葡萄胎的分子遗传学分类与大体病理类型的关系
作者：张小为 张丽珠 周羡梅 顾玲芬
单位：100083 北京医科大学第三临床医学院妇产科
关键词：葡萄胎；遗传学；生物化学；病理学
中华妇产科杂志980311 【摘要】 目的 探讨葡萄胎的遗传学类型与病理形态学的关系。方法 采用DNA限制性片段长度多态性分析的方法研究32例葡萄胎标本。结果 DNA完全来自父源性的葡萄胎有21例，其中大体病理形态呈完全性葡萄胎者16例，占76%(16/21)，部分性葡萄胎者5例，占24%(5/21)；DNA来自双亲的葡萄胎11例，其中大体病理形态呈完全性葡萄胎者5例，占45%(5/11)，部分性葡萄胎者6例，占55%(6/11)；χ2检验结果表明葡萄胎的病理学类型与遗传学类型无明显的平行关系(P>0.10)。结论 本研究结果不支持葡萄胎的遗传学类型与大体病理类型间有平行关系的论点。
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The Relationship between the Pathological Classifications and Molecular Genetics of Hydatidiform Moles Zhang Xiaowei, Zhang Lizhu, Zhou Xianmei, et al. The Third Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100083
【Abstract】 Objective To study the relationship between the pathological classification and molecular genetics of hydatidiform mole. Method 32 cases of hydatidiform mole were analyzed by DNA restriction fragment length polymorphism (RFLP， hybridized with the probe 33.15). Results DNA from only paternal origin was found in 21, and from both parents in 11. In the formeron the basis of pathological characteristics, the complete hydatidiform mole (CHM) and the partial hydatidiform mole (PHM) were 16 (76%, 16/21) and 5 (24%, 5/21) respectively, and in the later CHM and PHM were 5 (45%, 5/11) and 6 (55%, 6/11), respectively. Conclusion There is not much correlation between pathological classification and molecular genetics of hydatidiform mole.
, 百拇医药
【Key words】 Hydatidiform mole Genetics, biochemical Pathology
传统病理学根据葡萄胎的大体形态特征将其分为两类：完全性葡萄胎(complete hydatidiform mole, CHM)和部分性葡萄胎(partial hydatidiform mole, PHM)[1]。随着遗传学技术的发展和运用，人们对葡萄胎有了进一步的认识，发现了其遗传物质有单纯来自父方和来自父母双方的情况[2，3]，从而将葡萄胎在遗传学上分为两种不同的类型。不少学者认为病理学完全性葡萄胎的遗传物质单纯来自父方，而部分性葡萄胎的遗传物质则是来自父母双方[4]；而另外一些学者的研究结果并不支持这样的观点[5]。本研究首次采用中国妇女的葡萄胎标本对其遗传分类与大体病理形态的关系作了初步分析。
材料与方法
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一、标本来源及采集方法
本研究中的葡萄胎标本，采集于北京医科大学第三临床医学院、北京市妇产医院及友谊医院等。从吸宫术获得的葡萄胎标本中取出5～10个水泡状组织放入预冷的生理盐水中，去除血凝块后，用生理盐水冲洗3次以上，彻底去除血液，置-20℃下冻存。抽取夫妇双方静脉血2 ml用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)抗凝。
二、实验方法
1.吸宫术获得的每一份标本都经过仔细检查, 完全为水泡组织无绒毛结构者定为大体病理学完全性葡萄胎；而水泡组织和绒毛组织兼在者为部分性葡萄胎。
2.血液DNA提取：按参考文献[6]方法进行。
3.葡萄胎标本DNA的提取：用眼科小镊子夹取5～10个水泡状葡萄胎组织加入3 ml TNE(含20 mmol/L Tris, 100 mmol/L NaCl和50 mmol/L EDTA, pH7.5)，用玻璃的组织研磨器于0℃下匀浆2～5分钟，加入蛋白酶K和SDS(终浓度分别为100 μg/ml和0.5%)，56℃下消化2～5小时，等体积的饱和酚抽提2次，等体积的氯仿/异戊醇(24/1)抽提1次，用2.5体积的无水冷乙醇沉淀DNA，去乙醇干燥DNA溶解于TE(含10 mmol/L Tris和1 mmol/L EDTA, pH7.5)溶液中。
, 百拇医药
4.DNA的限制性内切酶消化、电泳分离、探针制备、标记、Southern吸印、杂交等, 按参考文献[6]方法。
结果
32例葡萄胎标本获得了实验结果(附表)，其中DNA完全来自父方者21例，占66%(21/32)；DNA来自父母双方者11例，占34%(11/31)。
附表 葡萄胎病理类型和遗传类型的关系 类别
总例数
DNA单纯父源
DNA来自双亲
例数
百分比(%)
, http://www.100md.com 例数
百分比(%)
完全性
21
16
76
5
24
部分性
11
5
45
6
55
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合计
32
21
66
11
34
注： P>0.10 病理学完全性葡萄胎21例，其中16例DNA完全来自父方，占76%(16/21)，其余5例DNA来自父母双方，占24%(5/21)；病理学部分性葡萄胎11例，DNA完全来自父方者5例，占45%(5/11)，其余6例DNA来自父母双方，占55%(6/11)。
χ2检验结果表明，葡萄胎的病理学类型与遗传学类型无明显的平行关系(P>0.1)。
讨论
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在文献报道[2～4]中，大都认为病理学完全性葡萄胎大多为DNA完全来自父源，而部分性葡萄胎大多为DNA 来自双亲。但也有学者的研究结果认为并不是完全如此，如Kovacs等人[5]应用DNA指纹检测了22例完全性葡萄胎，60%为DNA完全父源性纯合子，40%为杂合子，其中一半含有父母双方的DNA，即完全性葡萄胎中20%含有父母双方的DNA。而本研究中21例完全性葡萄胎中有5例是DNA来自父母双方，占24%，与Kovacs等人的结果很接近。
近年来分子生物学方法被日趋广泛地用于葡萄胎遗传构成的研究，越来越多的人发现DNA完全性父源与病理学的完全性葡萄胎并不吻合[7]。Yabe[8]认为病理学的部分性葡萄胎中仅有80%为三倍体DNA，他们分析了4例病理学诊断为部分性葡萄胎的标本，DNA都是雄性起源，无母方成分，本研究的结果中，亦有45%的部分性葡萄胎DNA只来自父源。统计学分析证明葡萄胎的遗传学类型与病理学分类无明显的对应关系。
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由于不同病理学家之间对相同标本作出同样诊断的可能性为55%～75%[9～12]，可见人为的主观因素严重地影响着病理学诊断的准确性，而遗传学诊断方法则显出无与伦比的优势，所以越来越多的学者已开始采用遗传学诊断方法作为研究葡萄胎的手段，这对于葡萄胎的发病机制、分类和不同临床转归相关因素的研究具有重要意义。
参考文献
1 王淑贞主编. 实用妇产科学. 北京: 人民卫生出版社, 1987. 733-745.
2 Ko TM. Restriction fragment length polymophisms analysis to study the genetic origin of complete hydatidiform mole. Am J Obstet Gynecol, 1991, 164: 901-904.
, 百拇医药
3 Szulman AE. The clinical pathologic profile of the partial hydatidiform mole. Obstet Gynecol，1982, 59:597-601.
4 Lawler SD. A prospective genetic study of the partial hydatidiform mole. Am J Obstete Gynecol, 1991, 164:1270-1275.
5 Kovacs BW. Molecular genetic analysis of complete hydatidiform mole. Cancer Genet Cytogenet， 1991, 54:143-148.
6 张小为, 张丽珠, 周羡梅, 等. 葡萄胎的DNA指纹及其与恶变的关系. 中华妇产科杂志, 1996, 31:203-206.
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7 Lane SA. Diagnosis of complete molar pregnancy by microsatellites in archival material. J Clin Pathol, 1993, 46:346-351.
8 Yabe N. Genetic analysis of hydatidiform moles utilizing the oligonucleotide DNA typing of the HLA-ORB gene. Placenta, 1994, 15:541-547.
9 Abaci F. Charges of the placenta and embryo in early spontaneous abortion. Am J Obstet Gynecol, 1968, 102:252-255.
10 Jarey H. Discrepancies in the histological diagnosis of hydatidiform mole. Br J Obstet Gynecol, 1979, 86:480-484.
11 Conran RM. Hydatidiform moles: a clinicl pathologic study (AB). Am J Clinpathol, 1991,96:408-413.
12 Messerli ML. Inter-and intra-pathologist variability in the diagnosis of gestational trophoblastic neoplasm. Obstet Gynecol, 1987, 69:622-624.
(收稿：1997-05-22 修回：1997-12-23), http://www.100md.com
单位：100083 北京医科大学第三临床医学院妇产科
关键词：葡萄胎；遗传学；生物化学；病理学
中华妇产科杂志980311 【摘要】 目的 探讨葡萄胎的遗传学类型与病理形态学的关系。方法 采用DNA限制性片段长度多态性分析的方法研究32例葡萄胎标本。结果 DNA完全来自父源性的葡萄胎有21例，其中大体病理形态呈完全性葡萄胎者16例，占76%(16/21)，部分性葡萄胎者5例，占24%(5/21)；DNA来自双亲的葡萄胎11例，其中大体病理形态呈完全性葡萄胎者5例，占45%(5/11)，部分性葡萄胎者6例，占55%(6/11)；χ2检验结果表明葡萄胎的病理学类型与遗传学类型无明显的平行关系(P>0.10)。结论 本研究结果不支持葡萄胎的遗传学类型与大体病理类型间有平行关系的论点。
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The Relationship between the Pathological Classifications and Molecular Genetics of Hydatidiform Moles Zhang Xiaowei, Zhang Lizhu, Zhou Xianmei, et al. The Third Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100083
【Abstract】 Objective To study the relationship between the pathological classification and molecular genetics of hydatidiform mole. Method 32 cases of hydatidiform mole were analyzed by DNA restriction fragment length polymorphism (RFLP， hybridized with the probe 33.15). Results DNA from only paternal origin was found in 21, and from both parents in 11. In the formeron the basis of pathological characteristics, the complete hydatidiform mole (CHM) and the partial hydatidiform mole (PHM) were 16 (76%, 16/21) and 5 (24%, 5/21) respectively, and in the later CHM and PHM were 5 (45%, 5/11) and 6 (55%, 6/11), respectively. Conclusion There is not much correlation between pathological classification and molecular genetics of hydatidiform mole.
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【Key words】 Hydatidiform mole Genetics, biochemical Pathology
传统病理学根据葡萄胎的大体形态特征将其分为两类：完全性葡萄胎(complete hydatidiform mole, CHM)和部分性葡萄胎(partial hydatidiform mole, PHM)[1]。随着遗传学技术的发展和运用，人们对葡萄胎有了进一步的认识，发现了其遗传物质有单纯来自父方和来自父母双方的情况[2，3]，从而将葡萄胎在遗传学上分为两种不同的类型。不少学者认为病理学完全性葡萄胎的遗传物质单纯来自父方，而部分性葡萄胎的遗传物质则是来自父母双方[4]；而另外一些学者的研究结果并不支持这样的观点[5]。本研究首次采用中国妇女的葡萄胎标本对其遗传分类与大体病理形态的关系作了初步分析。
材料与方法
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一、标本来源及采集方法
本研究中的葡萄胎标本，采集于北京医科大学第三临床医学院、北京市妇产医院及友谊医院等。从吸宫术获得的葡萄胎标本中取出5～10个水泡状组织放入预冷的生理盐水中，去除血凝块后，用生理盐水冲洗3次以上，彻底去除血液，置-20℃下冻存。抽取夫妇双方静脉血2 ml用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)抗凝。
二、实验方法
1.吸宫术获得的每一份标本都经过仔细检查, 完全为水泡组织无绒毛结构者定为大体病理学完全性葡萄胎；而水泡组织和绒毛组织兼在者为部分性葡萄胎。
2.血液DNA提取：按参考文献[6]方法进行。
3.葡萄胎标本DNA的提取：用眼科小镊子夹取5～10个水泡状葡萄胎组织加入3 ml TNE(含20 mmol/L Tris, 100 mmol/L NaCl和50 mmol/L EDTA, pH7.5)，用玻璃的组织研磨器于0℃下匀浆2～5分钟，加入蛋白酶K和SDS(终浓度分别为100 μg/ml和0.5%)，56℃下消化2～5小时，等体积的饱和酚抽提2次，等体积的氯仿/异戊醇(24/1)抽提1次，用2.5体积的无水冷乙醇沉淀DNA，去乙醇干燥DNA溶解于TE(含10 mmol/L Tris和1 mmol/L EDTA, pH7.5)溶液中。
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4.DNA的限制性内切酶消化、电泳分离、探针制备、标记、Southern吸印、杂交等, 按参考文献[6]方法。
结果
32例葡萄胎标本获得了实验结果(附表)，其中DNA完全来自父方者21例，占66%(21/32)；DNA来自父母双方者11例，占34%(11/31)。
附表 葡萄胎病理类型和遗传类型的关系 类别
总例数
DNA单纯父源
DNA来自双亲
例数
百分比(%)
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百分比(%)
完全性
21
16
76
5
24
部分性
11
5
45
6
55
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合计
32
21
66
11
34
注： P>0.10 病理学完全性葡萄胎21例，其中16例DNA完全来自父方，占76%(16/21)，其余5例DNA来自父母双方，占24%(5/21)；病理学部分性葡萄胎11例，DNA完全来自父方者5例，占45%(5/11)，其余6例DNA来自父母双方，占55%(6/11)。
χ2检验结果表明，葡萄胎的病理学类型与遗传学类型无明显的平行关系(P>0.1)。
讨论
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在文献报道[2～4]中，大都认为病理学完全性葡萄胎大多为DNA完全来自父源，而部分性葡萄胎大多为DNA 来自双亲。但也有学者的研究结果认为并不是完全如此，如Kovacs等人[5]应用DNA指纹检测了22例完全性葡萄胎，60%为DNA完全父源性纯合子，40%为杂合子，其中一半含有父母双方的DNA，即完全性葡萄胎中20%含有父母双方的DNA。而本研究中21例完全性葡萄胎中有5例是DNA来自父母双方，占24%，与Kovacs等人的结果很接近。
近年来分子生物学方法被日趋广泛地用于葡萄胎遗传构成的研究，越来越多的人发现DNA完全性父源与病理学的完全性葡萄胎并不吻合[7]。Yabe[8]认为病理学的部分性葡萄胎中仅有80%为三倍体DNA，他们分析了4例病理学诊断为部分性葡萄胎的标本，DNA都是雄性起源，无母方成分，本研究的结果中，亦有45%的部分性葡萄胎DNA只来自父源。统计学分析证明葡萄胎的遗传学类型与病理学分类无明显的对应关系。
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由于不同病理学家之间对相同标本作出同样诊断的可能性为55%～75%[9～12]，可见人为的主观因素严重地影响着病理学诊断的准确性，而遗传学诊断方法则显出无与伦比的优势，所以越来越多的学者已开始采用遗传学诊断方法作为研究葡萄胎的手段，这对于葡萄胎的发病机制、分类和不同临床转归相关因素的研究具有重要意义。
参考文献
1 王淑贞主编. 实用妇产科学. 北京: 人民卫生出版社, 1987. 733-745.
2 Ko TM. Restriction fragment length polymophisms analysis to study the genetic origin of complete hydatidiform mole. Am J Obstet Gynecol, 1991, 164: 901-904.
, 百拇医药
3 Szulman AE. The clinical pathologic profile of the partial hydatidiform mole. Obstet Gynecol，1982, 59:597-601.
4 Lawler SD. A prospective genetic study of the partial hydatidiform mole. Am J Obstete Gynecol, 1991, 164:1270-1275.
5 Kovacs BW. Molecular genetic analysis of complete hydatidiform mole. Cancer Genet Cytogenet， 1991, 54:143-148.
6 张小为, 张丽珠, 周羡梅, 等. 葡萄胎的DNA指纹及其与恶变的关系. 中华妇产科杂志, 1996, 31:203-206.
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7 Lane SA. Diagnosis of complete molar pregnancy by microsatellites in archival material. J Clin Pathol, 1993, 46:346-351.
8 Yabe N. Genetic analysis of hydatidiform moles utilizing the oligonucleotide DNA typing of the HLA-ORB gene. Placenta, 1994, 15:541-547.
9 Abaci F. Charges of the placenta and embryo in early spontaneous abortion. Am J Obstet Gynecol, 1968, 102:252-255.
10 Jarey H. Discrepancies in the histological diagnosis of hydatidiform mole. Br J Obstet Gynecol, 1979, 86:480-484.
11 Conran RM. Hydatidiform moles: a clinicl pathologic study (AB). Am J Clinpathol, 1991,96:408-413.
12 Messerli ML. Inter-and intra-pathologist variability in the diagnosis of gestational trophoblastic neoplasm. Obstet Gynecol, 1987, 69:622-624.
(收稿：1997-05-22 修回：1997-12-23), http://www.100md.com