卵巢癌组织中多种癌基因蛋白同时表达的临床意义
作者：李广太 焦书竹 岳晓莉 牛春莲 李红宇 王振琴
单位：300052 天津医科大学总医院妇科(李广太，焦书竹)；河南省安阳市肿瘤医院(岳晓莉，牛春莲，李红宇)；河南省安阳市灯塔医院(王振琴)
关键词：
中华妇产科杂志980420 同时检测103例卵巢癌组织癌基因neu和ras、抑癌基因p53和p16、抗凋亡基因bcl-2和转移抑制基因nm-23等6种癌蛋白(oncoprotein)的变化，探讨这些癌蛋白同时异常表达与卵巢癌病理分级、临床分期及预后的关系。
一、材料和方法
1.研究对象：103例卵巢癌组织蜡块标本分别收集自天津医科大学总医院妇科和河南省安阳市肿瘤医院。并以32例良性卵巢肿瘤，30例正常卵巢组织作为对照组。
, 百拇医药
2.主要试剂和方法：所有试剂分别购自DAKO、Santa Cruze及Vector公司，按试剂说明行常规ABC免疫组化染色。单克隆抗体的工作浓度为：neu 1∶50、ras 1∶20、bcl-2 1∶40、nm-23 1∶20、p53 1∶200，多克隆抗体p16的工作浓度为1∶300。每次染色均设阴性和阳性对照。染色结果的判定参照文献[1]，按染色强度和阳性细胞所占比例进行综合评价。凡染色≥(++)者即属于过度表达。
3.统计学处理：组间比较采用χ2检验和相关分析；生存分析采用P-L法、对数秩和检验和Cox比例风险回归分析。
二、结果
1.6种癌蛋白变化情况及相关分析：neu、ras、bcl-2、p53、nm-23及p16在正常卵巢和良性卵巢肿瘤中的阳性表达率分别为16.7%和28.1%、16.7%和28.1%、13.3%和18.6%、0%和0%、20.0%和50.0%、86.7%和81.3%，与卵巢癌中上述癌基因的表达比较，差异均有极显著性(P均<0.001)。
, 百拇医药
在103例卵巢癌中，无癌蛋白异常变化者占2.9%(3/103)，2种或2种以上癌蛋白同时异常变化者分别占94.2%(97/103)和85.4%(88/103)。经Pearson相关分析显示，p53与neu、ras及bcl-2呈明显正相关(P=0.000 5、0.014及0.007)，p16与nm-23也呈明显正相关(P=0.000 1)；而p16和nm-23与其它4种癌蛋白呈负相关趋势。
2.癌蛋白表达与病理分级的关系：neu、ras、p53及bcl-2 4种癌蛋白的共同表达率，随病理分级的增加而增高(表1)，1、2、3级的共同过度表达率分别为18.6%、61.8%和69.2%，1级和2级之间，1级和3级之间，差异有极显著性(P均<0.000 1)，而2级和3级之间，差异无显著性。4例卵巢癌同时出现4种癌蛋白表达，均为临床Ⅲ期、病理3级，其中3例为浆液性腺癌，1例为粘液性腺癌。nm-23和p16的共表达率，随病理级别的增加而降低，1、2和3级分别为44.2%、26.5%和7.6%，3级明显低于1级(P<0.000 1)。
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表1 卵巢癌不同病理分级6种癌蛋白共同表达的情况(例数) 级别
总例数
neu、ras、p53、bcl-2异常变化数
nm-23和p16异常变化数
0
1
2
3
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1
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9
2
表2 卵巢癌不同临床分期6种癌蛋白共同表达的情况(例数) 期别
总例数
neu、ras、p53、bcl-2异常变化数
nm-23和p16异常变化数
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1
2
Ⅰ
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Ⅱ
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5
1
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0
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4
Ⅲ
56
9
14
16
13
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4
29
19
8
Ⅳ
9
0
2
3
4
0
5
2
2
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表3 卵巢癌不同存活年限患者6种癌蛋白共同表达的情况(例数) 存活
年限
总例数
neu、ras、p53、bcl-2异常变化数
nm-23和p16异常变化数
0
1
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≥5
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3.癌基因蛋白表达与临床分期的关系：neu、ras、p53和bcl-2 4种蛋白在晚期(Ⅲ～Ⅳ期)卵巢癌中的共同表达率为58.8%，明显高于早期(Ⅰ～Ⅱ期)患者(18.4%，P<0.000 1)；早期患者中未发现有该4种蛋白共同表达者。nm-23和p16蛋白在晚期卵巢癌的共同表达率(15.4%)明显低于早期患者(52.6%)(P<0.01，表2)。
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4. 6种癌基因蛋白表达与患者预后：在存活期<1年、1～3年、3～5年及>5年的卵巢癌患者中，neu、ras、p53和bcl-2的共同表达率分别为66.7%、57.1%、22.2%和15.8%，nm-23和p16的共同表达率分别为28.6%、14.3%、38.9%和47.4%，总体间比较，差异有显著性(P<0.05)，存活年限<3年及≥3年者之间，差异有极显著性(P<0.01，表3)。生存分析表明，有癌蛋白共同异常表达者的5年存活率明显低于无异常变化者(P=0.0024)；经Cox风险回归分析显示，每增加1种癌蛋白的异常表达，患者的死亡危险度将增加1.508倍。
三、讨论
多种癌基因或抑癌基因改变可同时出现于同一肿瘤这一事实，已为多数学者所公认。转基因实验证明，将一些癌基因及失活的抑癌基因如neu、ras、myc及mt-p53等引入细胞，可促进细胞癌变[2]。本研究发现，约97.1%(100/103)的卵巢癌中，至少存在1种以上的癌基因蛋白的异常变化，94.2%(97/103)的病例存在2种以上的癌基因蛋白异常改变。证实了癌基因和抑癌基因的变化，是卵巢癌中的频发事件，即卵巢癌是一种多基因疾病，癌基因的激活及抑癌基因的失活，是卵巢癌的重要发病机理之一。多种癌基因及抑癌基因之间在卵巢癌中的作用是复杂多变的，其共同作用的结果，主要表现为协同和累加作用。
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在肿瘤的演变过程中，细胞的恶性转化既取决于细胞的无限增殖力，也取决于细胞的分化是否受阻。有资料表明，ras、neu、myc等的激活及p53、Rb、p16等的失活，均可在影响细胞增殖的同时阻止细胞的分化[3～5]。本研究发现，6种癌蛋白中，每一种的异常改变均与卵巢癌的分化程度相关，而多种癌蛋白同时异常改变时，这种影响更加明显。说明，是多种癌基因/抑癌基因在卵巢癌的分化中协同作用的结果，使卵巢癌更加分化不良。
本研究还发现，临床期别越晚、预后越差的患者，其癌蛋白异常表达的种类越多；多因素Cox比例风险回归分析也显示，每增加1种癌蛋白的异常表达，患者的死亡风险将增加1.508倍。说明每一种癌基因的激活和抑癌基因的失活，均是卵巢癌发展和转归中的不利因素，多种基因变化的累加效应，将使患者病情更趋恶化。此结果提示我们，检测癌基因/抑癌基因尤其是多种基因，不仅有助于了解卵巢癌的发病机理，也有助于预测卵巢癌病情进展和判断预后，从而指导临床选择治疗方法。参考文献
, http://www.100md.com
1 Westra WH, Offerhans JA, Goodman SN. Overexpression of the p53 tumor suppressor gene product in primary lung adenocarcinoma is associated with cigarette smoking. Am J Surg Pathol, 1993,17:213-221.
2 Boente MP, Godwin AK, Kohler MF, et al. Early ovarian cancer: a review of its genetic and biologic factors, detection, and treatment. Curr Probl Cancer, 1996,20:90-113.
3 Berchuck A, Kohler MF, Bast RC. Oncogene in ovarian cancer. Hematol Oncol Clin North Am, 1992,6:813-827.
, http://www.100md.com
4 Kihana T, Tauda H, Teshima S, et al. High incidence of p53 gene protein and DNA aneuploidy. Jpn J Cancer Res, 1992,83:978-984.
5 Hatta Y, Hirana H, Takeuchi S, et al. Alteration of the p16 gene in testicular, ovarian and endometrial malignancies. J Urol, 1995,154:1954-1961.
(收稿：1997-05-15 修回：1997-11-04), 百拇医药
单位：300052 天津医科大学总医院妇科(李广太，焦书竹)；河南省安阳市肿瘤医院(岳晓莉，牛春莲，李红宇)；河南省安阳市灯塔医院(王振琴)
关键词：
中华妇产科杂志980420 同时检测103例卵巢癌组织癌基因neu和ras、抑癌基因p53和p16、抗凋亡基因bcl-2和转移抑制基因nm-23等6种癌蛋白(oncoprotein)的变化，探讨这些癌蛋白同时异常表达与卵巢癌病理分级、临床分期及预后的关系。
一、材料和方法
1.研究对象：103例卵巢癌组织蜡块标本分别收集自天津医科大学总医院妇科和河南省安阳市肿瘤医院。并以32例良性卵巢肿瘤，30例正常卵巢组织作为对照组。
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2.主要试剂和方法：所有试剂分别购自DAKO、Santa Cruze及Vector公司，按试剂说明行常规ABC免疫组化染色。单克隆抗体的工作浓度为：neu 1∶50、ras 1∶20、bcl-2 1∶40、nm-23 1∶20、p53 1∶200，多克隆抗体p16的工作浓度为1∶300。每次染色均设阴性和阳性对照。染色结果的判定参照文献[1]，按染色强度和阳性细胞所占比例进行综合评价。凡染色≥(++)者即属于过度表达。
3.统计学处理：组间比较采用χ2检验和相关分析；生存分析采用P-L法、对数秩和检验和Cox比例风险回归分析。
二、结果
1.6种癌蛋白变化情况及相关分析：neu、ras、bcl-2、p53、nm-23及p16在正常卵巢和良性卵巢肿瘤中的阳性表达率分别为16.7%和28.1%、16.7%和28.1%、13.3%和18.6%、0%和0%、20.0%和50.0%、86.7%和81.3%，与卵巢癌中上述癌基因的表达比较，差异均有极显著性(P均<0.001)。
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在103例卵巢癌中，无癌蛋白异常变化者占2.9%(3/103)，2种或2种以上癌蛋白同时异常变化者分别占94.2%(97/103)和85.4%(88/103)。经Pearson相关分析显示，p53与neu、ras及bcl-2呈明显正相关(P=0.000 5、0.014及0.007)，p16与nm-23也呈明显正相关(P=0.000 1)；而p16和nm-23与其它4种癌蛋白呈负相关趋势。
2.癌蛋白表达与病理分级的关系：neu、ras、p53及bcl-2 4种癌蛋白的共同表达率，随病理分级的增加而增高(表1)，1、2、3级的共同过度表达率分别为18.6%、61.8%和69.2%，1级和2级之间，1级和3级之间，差异有极显著性(P均<0.000 1)，而2级和3级之间，差异无显著性。4例卵巢癌同时出现4种癌蛋白表达，均为临床Ⅲ期、病理3级，其中3例为浆液性腺癌，1例为粘液性腺癌。nm-23和p16的共表达率，随病理级别的增加而降低，1、2和3级分别为44.2%、26.5%和7.6%，3级明显低于1级(P<0.000 1)。
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表1 卵巢癌不同病理分级6种癌蛋白共同表达的情况(例数) 级别
总例数
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表2 卵巢癌不同临床分期6种癌蛋白共同表达的情况(例数) 期别
总例数
neu、ras、p53、bcl-2异常变化数
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表3 卵巢癌不同存活年限患者6种癌蛋白共同表达的情况(例数) 存活
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neu、ras、p53、bcl-2异常变化数
nm-23和p16异常变化数
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3.癌基因蛋白表达与临床分期的关系：neu、ras、p53和bcl-2 4种蛋白在晚期(Ⅲ～Ⅳ期)卵巢癌中的共同表达率为58.8%，明显高于早期(Ⅰ～Ⅱ期)患者(18.4%，P<0.000 1)；早期患者中未发现有该4种蛋白共同表达者。nm-23和p16蛋白在晚期卵巢癌的共同表达率(15.4%)明显低于早期患者(52.6%)(P<0.01，表2)。
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4. 6种癌基因蛋白表达与患者预后：在存活期<1年、1～3年、3～5年及>5年的卵巢癌患者中，neu、ras、p53和bcl-2的共同表达率分别为66.7%、57.1%、22.2%和15.8%，nm-23和p16的共同表达率分别为28.6%、14.3%、38.9%和47.4%，总体间比较，差异有显著性(P<0.05)，存活年限<3年及≥3年者之间，差异有极显著性(P<0.01，表3)。生存分析表明，有癌蛋白共同异常表达者的5年存活率明显低于无异常变化者(P=0.0024)；经Cox风险回归分析显示，每增加1种癌蛋白的异常表达，患者的死亡危险度将增加1.508倍。
三、讨论
多种癌基因或抑癌基因改变可同时出现于同一肿瘤这一事实，已为多数学者所公认。转基因实验证明，将一些癌基因及失活的抑癌基因如neu、ras、myc及mt-p53等引入细胞，可促进细胞癌变[2]。本研究发现，约97.1%(100/103)的卵巢癌中，至少存在1种以上的癌基因蛋白的异常变化，94.2%(97/103)的病例存在2种以上的癌基因蛋白异常改变。证实了癌基因和抑癌基因的变化，是卵巢癌中的频发事件，即卵巢癌是一种多基因疾病，癌基因的激活及抑癌基因的失活，是卵巢癌的重要发病机理之一。多种癌基因及抑癌基因之间在卵巢癌中的作用是复杂多变的，其共同作用的结果，主要表现为协同和累加作用。
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在肿瘤的演变过程中，细胞的恶性转化既取决于细胞的无限增殖力，也取决于细胞的分化是否受阻。有资料表明，ras、neu、myc等的激活及p53、Rb、p16等的失活，均可在影响细胞增殖的同时阻止细胞的分化[3～5]。本研究发现，6种癌蛋白中，每一种的异常改变均与卵巢癌的分化程度相关，而多种癌蛋白同时异常改变时，这种影响更加明显。说明，是多种癌基因/抑癌基因在卵巢癌的分化中协同作用的结果，使卵巢癌更加分化不良。
本研究还发现，临床期别越晚、预后越差的患者，其癌蛋白异常表达的种类越多；多因素Cox比例风险回归分析也显示，每增加1种癌蛋白的异常表达，患者的死亡风险将增加1.508倍。说明每一种癌基因的激活和抑癌基因的失活，均是卵巢癌发展和转归中的不利因素，多种基因变化的累加效应，将使患者病情更趋恶化。此结果提示我们，检测癌基因/抑癌基因尤其是多种基因，不仅有助于了解卵巢癌的发病机理，也有助于预测卵巢癌病情进展和判断预后，从而指导临床选择治疗方法。参考文献
, http://www.100md.com
1 Westra WH, Offerhans JA, Goodman SN. Overexpression of the p53 tumor suppressor gene product in primary lung adenocarcinoma is associated with cigarette smoking. Am J Surg Pathol, 1993,17:213-221.
2 Boente MP, Godwin AK, Kohler MF, et al. Early ovarian cancer: a review of its genetic and biologic factors, detection, and treatment. Curr Probl Cancer, 1996,20:90-113.
3 Berchuck A, Kohler MF, Bast RC. Oncogene in ovarian cancer. Hematol Oncol Clin North Am, 1992,6:813-827.
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4 Kihana T, Tauda H, Teshima S, et al. High incidence of p53 gene protein and DNA aneuploidy. Jpn J Cancer Res, 1992,83:978-984.
5 Hatta Y, Hirana H, Takeuchi S, et al. Alteration of the p16 gene in testicular, ovarian and endometrial malignancies. J Urol, 1995,154:1954-1961.
(收稿：1997-05-15 修回：1997-11-04), 百拇医药