乳腺癌c-erbB-2、p21蛋白、增殖细胞核抗原和激素受体的表达及意义
作者：田秀娟 高子芬 韩志惠 王玉萍
单位：高子芬(北京医科大学病理学系 100083)；韩志惠(北京医科大学病理学系 100083)；王玉萍(北京医科大学病理学系 100083)；田秀娟(山西省大同市第五人民医院，037006)
关键词：
我们应用免疫组化方法检测乳腺癌手术标本的石蜡包埋组织中c 我们应用免疫组化方法检测乳腺癌手术标本的石蜡包埋组织中c-erbB-2蛋白、p21蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)以及雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)表达情况，旨在进一步探讨癌基因蛋白，细胞增殖活性和激素受体与乳腺癌组织学分级及术后生存期的关系，为乳腺癌的病理诊断、预后判断及治疗提供依据。
一、材料与方法
1.材料：47例乳腺癌标本取自大同市第五医院病理科和北京医科大学病理学系外检档案1987～1990年手术患者，有完整随访资料，从术后随访至死亡，存活病例随访5年以上，最长达10年。47例中女性46例，男性1例。年龄28～76岁，平均49岁。按术后生存期长短(以5年为界)分为2组，5年以上者26例，5年以下者21例。
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2.试剂和免疫组化染色：C-Hras p21(M0637)、PCNA PC10(M879)和ER 1D5(M7047)单抗, c-erbB-2(A0485)和PR(A0098)多抗以及生物素化IgG(二抗)和ABC复合物均为DAKO公司产品。采用免疫组化LSAB法。切片厚4 μm，行微波处理，一抗4℃过夜，DAB显色。阴性对照以Tris缓冲液代替一抗；阳性对照用已知c-erbB-2蛋白、p21蛋白、PCNA以及ER、PR阳性的乳腺癌组织切片。免疫组化结果的阳性表达按癌细胞着色的强弱结合阳性细胞的百分率，记为不显色-，<25% +，25%～50% ++ ，51%～75% +++，>76% ++++。PCNA的阳性表达，参照黄志清等[1]的方法，每张切片至少检测500个细胞，计数PCNA阳性的细胞数；染色强度分为4级，即阴性、弱阳性、中度及深度着色；计数每一强度的细胞数目，计算PCNA染色强度指数(PCNASII)，SII=(弱阳性细胞百分数×1)+(中等强度细胞百分数×2)+(强阳性细胞百分数×3)。
, 百拇医药 3.统计方法：采用卡方检验和t检验。
二、结果
1. 组织学分型及分级：依舟山会议推荐方案[2]进行组织学分类。浸润性导管癌30例，浸润性小叶癌6例，粘液腺癌7例，髓样癌伴淋巴细胞浸润4例。根据腺管形成，细胞分化及核分裂等3项9分的评定标准[3]，进行组织学分级，Ⅰ级5例，Ⅱ级14例，Ⅲ级28例。
2. 各蛋白在各型乳腺癌中的表达：c-erbB-2 阳性27例(57.45%)，其中浸润性导管癌表达(19例)高于其他类型。p21阳性27例(57.45%)，信号位于胞质，其中浸润性导管癌13例；PCNA阳性颗粒位于胞核，浸润性导管癌染色强度指数平均为66.27，高于其他类型，ER、PR阳性分别为27、20例(57.45%、42.55%)。
3. 各蛋白在乳腺癌组织学分级中表达：随着乳腺癌分级的升高，c-erbB-2 过度表达率升高，Ⅰ级(1/5)和Ⅲ(20/28)、Ⅱ级(4/14)和Ⅲ级间差异有显著性，P<0.05；Ⅰ级和Ⅱ级间差异无显著性，P>0.05。p21蛋白过度表达率随乳腺癌分级升高而有升高的趋势，但各级间差异无显著性(P>0.05)。PCNA染色强度指数平均为Ⅰ级36.76，Ⅱ级44.88，Ⅲ级77.08，经t检验发现各级间PCNA的SII值差异有显著性(P<0.01)。ER、PR的阳性表达率随乳腺癌分级升高而降低，ER阳性表达率为Ⅰ级(5/5)和Ⅲ级(13/28)差异有显著性(P<0.05)；Ⅰ级和Ⅱ级，Ⅱ级和Ⅲ级间差异无显著性(P>0.05)，PR阳性率各级间差异无显著性(P>0.05)。
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4.各蛋白和PCNA SII值与病人术后生存期的关系：术后生存期5年以下组乳腺癌21例，c-erbB-2 阳性表达者16例(76.2%)。生存期5年以上组26例，c-erbB-2 阳性表达者9例(34.6%)，两组间差异有显著性(P<0.01)。术后生存期5年以下组p21阳性表达者13例(61.9%)，术后生存期5年以上组p21阳性表达者14例(53.8 %)，但两组间差异无显著性(P>0.05)。术后生存期5年以下组PCNA SII均数为74.37，而生存期5年以上组PCNA SII均数为51.02，经t检验两组SII均数差异有显著性(P<0.05)。
5.各蛋白表达之间的关系：47例乳腺癌中c-erbB-2 、p21均有过度表达者17例，占36.2%，其中16例为Ⅱ级或Ⅲ级。
二、讨论
大多数学者认为c-erbB-2 在乳腺癌中的表达与组织学分级有关，即分化差的肿瘤c-erbB-2 阳性率较高。Slamon等[4]发现c-erbB-2 激活较其他预后因子(包括ER、PR和肿瘤体积)有更大的价值，与最重要的预后因子转移淋巴结数目相当。本结果证实其可以作为判断预后的因子。c-erbB-2蛋白与ER之间存在负相关关系[5]，即该基因的激活在ER阴性肿瘤中较常见。我们的实验也表明c-erbB-2蛋白的过度表达与ER呈负相关。在本研究中p21阳性表达率随乳腺癌分级升高有上升的趋势，术后生存期5年以下组p21阳性表达率高于5年以上组，与文献报道基本相符，表明p21检测可为判断乳腺癌恶性程度和预后提供依据。
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PCNA阳性表达与乳腺癌组织学分级、类型和肿瘤复发呈正相关，与生存期呈负相关，但与肿瘤大小无关。我们用单克隆抗体PC10对47例乳腺癌进行研究，发现随乳腺癌分级升高，PCNA指数升高，在Ⅰ级和Ⅲ级间有明显的统计学差异。同时发现乳腺癌术后生存期5年以下者PCNA染色强度指数高，与生存期5年以上者间差异有统计学意义。由此可见PCNA检测能作为判断预后的指标之一。本实验中，ER受体表达随组织学分级升高而降低，在乳腺癌Ⅰ级和Ⅲ级间差异有显著性，证实了激素受体是判断预后、指导内分泌治疗的一项重要指标。
通信作者：高子芬(Email:wjshgao @mail.bjmu.edu.cn)
参考文献：
[1]黄志清，阚秀，虞有智,等.乳腺癌中PCNA表达及其与组织学分级的关系.临床与实验病理学杂志，1996，12：295-297.
, 百拇医药 [2]中华病理学杂志编辑委员会.乳腺增生症及乳腺癌组织学分类(推荐方案). 中华病理学杂志，1997，26：325-326.
[3]傅西林.乳腺恶性肿瘤.见：刘复生，刘彤华，主编.肿瘤病理学.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社， 1997.1646.
[4]Slamon DJ, Clark GM, Wong SG, et al. Human breast cancer： correlation of relapse and survival with amplificatin of the HER -2/neu oncogene. Science,1987,235：177-182.
[5]Moriki T, Takahashi T, Hiroi M, et al. Histological grade in invasive ductal carcinoma of breat correlates with the proliferative activity evaluated by BrdU：an immunohistochemical study including correlations with p53 c-erbB-2 and estrogen receptor status. Pathol Int,1996, 46：417-425.
收稿日期：1999-04-16, 百拇医药
单位：高子芬(北京医科大学病理学系 100083)；韩志惠(北京医科大学病理学系 100083)；王玉萍(北京医科大学病理学系 100083)；田秀娟(山西省大同市第五人民医院，037006)
关键词：
我们应用免疫组化方法检测乳腺癌手术标本的石蜡包埋组织中c 我们应用免疫组化方法检测乳腺癌手术标本的石蜡包埋组织中c-erbB-2蛋白、p21蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)以及雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)表达情况，旨在进一步探讨癌基因蛋白，细胞增殖活性和激素受体与乳腺癌组织学分级及术后生存期的关系，为乳腺癌的病理诊断、预后判断及治疗提供依据。
一、材料与方法
1.材料：47例乳腺癌标本取自大同市第五医院病理科和北京医科大学病理学系外检档案1987～1990年手术患者，有完整随访资料，从术后随访至死亡，存活病例随访5年以上，最长达10年。47例中女性46例，男性1例。年龄28～76岁，平均49岁。按术后生存期长短(以5年为界)分为2组，5年以上者26例，5年以下者21例。
, http://www.100md.com
2.试剂和免疫组化染色：C-Hras p21(M0637)、PCNA PC10(M879)和ER 1D5(M7047)单抗, c-erbB-2(A0485)和PR(A0098)多抗以及生物素化IgG(二抗)和ABC复合物均为DAKO公司产品。采用免疫组化LSAB法。切片厚4 μm，行微波处理，一抗4℃过夜，DAB显色。阴性对照以Tris缓冲液代替一抗；阳性对照用已知c-erbB-2蛋白、p21蛋白、PCNA以及ER、PR阳性的乳腺癌组织切片。免疫组化结果的阳性表达按癌细胞着色的强弱结合阳性细胞的百分率，记为不显色-，<25% +，25%～50% ++ ，51%～75% +++，>76% ++++。PCNA的阳性表达，参照黄志清等[1]的方法，每张切片至少检测500个细胞，计数PCNA阳性的细胞数；染色强度分为4级，即阴性、弱阳性、中度及深度着色；计数每一强度的细胞数目，计算PCNA染色强度指数(PCNASII)，SII=(弱阳性细胞百分数×1)+(中等强度细胞百分数×2)+(强阳性细胞百分数×3)。
, 百拇医药 3.统计方法：采用卡方检验和t检验。
二、结果
1. 组织学分型及分级：依舟山会议推荐方案[2]进行组织学分类。浸润性导管癌30例，浸润性小叶癌6例，粘液腺癌7例，髓样癌伴淋巴细胞浸润4例。根据腺管形成，细胞分化及核分裂等3项9分的评定标准[3]，进行组织学分级，Ⅰ级5例，Ⅱ级14例，Ⅲ级28例。
2. 各蛋白在各型乳腺癌中的表达：c-erbB-2 阳性27例(57.45%)，其中浸润性导管癌表达(19例)高于其他类型。p21阳性27例(57.45%)，信号位于胞质，其中浸润性导管癌13例；PCNA阳性颗粒位于胞核，浸润性导管癌染色强度指数平均为66.27，高于其他类型，ER、PR阳性分别为27、20例(57.45%、42.55%)。
3. 各蛋白在乳腺癌组织学分级中表达：随着乳腺癌分级的升高，c-erbB-2 过度表达率升高，Ⅰ级(1/5)和Ⅲ(20/28)、Ⅱ级(4/14)和Ⅲ级间差异有显著性，P<0.05；Ⅰ级和Ⅱ级间差异无显著性，P>0.05。p21蛋白过度表达率随乳腺癌分级升高而有升高的趋势，但各级间差异无显著性(P>0.05)。PCNA染色强度指数平均为Ⅰ级36.76，Ⅱ级44.88，Ⅲ级77.08，经t检验发现各级间PCNA的SII值差异有显著性(P<0.01)。ER、PR的阳性表达率随乳腺癌分级升高而降低，ER阳性表达率为Ⅰ级(5/5)和Ⅲ级(13/28)差异有显著性(P<0.05)；Ⅰ级和Ⅱ级，Ⅱ级和Ⅲ级间差异无显著性(P>0.05)，PR阳性率各级间差异无显著性(P>0.05)。
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4.各蛋白和PCNA SII值与病人术后生存期的关系：术后生存期5年以下组乳腺癌21例，c-erbB-2 阳性表达者16例(76.2%)。生存期5年以上组26例，c-erbB-2 阳性表达者9例(34.6%)，两组间差异有显著性(P<0.01)。术后生存期5年以下组p21阳性表达者13例(61.9%)，术后生存期5年以上组p21阳性表达者14例(53.8 %)，但两组间差异无显著性(P>0.05)。术后生存期5年以下组PCNA SII均数为74.37，而生存期5年以上组PCNA SII均数为51.02，经t检验两组SII均数差异有显著性(P<0.05)。
5.各蛋白表达之间的关系：47例乳腺癌中c-erbB-2 、p21均有过度表达者17例，占36.2%，其中16例为Ⅱ级或Ⅲ级。
二、讨论
大多数学者认为c-erbB-2 在乳腺癌中的表达与组织学分级有关，即分化差的肿瘤c-erbB-2 阳性率较高。Slamon等[4]发现c-erbB-2 激活较其他预后因子(包括ER、PR和肿瘤体积)有更大的价值，与最重要的预后因子转移淋巴结数目相当。本结果证实其可以作为判断预后的因子。c-erbB-2蛋白与ER之间存在负相关关系[5]，即该基因的激活在ER阴性肿瘤中较常见。我们的实验也表明c-erbB-2蛋白的过度表达与ER呈负相关。在本研究中p21阳性表达率随乳腺癌分级升高有上升的趋势，术后生存期5年以下组p21阳性表达率高于5年以上组，与文献报道基本相符，表明p21检测可为判断乳腺癌恶性程度和预后提供依据。
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PCNA阳性表达与乳腺癌组织学分级、类型和肿瘤复发呈正相关，与生存期呈负相关，但与肿瘤大小无关。我们用单克隆抗体PC10对47例乳腺癌进行研究，发现随乳腺癌分级升高，PCNA指数升高，在Ⅰ级和Ⅲ级间有明显的统计学差异。同时发现乳腺癌术后生存期5年以下者PCNA染色强度指数高，与生存期5年以上者间差异有统计学意义。由此可见PCNA检测能作为判断预后的指标之一。本实验中，ER受体表达随组织学分级升高而降低，在乳腺癌Ⅰ级和Ⅲ级间差异有显著性，证实了激素受体是判断预后、指导内分泌治疗的一项重要指标。
通信作者：高子芬(Email:wjshgao @mail.bjmu.edu.cn)
参考文献：
[1]黄志清，阚秀，虞有智,等.乳腺癌中PCNA表达及其与组织学分级的关系.临床与实验病理学杂志，1996，12：295-297.
, 百拇医药 [2]中华病理学杂志编辑委员会.乳腺增生症及乳腺癌组织学分类(推荐方案). 中华病理学杂志，1997，26：325-326.
[3]傅西林.乳腺恶性肿瘤.见：刘复生，刘彤华，主编.肿瘤病理学.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社， 1997.1646.
[4]Slamon DJ, Clark GM, Wong SG, et al. Human breast cancer： correlation of relapse and survival with amplificatin of the HER -2/neu oncogene. Science,1987,235：177-182.
[5]Moriki T, Takahashi T, Hiroi M, et al. Histological grade in invasive ductal carcinoma of breat correlates with the proliferative activity evaluated by BrdU：an immunohistochemical study including correlations with p53 c-erbB-2 and estrogen receptor status. Pathol Int,1996, 46：417-425.
收稿日期：1999-04-16, 百拇医药