电离辐射对可溶性白细胞介素-2受体的影响
作者：范 冰 鞠桂英
单位：130021 长春，白求恩医科大学卫生部放射生物重点实验室
关键词：
中华放射医学与防护杂志980308.htm
辐射诱导适应性反应的研究已向免疫学领域扩展，并证实其存在[1，2]本研究旨在观察适应性反应在可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)方面的表现，以探讨免疫适应性反应的机制。
1 材料和方法
1.1 照射及细胞培养条件：健康献血员(25～40岁)静脉血分离出单个核细胞后，调至一定细胞浓度(1×10\+6/ml)，加入1%的PHA，加板(24孔板)，1ml/孔，双复孔。用飞利浦X射线治疗机在室温下照射细胞，预照射剂量(简称D\-1剂量)为0.075Gy(剂量率0.0125Gy/min)。照后细胞在37℃、5%CO\-2空气、饱和温度下培养4小时，再给予损伤剂量(简称D\-2剂量)照射，分别为1.5，2.0，4.0，6.0Gy(剂量率为0.287Gy/min)。继续培养至D\-1照射后不同时间离心收集培养上清，贮于-20℃，待测。实验同时设假照及单纯D\-2剂量对照组。
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1.2 sIL-2R含量测定：采用双抗体夹心角接ELISA法[3]。用4μg/ml抗IL-2Rd单克隆抗体色被聚苯乙烯酶标板，100μl/孔，4℃过夜，次日弃去。加入1%BSA-PBS 200μl封闭，37℃2小时，弃去。用0.3% Tween-20-PBS洗涤两次。每孔加入1%BSA-PBS 100μl,再依次加入空白对照，不同浓度的sIL-2R标准品及待测样品50μl，双复孔，混匀后37℃孵育2小时，弃之，洗涤3次。各孔加入兔抗IL-2Rd多克隆抗体(1∶40稀释)100μl，37℃孵育2小时，弃之，洗涤3次。各孔加入辣根过氧化物酶标记驴抗兔抗体(1∶40稀释)100μl，37℃孵育2小时，弃之，洗3次。各孔加入1mg/ml邻苯二胺100μl，室温避光反应5～10分钟，加入2mol/L H\-2SO\-4 50μl，立即用酶联免疫检测仪测490nm吸光度(A)值。以标准品A值绘制标准曲线，样品A值在曲线上查含量。若样品A值超出标准曲线范围，则稀释后重新测定。
2 结果
, 百拇医药
2.1 0.075Gy照射对sIL-2R含量的影响
单纯0.075Gy照射后不同时间sIL-2R含量的变化见表1。结果表明，0.075Gy照后48小时，T细胞培养上清中sIL-2R的含量明显降低(P<0.05)，72小时和96小时的sIL-2R均维持在对照组水平。
表1 0.075Gy照射对sIL-2R含量的影响(U/ml) 剂量(Gy)
照射后时间(h)
48
72
96
0
1044.36±434.96
, 百拇医药
2513.72±1484.28
2570.64±481.60
0.075
493.40±328.64*
2365.16±619.24
2485.32±488.56
注：n=7,实验组与对照组相比较 \+*P<0.05
2.2 大剂量照射对sIL-2R含量的影响
单纯给予D\-2大剂量照射后48小时，培养细胞上清中sIL-2R含量的变化见表2。表中结果可见，4Gy和6Gy辐射明显降低培养上清中sIL-2R的含量。表2 大剂量照射对sIL-2R含量的影响 照射剂量(Gy)
, 百拇医药
sIL-2R
(μ/ml)
照射剂量
(Gy)
sIL-2R
(μ/ml)
0
234.89±65.38
4
97.67±21.96**
2
174.67±57.42
, 百拇医药
6
124.67±46.76**
2.3 低剂量辐射诱导sIL-2R的适应性反应
D\-1剂量为0.075Gy、D\-2剂量为1.5Gy，实际所得结果见表3。由表可见，1.5Gy中等剂量照射后72h sIL-2R含量显著高于假照射组(P<0.01)，0.075Gy预照射组sIL-2R含量却显著低于单纯D\-2组(P<0.05)，其水平与假照组相近。表3 低剂量照射诱导sIL-2R的适应性反应(U/ml) 培养时间(h)
照射剂量(Gy)
0
1.5
0.075±1.5
, 百拇医药
48
278.33±91.60
388.00±96.54
329.33±131.87
72
696.80±237.34
1266.00±283.60**
808.00±283.64*
注：n=6**P<0.01与0Gy组相比较； \+*P<0.05与1.5Gy组相比较
3 讨论
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自从Robin等[4]首次报告sIL-2R以来，国内外学者对其进行了大量研究。推测sIL2R在免疫调节中的功能是[5]：①mIL-2Rd的主要廓清方式。②一种重要的免疫抑制物，与mIL-2R竞争结合IL-2，减弱IL-2的作用。③IL-2的转运蛋白。本实验结果提示0.075Gy照射可降低人外周血淋巴细胞mIL-2Rd的脱落，从而提高T细胞的活化度和免疫功能。1.5Gy中等剂量照射明显促进mIL-2Rd向培养液中的脱落，增强sIL-2R与mIL-2Rd间的竞争而抑制IL-2作用的发挥。0.075预照射则可减轻这种脱落和竞争，促T细胞继续发挥较强的免疫功能。此时，mIL-2Rd表达受到刺激(为对照组的114.20%，未发表资料)。大剂量照射则导致细胞凋亡或死亡，从而使mIL-2Rd不能从细胞膜上裂解下来[6]，故此，4Gy及6Gy照射后上清中sIL-2R含量显著降低。
本实验结果表明，低剂量辐射可调节淋巴细胞表面某些蛋白分子表达或蛋白分子间的相互作用而诱导适应性反应。
, http://www.100md.com
本课题受国家自然科学基金资助参考文献
1 鞠桂荥，宋春华，齐进，等.小剂量单次全身上射诱导小鼠免疫适应性反应的剂量与时间研究.辐射研究与辐射工艺学报，1995，5：95.
2 杨占山，朱寿彭，梅淑琴.浓缩轴内染污诱导免疫细胞的适应性反应.中华放射医学与防护杂志，1994，6：379.
3 富宁，王桂兰，王利，等.单去隆与多去隆双抗体夹心法测定sIL-2R.中国免疫学杂志，1991，7：278.
4 Robin LA,Kurman CC,Fritz ME,et al.Soluble interleukin 2 receptors released from activated human lymphoid cells in vitro.J Immunol,1985,135:3172.
5 杨忠珍.免疫生物工程纲要与技术.长春：吉林科技出版社，1991，67～68.
6 Reske-Kunz AB,Osawa H,Josimovic-Alasevic O,et al.Soluble interleukin 2 receptors are releated by long term-cultured insulin-specific T cells transiently after contact with antigen.J Immunol,1987,138:192.
(收稿：1997-01-14 修回：1997-06-22), 百拇医药
单位：130021 长春，白求恩医科大学卫生部放射生物重点实验室
关键词：
中华放射医学与防护杂志980308.htm
辐射诱导适应性反应的研究已向免疫学领域扩展，并证实其存在[1，2]本研究旨在观察适应性反应在可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)方面的表现，以探讨免疫适应性反应的机制。
1 材料和方法
1.1 照射及细胞培养条件：健康献血员(25～40岁)静脉血分离出单个核细胞后，调至一定细胞浓度(1×10\+6/ml)，加入1%的PHA，加板(24孔板)，1ml/孔，双复孔。用飞利浦X射线治疗机在室温下照射细胞，预照射剂量(简称D\-1剂量)为0.075Gy(剂量率0.0125Gy/min)。照后细胞在37℃、5%CO\-2空气、饱和温度下培养4小时，再给予损伤剂量(简称D\-2剂量)照射，分别为1.5，2.0，4.0，6.0Gy(剂量率为0.287Gy/min)。继续培养至D\-1照射后不同时间离心收集培养上清，贮于-20℃，待测。实验同时设假照及单纯D\-2剂量对照组。
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1.2 sIL-2R含量测定：采用双抗体夹心角接ELISA法[3]。用4μg/ml抗IL-2Rd单克隆抗体色被聚苯乙烯酶标板，100μl/孔，4℃过夜，次日弃去。加入1%BSA-PBS 200μl封闭，37℃2小时，弃去。用0.3% Tween-20-PBS洗涤两次。每孔加入1%BSA-PBS 100μl,再依次加入空白对照，不同浓度的sIL-2R标准品及待测样品50μl，双复孔，混匀后37℃孵育2小时，弃之，洗涤3次。各孔加入兔抗IL-2Rd多克隆抗体(1∶40稀释)100μl，37℃孵育2小时，弃之，洗涤3次。各孔加入辣根过氧化物酶标记驴抗兔抗体(1∶40稀释)100μl，37℃孵育2小时，弃之，洗3次。各孔加入1mg/ml邻苯二胺100μl，室温避光反应5～10分钟，加入2mol/L H\-2SO\-4 50μl，立即用酶联免疫检测仪测490nm吸光度(A)值。以标准品A值绘制标准曲线，样品A值在曲线上查含量。若样品A值超出标准曲线范围，则稀释后重新测定。
2 结果
, 百拇医药
2.1 0.075Gy照射对sIL-2R含量的影响
单纯0.075Gy照射后不同时间sIL-2R含量的变化见表1。结果表明，0.075Gy照后48小时，T细胞培养上清中sIL-2R的含量明显降低(P<0.05)，72小时和96小时的sIL-2R均维持在对照组水平。
表1 0.075Gy照射对sIL-2R含量的影响(U/ml) 剂量(Gy)
照射后时间(h)
48
72
96
0
1044.36±434.96
, 百拇医药
2513.72±1484.28
2570.64±481.60
0.075
493.40±328.64*
2365.16±619.24
2485.32±488.56
注：n=7,实验组与对照组相比较 \+*P<0.05
2.2 大剂量照射对sIL-2R含量的影响
单纯给予D\-2大剂量照射后48小时，培养细胞上清中sIL-2R含量的变化见表2。表中结果可见，4Gy和6Gy辐射明显降低培养上清中sIL-2R的含量。表2 大剂量照射对sIL-2R含量的影响 照射剂量(Gy)
, 百拇医药
sIL-2R
(μ/ml)
照射剂量
(Gy)
sIL-2R
(μ/ml)
0
234.89±65.38
4
97.67±21.96**
2
174.67±57.42
, 百拇医药
6
124.67±46.76**
2.3 低剂量辐射诱导sIL-2R的适应性反应
D\-1剂量为0.075Gy、D\-2剂量为1.5Gy，实际所得结果见表3。由表可见，1.5Gy中等剂量照射后72h sIL-2R含量显著高于假照射组(P<0.01)，0.075Gy预照射组sIL-2R含量却显著低于单纯D\-2组(P<0.05)，其水平与假照组相近。表3 低剂量照射诱导sIL-2R的适应性反应(U/ml) 培养时间(h)
照射剂量(Gy)
0
1.5
0.075±1.5
, 百拇医药
48
278.33±91.60
388.00±96.54
329.33±131.87
72
696.80±237.34
1266.00±283.60**
808.00±283.64*
注：n=6**P<0.01与0Gy组相比较； \+*P<0.05与1.5Gy组相比较
3 讨论
, http://www.100md.com
自从Robin等[4]首次报告sIL-2R以来，国内外学者对其进行了大量研究。推测sIL2R在免疫调节中的功能是[5]：①mIL-2Rd的主要廓清方式。②一种重要的免疫抑制物，与mIL-2R竞争结合IL-2，减弱IL-2的作用。③IL-2的转运蛋白。本实验结果提示0.075Gy照射可降低人外周血淋巴细胞mIL-2Rd的脱落，从而提高T细胞的活化度和免疫功能。1.5Gy中等剂量照射明显促进mIL-2Rd向培养液中的脱落，增强sIL-2R与mIL-2Rd间的竞争而抑制IL-2作用的发挥。0.075预照射则可减轻这种脱落和竞争，促T细胞继续发挥较强的免疫功能。此时，mIL-2Rd表达受到刺激(为对照组的114.20%，未发表资料)。大剂量照射则导致细胞凋亡或死亡，从而使mIL-2Rd不能从细胞膜上裂解下来[6]，故此，4Gy及6Gy照射后上清中sIL-2R含量显著降低。
本实验结果表明，低剂量辐射可调节淋巴细胞表面某些蛋白分子表达或蛋白分子间的相互作用而诱导适应性反应。
, http://www.100md.com
本课题受国家自然科学基金资助参考文献
1 鞠桂荥，宋春华，齐进，等.小剂量单次全身上射诱导小鼠免疫适应性反应的剂量与时间研究.辐射研究与辐射工艺学报，1995，5：95.
2 杨占山，朱寿彭，梅淑琴.浓缩轴内染污诱导免疫细胞的适应性反应.中华放射医学与防护杂志，1994，6：379.
3 富宁，王桂兰，王利，等.单去隆与多去隆双抗体夹心法测定sIL-2R.中国免疫学杂志，1991，7：278.
4 Robin LA,Kurman CC,Fritz ME,et al.Soluble interleukin 2 receptors released from activated human lymphoid cells in vitro.J Immunol,1985,135:3172.
5 杨忠珍.免疫生物工程纲要与技术.长春：吉林科技出版社，1991，67～68.
6 Reske-Kunz AB,Osawa H,Josimovic-Alasevic O,et al.Soluble interleukin 2 receptors are releated by long term-cultured insulin-specific T cells transiently after contact with antigen.J Immunol,1987,138:192.
(收稿：1997-01-14 修回：1997-06-22), 百拇医药