正常妊娠及妊娠滋养细胞疾病患者胎盘p53、H-ras及C-myc基因的表达
作者：鲍耀 崔金全 李筱梅
单位：450003 郑州，河南医科大学附属第二医院妇产科
关键词：
中华妇产科杂志980816 p53、ras及myc基因在调节细胞增殖及分化方面起着重要作用，其异常表达可能会导致肿瘤的发生。为此，我们对正常胎盘、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎及绒毛膜癌组织p53、H-ras及C-myc基因蛋白表达进行研究。
一、材料与方法
1.材料来源：正常胎盘40例，孕早、中期各15例，孕晚期10例。葡萄胎胎盘50例，孕10～20周，葡萄胎滋养细胞的增生程度分为3度[1]，轻度10例，中度11例，高度29例。其中侵蚀性葡萄胎20例，绒毛膜癌20例。25例子宫病灶发生耐药。
, 百拇医药
2.方法：H-ras单抗、C-myc鼠抗人抗体、野生型和突变型混合的及突变型p53蛋白抗体、生物素化兔抗鼠及显色系统(购于北京中山生物公司)。ABC免疫组化染色，p53阳性染色显示胞核棕黄颗粒，C-myc及H-ras为胞浆胞膜内侧有棕黄着色，按着色强度分为弱阳性(淡黄颗粒)、阳性(较深黄色颗粒)和强阳性(大量深黄色颗粒)。以10个高倍视野下，阳性细胞数≥30%为阳性表达。
采用χ2检验统计组间差异。
二、结果
1.正常绒毛p53、H-ras及C-myc基因表达：野生型与混合型p53蛋白表达部位在细胞滋养细胞(CT)胞核(图1)，孕早期表达率为100%，孕中期为66.67%，为弱阳性染色，足月时消失。突变型p53蛋白在绒毛内未见免疫着色。孕早、中期H-ras的表达率分别为70%、40%，C-myc的表达率分别为80%、50%，早期均以CT为主，中期以合体滋养细胞(ST)为主，足月时两基因表达消失。3种癌基因在妊娠早期蜕膜细胞及腺体中有不同程度表达。
, 百拇医药
2.葡萄胎滋养细胞中p53、H-ras、C-myc基因表达：突变型p53阳性表达率为90%，表达部位在CT胞核。2种滋养细胞均表达H-ras、C-myc蛋白(图2)，表达率分别为52%和60%。3种基因为阳性到强阳性着色。p53、H-ras、C-myc基因的表达与葡萄胎的滋养细胞增生程度及恶变的关系见表1，2。
3.侵蚀性葡萄胎及绒癌组织p53、H-ras、C-myc基因表达：80%的侵蚀性葡萄胎及90%的绒癌组织表达突变型p53蛋白，在CT中呈广泛强阳性免疫染色。H-ras、C-myc蛋白在CT及ST中均有表达(图3)，为中到强阳性染色，侵蚀性葡萄胎及绒癌H-ras表达率分别为50%和60%，C-myc表达率均为40%。p53、C-myc基因的表达与疾病的临床期别及子宫病灶耐药与否的关系见表3，4。
三、讨论
1.p53、H-ras及C-myc基因在胎盘发育中的作用：正常早期绒毛细胞滋养细胞具有类似于恶性肿瘤细胞的特点，癌基因可能也参与了胎盘的形成和发育。我们研究发现，H-ras、C-myc在早期妊娠胎盘中的表达率分别高达70%、80%，随胎盘的成熟，表达逐渐降低。孕早期以CT表达为主，孕中期以ST为主，早期妊娠子宫蜕膜腺体及蜕膜细胞也表达H-ras、C-myc基因蛋白。因此，推测在胎盘的形成和成熟过程中，这两种基因在调节滋养细胞增生和分化方面起一定作用。一般正常组织内野生型p53的半衰期短，用免疫组化的方法检测不到p53蛋白。我们应用野生型和突变型p53蛋白抗体检测到p53蛋白在早孕期100%的表达，而突变型的p53蛋白未检出，这可能是野生型p53蛋白的稳定性增加或降解途径的破坏，使野生型的p53蛋白增多，从而控制滋养细胞的增生。1991年Schmid等[2]发现，鼠早期胎盘细胞滋养细胞野生型p53的mRNA表达增加也支持这一观点。
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2.p53、H-ras、C-myc基因表达与妊娠滋养细胞疾病的关系：p53在葡萄胎中突变发生率较高，我们发现葡萄胎组织中突变的p53的表达率为86%，H-ras、C-myc表达率分别为52%、60%。C-myc和p53基因的表达与葡萄胎滋养细胞的增生程度有关。H-ras及C-myc基因的表达与葡萄胎恶变有关。H-ras、C-myc及p53基因均阳性者5例，全部恶变，均阴性者12例，无一例恶变。H-ras、C-myc及p53基因蛋白可能在葡萄胎滋养细胞的恶变过程中起作用。进行癌基因的联合检测，有利于筛选高危患者。
p53基因在侵蚀性葡萄胎和绒癌中的突变更为常见。Yaginuma等[3]发现，8株细胞株中，3株细胞有p53点突变，1株细胞存在密码子的插入，认为绒癌细胞株存在p53基因异常。国内学者观察到70%以上的绒癌有p53的突变。我们发现p53基因表达与临床期别有关，Ⅰ、Ⅱ期的表达率明显低于Ⅲ、Ⅳ期。耐药者的表达率明显高于非耐药者，p53和C-myc基因是否参与了耐药过程，有待于进一步研究。本资料中C-myc基因表达率(40%)较其他文献报道的低，原因可能是取材时间在化疗的第3～4天，化疗影响了基因的表达。这一观察结果与Arbiser等[4]体外观察到的化疗药物的作用一致。
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图1 正常早期妊娠绒毛P53基因蛋白。免疫组化染色×400 图2 完全性葡萄胎绒毛、滋养细胞中度增生。滋养细胞H-ras 蛋白强阳性。免疫组化染色×100 图3 绒毛膜细胞癌患者C-myc基因蛋白。免疫组化染色×100表1 葡萄胎滋养细胞增生程度与p53、H-ras、C-myc基因表达的关系 类别
总例数
H-ras基因阳性
C-myc基因阳性
p53基因阳性
例数
阳性率(%)
例数
阳性率(%)
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例数
阳性率(%)
中、低度增生
21
10
47.62
7
33.33*
16
76.19**
高度增生
29
16
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55.17
23
79.31
29
100.00
*P<0.01 **P<0.05 (下同)表2 葡萄胎性质与p53、H-ras、C-myc表达的关系 类别
总例数
H-ras基因阳性
C-myc基因阳性
p53基因阳性
例数
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阳性率(%)
例数
阳性率(%)
例数
阳性率(%)
恶变
12
10
83.33*
11
91.67**
16
83.33
, http://www.100md.com
非恶变
38
16
42.11
19
50.00
29
92.11
表3 侵蚀性葡萄胎、绒癌临床期别与p53、C-myc基因表达的关系 类别
总例数
C-myc基因阳性
p53基因阳性
, 百拇医药
例数
阳性率(%)
例数
阳性率(%)
Ⅰ、Ⅱ期
20
6
30.00*
15
75.00**
Ⅲ、Ⅳ期
20
12
, http://www.100md.com
60.00
19
95.00
表4 子宫病灶耐药与p53、C-myc基因表达的关系 类别
总例数
C-myc基因阳性
p53基因阳性
例数
阳性率(%)
例数
阳性率(%)
耐药
, 百拇医药
25
14
56.00*
24
96.00**
非耐药
15
2
12.33
10
66.67
参考文献
1 宋鸿钊，吴葆桢，唐敏一，等主编.滋养细胞肿瘤的诊断和治疗.北京：人民卫生出版社，1983.32-52.
, 百拇医药
2 Schmid P, Lorenz A, Hameister H. Expression of p53 during mouse embryogenesis. Development, 1991, 113:857-865.
3 Yaginuma Y, Yamashita T, Takuma N, et al. Analysis of the p53 gene in human choriocarcinoma cell lines. Br J Cancer, 1995, 71:9-12.
4 Arbiser JL, Arbiser ZK, Majzoub JA. Regulation of gene expression in choriocarcinoma by methotrexate and hydrozyurea. Endocrinology, 1991, 128:972-978.
(收稿：1997-12-12 修回：1998-06-06), http://www.100md.com
单位：450003 郑州，河南医科大学附属第二医院妇产科
关键词：
中华妇产科杂志980816 p53、ras及myc基因在调节细胞增殖及分化方面起着重要作用，其异常表达可能会导致肿瘤的发生。为此，我们对正常胎盘、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎及绒毛膜癌组织p53、H-ras及C-myc基因蛋白表达进行研究。
一、材料与方法
1.材料来源：正常胎盘40例，孕早、中期各15例，孕晚期10例。葡萄胎胎盘50例，孕10～20周，葡萄胎滋养细胞的增生程度分为3度[1]，轻度10例，中度11例，高度29例。其中侵蚀性葡萄胎20例，绒毛膜癌20例。25例子宫病灶发生耐药。
, 百拇医药
2.方法：H-ras单抗、C-myc鼠抗人抗体、野生型和突变型混合的及突变型p53蛋白抗体、生物素化兔抗鼠及显色系统(购于北京中山生物公司)。ABC免疫组化染色，p53阳性染色显示胞核棕黄颗粒，C-myc及H-ras为胞浆胞膜内侧有棕黄着色，按着色强度分为弱阳性(淡黄颗粒)、阳性(较深黄色颗粒)和强阳性(大量深黄色颗粒)。以10个高倍视野下，阳性细胞数≥30%为阳性表达。
采用χ2检验统计组间差异。
二、结果
1.正常绒毛p53、H-ras及C-myc基因表达：野生型与混合型p53蛋白表达部位在细胞滋养细胞(CT)胞核(图1)，孕早期表达率为100%，孕中期为66.67%，为弱阳性染色，足月时消失。突变型p53蛋白在绒毛内未见免疫着色。孕早、中期H-ras的表达率分别为70%、40%，C-myc的表达率分别为80%、50%，早期均以CT为主，中期以合体滋养细胞(ST)为主，足月时两基因表达消失。3种癌基因在妊娠早期蜕膜细胞及腺体中有不同程度表达。
, 百拇医药
2.葡萄胎滋养细胞中p53、H-ras、C-myc基因表达：突变型p53阳性表达率为90%，表达部位在CT胞核。2种滋养细胞均表达H-ras、C-myc蛋白(图2)，表达率分别为52%和60%。3种基因为阳性到强阳性着色。p53、H-ras、C-myc基因的表达与葡萄胎的滋养细胞增生程度及恶变的关系见表1，2。
3.侵蚀性葡萄胎及绒癌组织p53、H-ras、C-myc基因表达：80%的侵蚀性葡萄胎及90%的绒癌组织表达突变型p53蛋白，在CT中呈广泛强阳性免疫染色。H-ras、C-myc蛋白在CT及ST中均有表达(图3)，为中到强阳性染色，侵蚀性葡萄胎及绒癌H-ras表达率分别为50%和60%，C-myc表达率均为40%。p53、C-myc基因的表达与疾病的临床期别及子宫病灶耐药与否的关系见表3，4。
三、讨论
1.p53、H-ras及C-myc基因在胎盘发育中的作用：正常早期绒毛细胞滋养细胞具有类似于恶性肿瘤细胞的特点，癌基因可能也参与了胎盘的形成和发育。我们研究发现，H-ras、C-myc在早期妊娠胎盘中的表达率分别高达70%、80%，随胎盘的成熟，表达逐渐降低。孕早期以CT表达为主，孕中期以ST为主，早期妊娠子宫蜕膜腺体及蜕膜细胞也表达H-ras、C-myc基因蛋白。因此，推测在胎盘的形成和成熟过程中，这两种基因在调节滋养细胞增生和分化方面起一定作用。一般正常组织内野生型p53的半衰期短，用免疫组化的方法检测不到p53蛋白。我们应用野生型和突变型p53蛋白抗体检测到p53蛋白在早孕期100%的表达，而突变型的p53蛋白未检出，这可能是野生型p53蛋白的稳定性增加或降解途径的破坏，使野生型的p53蛋白增多，从而控制滋养细胞的增生。1991年Schmid等[2]发现，鼠早期胎盘细胞滋养细胞野生型p53的mRNA表达增加也支持这一观点。
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2.p53、H-ras、C-myc基因表达与妊娠滋养细胞疾病的关系：p53在葡萄胎中突变发生率较高，我们发现葡萄胎组织中突变的p53的表达率为86%，H-ras、C-myc表达率分别为52%、60%。C-myc和p53基因的表达与葡萄胎滋养细胞的增生程度有关。H-ras及C-myc基因的表达与葡萄胎恶变有关。H-ras、C-myc及p53基因均阳性者5例，全部恶变，均阴性者12例，无一例恶变。H-ras、C-myc及p53基因蛋白可能在葡萄胎滋养细胞的恶变过程中起作用。进行癌基因的联合检测，有利于筛选高危患者。
p53基因在侵蚀性葡萄胎和绒癌中的突变更为常见。Yaginuma等[3]发现，8株细胞株中，3株细胞有p53点突变，1株细胞存在密码子的插入，认为绒癌细胞株存在p53基因异常。国内学者观察到70%以上的绒癌有p53的突变。我们发现p53基因表达与临床期别有关，Ⅰ、Ⅱ期的表达率明显低于Ⅲ、Ⅳ期。耐药者的表达率明显高于非耐药者，p53和C-myc基因是否参与了耐药过程，有待于进一步研究。本资料中C-myc基因表达率(40%)较其他文献报道的低，原因可能是取材时间在化疗的第3～4天，化疗影响了基因的表达。这一观察结果与Arbiser等[4]体外观察到的化疗药物的作用一致。
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图1 正常早期妊娠绒毛P53基因蛋白。免疫组化染色×400 图2 完全性葡萄胎绒毛、滋养细胞中度增生。滋养细胞H-ras 蛋白强阳性。免疫组化染色×100 图3 绒毛膜细胞癌患者C-myc基因蛋白。免疫组化染色×100表1 葡萄胎滋养细胞增生程度与p53、H-ras、C-myc基因表达的关系 类别
总例数
H-ras基因阳性
C-myc基因阳性
p53基因阳性
例数
阳性率(%)
例数
阳性率(%)
, 百拇医药
例数
阳性率(%)
中、低度增生
21
10
47.62
7
33.33*
16
76.19**
高度增生
29
16
, http://www.100md.com
55.17
23
79.31
29
100.00
*P<0.01 **P<0.05 (下同)表2 葡萄胎性质与p53、H-ras、C-myc表达的关系 类别
总例数
H-ras基因阳性
C-myc基因阳性
p53基因阳性
例数
, http://www.100md.com
阳性率(%)
例数
阳性率(%)
例数
阳性率(%)
恶变
12
10
83.33*
11
91.67**
16
83.33
, http://www.100md.com
非恶变
38
16
42.11
19
50.00
29
92.11
表3 侵蚀性葡萄胎、绒癌临床期别与p53、C-myc基因表达的关系 类别
总例数
C-myc基因阳性
p53基因阳性
, 百拇医药
例数
阳性率(%)
例数
阳性率(%)
Ⅰ、Ⅱ期
20
6
30.00*
15
75.00**
Ⅲ、Ⅳ期
20
12
, http://www.100md.com
60.00
19
95.00
表4 子宫病灶耐药与p53、C-myc基因表达的关系 类别
总例数
C-myc基因阳性
p53基因阳性
例数
阳性率(%)
例数
阳性率(%)
耐药
, 百拇医药
25
14
56.00*
24
96.00**
非耐药
15
2
12.33
10
66.67
参考文献
1 宋鸿钊，吴葆桢，唐敏一，等主编.滋养细胞肿瘤的诊断和治疗.北京：人民卫生出版社，1983.32-52.
, 百拇医药
2 Schmid P, Lorenz A, Hameister H. Expression of p53 during mouse embryogenesis. Development, 1991, 113:857-865.
3 Yaginuma Y, Yamashita T, Takuma N, et al. Analysis of the p53 gene in human choriocarcinoma cell lines. Br J Cancer, 1995, 71:9-12.
4 Arbiser JL, Arbiser ZK, Majzoub JA. Regulation of gene expression in choriocarcinoma by methotrexate and hydrozyurea. Endocrinology, 1991, 128:972-978.
(收稿：1997-12-12 修回：1998-06-06), http://www.100md.com