对Grimelius嗜银染色的改良应用
作者：马恒辉 周晓军
单位：210002 南京军区南京总医院病理科
关键词：
在诊断来自产肽细胞发生的肿瘤时 在诊断来自产肽细胞发生的肿瘤时，常要用到嗜银反应[1]。常用的嗜银反应如Grimelius法，因染液中硝酸银含量有限，在还原时常出现嗜银颗粒反应不足的现象，影响观察和诊断。我们介绍的是在Grimelius嗜银染色法的基础上，将缓冲硝酸银液中的硝酸银用量适度提高，结果与原法相比，使嗜银颗粒还原银的能力明显增强，便于镜下观察。
一、材料和方法
1.材料和染液：类癌组织经10%福马林固定，常规包埋，切片厚4 μm。染液配方：(1)缓冲硝酸银：1%硝酸银水溶液5 ml(原法为3 ml)，0.2 mol/L醋酸缓冲液10 ml pH 5.6，蒸馏水85 ml(原法为87 ml)。(2)还原液：1，4对苯二酚1 g，无水亚硫酸钠2.5 g，蒸馏水100 ml。以上两液均需要临用前配制。
2.操作步骤：嗜银反应染色法[1，2](根据Grimelius，1968年)操作如下：(1)切片脱蜡至水，蒸馏水洗。(2)放入预热的缓冲硝酸银液3小时，60℃。(3)蒸馏水速洗。(4)入还原液内1分钟，45℃。(5)蒸馏水洗，镜下观察。(6)5%硫代硫酸钠液1分钟。(7)流水冲洗10分钟。(8)95%及无水酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。
二、结果和讨论
嗜银颗粒为棕黑色颗粒[1，2](附图)。本法应用的组织必须新鲜，及时用甲醛或含甲醛固定液固定，含酒精者不用[2]。切片脱蜡水洗时在酒精中停留时间宜短。对苯二酚对银盐的还原十分缓慢，且受温度影响较大，故从配液开始，就必须严格掌握溶剂的温度在35～55℃范围内，最佳为45℃。若嗜银反应不足，颗粒为灰黄色，可在还原后用5%硫代硫酸钠处理10分钟，水洗充分后，重新放入银液内浸10分钟(室温下，随后于45℃还原1分钟)。反应过度时颗粒为黑色颗粒。
附图 胃类癌细胞浆内阳性细胞呈黑色 Grimelius×400
参考文献
1 刘介眉，严庆汉，路英杰等编著.病理组织染色的理论方法和应用.北京：人民卫生出版社，1983.194-219.
2 凌启波编著.实用病理特殊染色和组化技术.广州：广东高等教育出版社，1989.137-142.
(收稿：1997-04-15 修回：1997-11-26), 百拇医药
单位：210002 南京军区南京总医院病理科
关键词：
在诊断来自产肽细胞发生的肿瘤时 在诊断来自产肽细胞发生的肿瘤时，常要用到嗜银反应[1]。常用的嗜银反应如Grimelius法，因染液中硝酸银含量有限，在还原时常出现嗜银颗粒反应不足的现象，影响观察和诊断。我们介绍的是在Grimelius嗜银染色法的基础上，将缓冲硝酸银液中的硝酸银用量适度提高，结果与原法相比，使嗜银颗粒还原银的能力明显增强，便于镜下观察。
一、材料和方法
1.材料和染液：类癌组织经10%福马林固定，常规包埋，切片厚4 μm。染液配方：(1)缓冲硝酸银：1%硝酸银水溶液5 ml(原法为3 ml)，0.2 mol/L醋酸缓冲液10 ml pH 5.6，蒸馏水85 ml(原法为87 ml)。(2)还原液：1，4对苯二酚1 g，无水亚硫酸钠2.5 g，蒸馏水100 ml。以上两液均需要临用前配制。
2.操作步骤：嗜银反应染色法[1，2](根据Grimelius，1968年)操作如下：(1)切片脱蜡至水，蒸馏水洗。(2)放入预热的缓冲硝酸银液3小时，60℃。(3)蒸馏水速洗。(4)入还原液内1分钟，45℃。(5)蒸馏水洗，镜下观察。(6)5%硫代硫酸钠液1分钟。(7)流水冲洗10分钟。(8)95%及无水酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。
二、结果和讨论
嗜银颗粒为棕黑色颗粒[1，2](附图)。本法应用的组织必须新鲜，及时用甲醛或含甲醛固定液固定，含酒精者不用[2]。切片脱蜡水洗时在酒精中停留时间宜短。对苯二酚对银盐的还原十分缓慢，且受温度影响较大，故从配液开始，就必须严格掌握溶剂的温度在35～55℃范围内，最佳为45℃。若嗜银反应不足，颗粒为灰黄色，可在还原后用5%硫代硫酸钠处理10分钟，水洗充分后，重新放入银液内浸10分钟(室温下，随后于45℃还原1分钟)。反应过度时颗粒为黑色颗粒。
附图 胃类癌细胞浆内阳性细胞呈黑色 Grimelius×400
参考文献
1 刘介眉，严庆汉，路英杰等编著.病理组织染色的理论方法和应用.北京：人民卫生出版社，1983.194-219.
2 凌启波编著.实用病理特殊染色和组化技术.广州：广东高等教育出版社，1989.137-142.
(收稿：1997-04-15 修回：1997-11-26), 百拇医药