿日期：2000-04-21), http://www.100md.com
单位：欧启水 徐海滨 林淑玲(福建医科大学附属第一医院检验科 福州 350005)；兰斌(福建医科大学附属第一医院外科)
关键词：抗原；CD；结肠直肠肿瘤；酶联免疫吸附测定
中华检验医学杂志000602 【摘要】 目的 探讨检测血清可溶性细胞表面分化抗原(sCD)44v6在结直肠癌诊断中的价值。方法 以酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测81例结直肠癌患者术前及术后第1、5、10天共4个时间点sCD44v6的变化，并结合临床资料进行分析。结果 结直肠癌组sCD44v6的水平[(200.5±31.1) μg/L]明显高于正常对照组[(45.6±9.5) μg/L]和结肠炎组[(48.3±7.6) μg/L]，差异均有显著意义(P均<0.05)；结直肠癌伴转移组sCD44v6水平[(280.1±26.9) μg/L]，明显高于未转移组[(160.9±34.4) μg/L]，差异有显著意义(P<0.05)；术后第1、5、10天sCD44v6水平逐渐下降，至第10天降至正常。结论 sCD44v6水平与结直肠癌及其转移有明显关联，其可作为结直肠癌的诊断、预后诊断的参考指标，及是否伴有转移的预测指标。
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sCD44v6 in the diagnosis of colorectum cancer
OU Qishui LAN Bin XU Haibing
(First Affiliated Hospital, Fujian Medical University, Fuzhou, 350005, China)
【Abstract】 Objective To explore the role of sCD44v6 in the diagnosis of colorectum cancer. Methods ELISA was used to detect the concentration of sCD44v6 of 81 patients after or before surgery.Results The level of sCD44v6 in the group of colorectum cancer was 200.5±31.1 ng/ml, which was higher than that of normal controls (45.6±9.5ng/ml) and that of patients with coloritis (48.3±7.6ng/ml). The concentration of sCD44v6 in the group of colorectum cancer with metastasis(280.1±26.9ng/ml) was higher than that of the group without metastasis(160.9±34.4ng/ml). The level of sCD44v6 was related to tumor burden.Conclusions The level of sCD44v6 is closely related to colorectal cancer and its metastasis. It would be useful in the diagnosis, prognosis, and forcasting of metastasis.
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【Key words】 Antigens, CD;Colorectal neoplasms;Enzyme-linked immunosorbent assay
细胞表面分化抗原(CD)44是一条糖基化的跨膜多肽链。除了标准型CD44外，由于mRNA水平的交替拼接，在标准型CD44分子的胞外近膜区插入各种片段，形成各种相应的CD44变构体(CD44v)，包括CD44v2～10。有研究表明，CD44v6与结直肠癌及其转移和预后有密切关联，CD44v6有望成为一种新的肿瘤标记物[1，2]。我们动态检测结直肠癌病人手术前后血清可溶性CD44v6(sCD44v6)的变化，并结合临床其他资料探讨其在结直肠癌诊断中的价值。
材料和方法
1.标本来源：129份外周血标本均由本院肿瘤外科提供，其中结直肠癌81份(转移组47份，未转移组34份)，肠炎病人13份，正常体检标本35份。129例病人中，男50例，女79例，年龄30～76岁。所有结直肠癌病人的诊断均经肠镜检查和病理切片证实。抽取病人术前及术后第1、5、10 d外周血，分离血清于-20℃冻存。
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2.主要试剂和仪器：sCD44v6试剂盒由澳大利亚BMD公司生产。
3.sCD44v6检测：ELISA操作根据试剂盒说明书。将收集到的标本和试剂盒提供的标准品一次性检测，同时设立复孔空白对照、阴性对照、阳性对照。根据标准品定值和吸光度(A)值绘制标准曲线。
4.结果计算：根据每孔最后所得的A值，查标准曲线可得该份标本的sCD44v6含量。
结果
1.正常对照组、结肠炎组和结直肠癌组3组标本的sCD44v6的含量如表1，可见：结直肠癌病人外周血sCD44v6含量明显高于正常对照组和结肠炎组，结直肠癌伴转移组sCD44v6水平明显高于未转移组，其差异均有显著意义。表1还显示81例病人手术前及手术后第1、5、10天共4个时间点sCD44v6的动态检测结果。可见术后sCD44v6呈明显下降趋势，至术后第10天sCD44v6水平已降至正常。
, 百拇医药
表1 各实验组sCD44v6含量的比较(ng/ml) 组别
例数
±sP值
正常对照组
35
45.6± 9.5
结直肠炎组
13
48.3± 7.6
>0.05*
结直肠癌组(术前)
, 百拇医药
81
200.5±31.1
<0.05*
术后第1天
81
102.1±19.9
<0.05**
术后第5天
81
48.0± 7.4
<0.05**
术后第10天
, 百拇医药 81
46.0± 8.9
<0.05**
结直肠癌伴转移组
34
280.1±26.9
<0.05*
结直肠癌未转移组
47
160.9±34.4
<0.05*/***
*与对照组比较，**与结直肠癌术前比较，***与转移组比较 2.性别、年龄、细胞分化程度、肿瘤位置及癌胚抗原(CEA)水平不同的病人sCD44v6含量比较：可见血清sCD44v6水平(μg/L)与性别(男195±31，女208±26)、年龄(≤60岁212±21，>60岁192±19)、肿瘤位置(结肠210±18，直肠181±26)及CEA水平(<5 μg/L 184±20，>5 μg/L 214±6)没有关联，但与细胞分化程度有关，未分化和低分化者48例的sCD44v6含量为259±16，中分化和高分化者33例的sCD44v6含量为181±31，可见细胞分化程度越高，sCD44v6水平越低，其差异均有显著意义(P值<0.05)。
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讨论
大量的分子生物学研究表明，CD44及其拼接变构体在结直肠癌的发生、发展中起重要作用，其中尤以CD44v6与结直肠癌的关系最为密切。CD44v6引发结直肠癌的机理涉及CD44标准型及其变构体的表达失衡，CD44v6变构体可能执行一种“配体引导的多向性行为”[3]。重要的是，跨膜糖蛋白CD44v6能从肿瘤细胞表面脱落到血中，从而为利用外周血检测sCD44v6奠定了基础。本组结果显示，转移组sCD44v6明显高于未转移组，提示CD44v6可能在肿瘤转移中起作用，这与已有的分子生物学研究结果[4]一致。传统的肿瘤诊断常依赖于肉眼观察和病理切片判断肿瘤是否转移。近年来，人们企图利用分子生物学手段检测CD44v6的表达以判断肿瘤是否发生转移。已有的文献称能测出10 ml血液中含有的1个癌细胞中的CD44v6[5]。ELISA法不如分子生物学检测敏感，但与肉眼和病理切片相比，其灵敏度提高了许多。我们认为：鉴于sCD44v6与结直肠癌转移之间的关联性，sCD44v6有望被用来判断肿瘤是否发生转移。另外，随着细胞分化程度的提高，sCD44v6的水平呈下降趋势，提示CD44v6与细胞分化可能有关联。众所周知，癌细胞的分化程度越低，其恶性度越大。据此更加确定了CD44v6参与肿瘤发生、发展的可能性。
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本文结果提示，sCD44v6水平与性别、年龄、血清CEA水平及肿瘤部位无关，但与肿瘤转移及细胞分化有关。CEA是临床上普遍应用的胃肠道肿瘤的标志物之一，其灵敏度过低，一些临床上已确证为结直肠癌的病人，其CEA常为阴性。我们的结果显示，在结直肠癌病人中，不论CEA水平是否大于5，其sCD44v6均明显升高。据此可知，与CEA相比，sCD44v6是一个较为敏感的结直肠肿瘤标志物。
基金项目：福建省卫生厅青年科技基金(编号：99C002)资助
参考文献
1，Finke LH, Terpe HJ, Zorb C, et al. Colorectal cancer prognosis and expression of exon-v6-containing CD44 proteins. The Lancet, 1995,345:583-584.
, 百拇医药
2，Yamane N, Tsujitani S, Makino M, et al. Soluable CD44 variant 6 as a prognostic indicator in patients with colorectal cancer. Oncology,1999,56:232-238.
3，欧启水. CD44与肿瘤关系研究进展. 国外医学临床生化与检验学分册，1998，19：161-163.
4，Reeder JA, Gotley DC, Walsh MD,et al.Expression of antisense CD44 variant 6 inhibits colorectal tumor metastasis and tumor growth in a wound enviroment. Cancer Res, 1998,58:3719-3726.
5，Matsumura Y, Tarin D. Significance of CD44 gene products for cancer diagnosis and disease evalation. Lancet,1992,340:1053-1058.
(收稿日期：2000-04-21), http://www.100md.com