过量受照人员照后22～31年细胞遗传学随访观察
作者：小剂量效应观察组
单位：白玉书(100088 北京，卫生部工业卫生实验所)
关键词：
中华放射医学与防护杂志000211 外周血淋巴细胞染色体畸变分析可察觉早期的辐射损伤，并用作“生物剂量测定方法”估算辐射剂量，同时也是评价远后效应的重要指标。微核测定法，不仅可以用作生物剂量估算，而且在远后效应研究中也得到了广泛应用。本文为过量受照人员照后22～31年细胞遗传学随访结果。
一、材料和方法
1.人员受照情况和分组：本次观察过量受照人员53例，其中29例为一次性外照射，按受照时间分为Ⅰ和Ⅱ组。Ⅰ组15例事故发生在1966年，Ⅱ组14例发生在1975年。第Ⅲ组也为一次外照射，因故未能进行随访。其余24例为裂变产物的内污染，发生在1971～1972年，列为第Ⅳ组。一次性外照射组剂量用胶片或玻璃剂量仪测量，内污染组用整体测量估算剂量。同时设配对对照组。所有受检人员均为男性。剂量分组见表1。
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2.标本的制备和观察
(1)染色体：采用微量全血法，培养开始加秋水仙素，最终浓度为0.03 μg/ml，37℃条件下培养48 h，常规制片。主要观察和记录染色体型畸变，包括双着丝粒体、着丝粒环、无着断片和易位等。只计数(46±1)个染色体的细胞，每例观察200个中期分裂相，一个观察者见到的畸变必由另一观察者予以审核。
(2)微核：采用常规培养法，培养72 h，不加秋水仙素，其他条件同染色体培养。制片时，加低渗液后立即固定，使细胞膨胀而胞浆保持完整。每例观察2 000个转化的淋巴细胞，转化标准见参考文献[1]。
表1 受照人员的剂量和分组 组别
例数
年龄(岁)
, 百拇医药
(
±s)
照后时间
(年)
剂量范围
(Gy)
观察例数
染色体畸变
微核
对照
55
50.2±6.8
-
, 百拇医药
0
55
53
Ⅰ
15
57.9±6.0
31
0.10～0.24
15
12
Ⅱ
14
48.4±6.7
, 百拇医药
22
0.10～0.25
14
14
Ⅳ
24
46.3±2.2
26
0.10～0.33
24
24
二、结果
1.染色体畸变：染色体畸变、畸变细胞均以百分率表示，其余为每100个细胞所见畸变数。将受照组与对照组进行比较，结果列于表2。从表2可见，受照组各类染色体畸变率皆比对照组高，经χ2检验，无着丝粒畸变和畸变细胞两组间差异有非常显著性(P<0.01)。由于总畸变和畸变细胞相等，故只列出畸变细胞，照后31年的第Ⅰ组和照后26年的第Ⅳ组，无着丝粒畸变和畸变细胞仍比对照组高，χ2检验表明差异有非常显著性。
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2.微核：微核以千分数表示，微核细胞率为千分率，微核率为观察1 000个细胞所见微核，本次随访观察到受照组微核细胞率和微核率明显高于对照组，经χ2检验，差异具有非常显著性。将受照各组与对照组结果进行比较除第Ⅱ组外，受照组微核细胞率和微核率比对照组有非常显著意义的增加(P<0.01)，与染色体畸变的结果相一致，见表3。
表2 各组染色体畸变率及其与对照组间的显著性检验(p±sp，%) 组别
剂量(Gy)
(±s)
分析细胞
(个)
双着丝粒体
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(%)
无着丝粒畸变
(%)
畸变细胞
(%)
对照
0
10 471
0.02±0.01
0.15±0.04
0.17±0.04
Ⅰ
0.18±0.05
, 百拇医药
2 774
0
0.47±0.13**
0.50±0.13**
Ⅱ
0.16±0.05
2 207
0
0.09±0.06
0.09±0.06
Ⅳ
0.15±0.06
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4 700
0.11±0.05
0.64±0.12
0.81±0.13**
受照组合计
9 681
0.05±0.02
0.46±0.07**
0.56±0.08**
注：与对照比，**P<0.01表3 受照各组与对照组间微核率(‰)的比较 组 别
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例数
观察细胞
(个)
微核细胞率
(p±sp，‰)
微核率
(‰)
对照
53
106 000
1.29±0.11
1.38±0.11
Ⅰ
, 百拇医药
12
17 000
4.29±0.50**
5.00±0.54**
Ⅱ
14
28 000
1.39±0.22
1.43±0.22
Ⅳ
24
47 000
, 百拇医药
1.96±0.20**
2.04±0.21**
受照组合计
92 000
2.22±0.16**
2.40±0.16**
注：与对照组比，**P<0.01 三、讨论
在1981年(照后4～15年)对该受照人群第一次进行细胞遗传学随访观察。结果表明，受照组染色体畸变率和微核率明显高于对照组，经χ2检验差异有显著或非常显著性。但此时，染色体畸变率与受照剂量之间已不存在相关关系。同时观察到，低剂量受照人员染色体畸变具有以下特点：①畸变以无着丝粒断片为主；②双着丝粒体和着丝粒环多不伴断片；③畸变细胞和总畸变几乎相等[2]。本次为第6次随访观察(照后22～31年)。此时，受照组平均染色体畸变率仍明显高于对照组(P<0.01)，这与Awa等(1971)对日本原爆幸存者观察的结果相一致。该作者调查了213名原爆幸存者，发现在受照23～24年时，染色体畸变仍高于对照组。
, 百拇医药
Ohtaki等(1982)[3]比较研究了常规法和G-显带法染色体畸变的类型和频率，该研究选择了23例广岛原爆幸存者，剂量在1 Gy以上，结果发现此时稳定性畸变检出率明显高于非稳定性畸变。金璀珍等[4]用G-显带方法对上海6.25事故受照者，在照后4.5年进行细胞遗传学随访观察，发现在所分析的250个G-带细胞中， 有114个畸变细胞， 其中稳定性畸变82个，占71.9%，都表明G-显带是观察稳定性畸变良好方法。近十年来，发展起来的荧光原位杂交技术(FISH)，已用于原爆幸存者和事故受照者易位频率的观察，结果与G-显带的结果接近[5]，认为是一种对早先受照者剂量重建有发展前途的方法。本次随访理应采用G带方法，但由于受检者分布在十几个省市，有的实验室限于条件，无法开展显带技术，至于FISH方法，费用昂贵，目前尚无承受能力，也不能适用于我们的研究中。此次观察，采用培养开始加秋水仙素法，分析第一次有丝分裂细胞，除观察非稳定性畸变外，遇到明显的易位或缺失也进行记录，考虑到辐射可能诱发白血病的问题，特别对G组染色体的观察，未发现Ph染色体。通过本次随访结果，表明在受照远期用常规染色体畸变分析方法，仍可作为随访观察指标。当然，随着我国经济的发展，科研条件的改善，应尽早采用先进的技术和方法进行此类研究。
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目前有3种方法测量外周血淋巴细胞微核。国内有些实验室已开展胞质分裂阻断微核(CB)法，由于松胞素-B较贵，故本次随访仍采用常规培养法。从结果可见，照后远期受照组微核率比对照组仍有显著意义的增加。作者认为，在不具备开展CB法的条件下，目前仍可采用常规培养法作为远后效应的观察指标。本次随访参加单位较多，各实验室条件不尽相同，协作组十分重视实验方法和判断标准的统一，并设配对对照组，使所得数据更加可靠。
本文协作单位：卫生部工业卫生实验所，解放军总装备部军事医学研究所，北京放射医学研究所，河南省职业病防治所，四川省放射卫生防护所，空军第四研究所，山东省医科院放射医学研究所，河北省放射卫生研究所，同济医科大学核医学科，陕西省卫生防疫站，山西省卫生防疫站，天津市职业病防治院，辽宁省劳动卫生职业病防治所，内蒙古自治区放射卫生防护所
参考文献
1，白玉书，张秀霞，关树荣.60Co γ线照射离体血诱发的淋巴细胞微核率与剂量关系.遗传，1982，4：7-10.
, 百拇医药
2，低剂量受照人员医学效应观察协作组.受一次低剂量事故外照射人员照后4～15年细胞遗传学观察.辐射防护，1986，6：56-60.
3，Ohtaki K,Shimba H,Awa AA,et al. Comparison of type and frequency of chromosome aberrations by conventional and G-staining methods in Hiroshima atomic bomb survivors. J Radiat Res,1982,23:441-449.
4，王继先，金璀珍，白玉书，等.放射生物剂量学.北京：原子能出版社，1997.50-51.
5，Lucas JN,Awa AA,Straume T,et al. Rapid translocation frequency analysis in human decades after exposure to ionizing radiation. Int J Radiat Biol,1992,62:53-63.
(收稿日期：1999-07-08), 百拇医药
单位：白玉书(100088 北京，卫生部工业卫生实验所)
关键词：
中华放射医学与防护杂志000211 外周血淋巴细胞染色体畸变分析可察觉早期的辐射损伤，并用作“生物剂量测定方法”估算辐射剂量，同时也是评价远后效应的重要指标。微核测定法，不仅可以用作生物剂量估算，而且在远后效应研究中也得到了广泛应用。本文为过量受照人员照后22～31年细胞遗传学随访结果。
一、材料和方法
1.人员受照情况和分组：本次观察过量受照人员53例，其中29例为一次性外照射，按受照时间分为Ⅰ和Ⅱ组。Ⅰ组15例事故发生在1966年，Ⅱ组14例发生在1975年。第Ⅲ组也为一次外照射，因故未能进行随访。其余24例为裂变产物的内污染，发生在1971～1972年，列为第Ⅳ组。一次性外照射组剂量用胶片或玻璃剂量仪测量，内污染组用整体测量估算剂量。同时设配对对照组。所有受检人员均为男性。剂量分组见表1。
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2.标本的制备和观察
(1)染色体：采用微量全血法，培养开始加秋水仙素，最终浓度为0.03 μg/ml，37℃条件下培养48 h，常规制片。主要观察和记录染色体型畸变，包括双着丝粒体、着丝粒环、无着断片和易位等。只计数(46±1)个染色体的细胞，每例观察200个中期分裂相，一个观察者见到的畸变必由另一观察者予以审核。
(2)微核：采用常规培养法，培养72 h，不加秋水仙素，其他条件同染色体培养。制片时，加低渗液后立即固定，使细胞膨胀而胞浆保持完整。每例观察2 000个转化的淋巴细胞，转化标准见参考文献[1]。
表1 受照人员的剂量和分组 组别
例数
年龄(岁)
, 百拇医药
(
±s)照后时间
(年)
剂量范围
(Gy)
观察例数
染色体畸变
微核
对照
55
50.2±6.8
-
, 百拇医药
0
55
53
Ⅰ
15
57.9±6.0
31
0.10～0.24
15
12
Ⅱ
14
48.4±6.7
, 百拇医药
22
0.10～0.25
14
14
Ⅳ
24
46.3±2.2
26
0.10～0.33
24
24
二、结果
1.染色体畸变：染色体畸变、畸变细胞均以百分率表示，其余为每100个细胞所见畸变数。将受照组与对照组进行比较，结果列于表2。从表2可见，受照组各类染色体畸变率皆比对照组高，经χ2检验，无着丝粒畸变和畸变细胞两组间差异有非常显著性(P<0.01)。由于总畸变和畸变细胞相等，故只列出畸变细胞，照后31年的第Ⅰ组和照后26年的第Ⅳ组，无着丝粒畸变和畸变细胞仍比对照组高，χ2检验表明差异有非常显著性。
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2.微核：微核以千分数表示，微核细胞率为千分率，微核率为观察1 000个细胞所见微核，本次随访观察到受照组微核细胞率和微核率明显高于对照组，经χ2检验，差异具有非常显著性。将受照各组与对照组结果进行比较除第Ⅱ组外，受照组微核细胞率和微核率比对照组有非常显著意义的增加(P<0.01)，与染色体畸变的结果相一致，见表3。
表2 各组染色体畸变率及其与对照组间的显著性检验(p±sp，%) 组别
剂量(Gy)
(
±s)分析细胞
(个)
双着丝粒体
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(%)
无着丝粒畸变
(%)
畸变细胞
(%)
对照
0
10 471
0.02±0.01
0.15±0.04
0.17±0.04
Ⅰ
0.18±0.05
, 百拇医药
2 774
0
0.47±0.13**
0.50±0.13**
Ⅱ
0.16±0.05
2 207
0
0.09±0.06
0.09±0.06
Ⅳ
0.15±0.06
, http://www.100md.com
4 700
0.11±0.05
0.64±0.12
0.81±0.13**
受照组合计
9 681
0.05±0.02
0.46±0.07**
0.56±0.08**
注：与对照比，**P<0.01表3 受照各组与对照组间微核率(‰)的比较 组 别
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例数
观察细胞
(个)
微核细胞率
(p±sp，‰)
微核率
(‰)
对照
53
106 000
1.29±0.11
1.38±0.11
Ⅰ
, 百拇医药
12
17 000
4.29±0.50**
5.00±0.54**
Ⅱ
14
28 000
1.39±0.22
1.43±0.22
Ⅳ
24
47 000
, 百拇医药
1.96±0.20**
2.04±0.21**
受照组合计
92 000
2.22±0.16**
2.40±0.16**
注：与对照组比，**P<0.01 三、讨论
在1981年(照后4～15年)对该受照人群第一次进行细胞遗传学随访观察。结果表明，受照组染色体畸变率和微核率明显高于对照组，经χ2检验差异有显著或非常显著性。但此时，染色体畸变率与受照剂量之间已不存在相关关系。同时观察到，低剂量受照人员染色体畸变具有以下特点：①畸变以无着丝粒断片为主；②双着丝粒体和着丝粒环多不伴断片；③畸变细胞和总畸变几乎相等[2]。本次为第6次随访观察(照后22～31年)。此时，受照组平均染色体畸变率仍明显高于对照组(P<0.01)，这与Awa等(1971)对日本原爆幸存者观察的结果相一致。该作者调查了213名原爆幸存者，发现在受照23～24年时，染色体畸变仍高于对照组。
, 百拇医药
Ohtaki等(1982)[3]比较研究了常规法和G-显带法染色体畸变的类型和频率，该研究选择了23例广岛原爆幸存者，剂量在1 Gy以上，结果发现此时稳定性畸变检出率明显高于非稳定性畸变。金璀珍等[4]用G-显带方法对上海6.25事故受照者，在照后4.5年进行细胞遗传学随访观察，发现在所分析的250个G-带细胞中， 有114个畸变细胞， 其中稳定性畸变82个，占71.9%，都表明G-显带是观察稳定性畸变良好方法。近十年来，发展起来的荧光原位杂交技术(FISH)，已用于原爆幸存者和事故受照者易位频率的观察，结果与G-显带的结果接近[5]，认为是一种对早先受照者剂量重建有发展前途的方法。本次随访理应采用G带方法，但由于受检者分布在十几个省市，有的实验室限于条件，无法开展显带技术，至于FISH方法，费用昂贵，目前尚无承受能力，也不能适用于我们的研究中。此次观察，采用培养开始加秋水仙素法，分析第一次有丝分裂细胞，除观察非稳定性畸变外，遇到明显的易位或缺失也进行记录，考虑到辐射可能诱发白血病的问题，特别对G组染色体的观察，未发现Ph染色体。通过本次随访结果，表明在受照远期用常规染色体畸变分析方法，仍可作为随访观察指标。当然，随着我国经济的发展，科研条件的改善，应尽早采用先进的技术和方法进行此类研究。
, http://www.100md.com
目前有3种方法测量外周血淋巴细胞微核。国内有些实验室已开展胞质分裂阻断微核(CB)法，由于松胞素-B较贵，故本次随访仍采用常规培养法。从结果可见，照后远期受照组微核率比对照组仍有显著意义的增加。作者认为，在不具备开展CB法的条件下，目前仍可采用常规培养法作为远后效应的观察指标。本次随访参加单位较多，各实验室条件不尽相同，协作组十分重视实验方法和判断标准的统一，并设配对对照组，使所得数据更加可靠。
本文协作单位：卫生部工业卫生实验所，解放军总装备部军事医学研究所，北京放射医学研究所，河南省职业病防治所，四川省放射卫生防护所，空军第四研究所，山东省医科院放射医学研究所，河北省放射卫生研究所，同济医科大学核医学科，陕西省卫生防疫站，山西省卫生防疫站，天津市职业病防治院，辽宁省劳动卫生职业病防治所，内蒙古自治区放射卫生防护所
参考文献
1，白玉书，张秀霞，关树荣.60Co γ线照射离体血诱发的淋巴细胞微核率与剂量关系.遗传，1982，4：7-10.
, 百拇医药
2，低剂量受照人员医学效应观察协作组.受一次低剂量事故外照射人员照后4～15年细胞遗传学观察.辐射防护，1986，6：56-60.
3，Ohtaki K,Shimba H,Awa AA,et al. Comparison of type and frequency of chromosome aberrations by conventional and G-staining methods in Hiroshima atomic bomb survivors. J Radiat Res,1982,23:441-449.
4，王继先，金璀珍，白玉书，等.放射生物剂量学.北京：原子能出版社，1997.50-51.
5，Lucas JN,Awa AA,Straume T,et al. Rapid translocation frequency analysis in human decades after exposure to ionizing radiation. Int J Radiat Biol,1992,62:53-63.
(收稿日期：1999-07-08), 百拇医药