妊高征患者血小板磷脂酰肌醇和钙内流的变化
作者：刘香环 徐凤英 孙玉贵 张师前 李金兰 韩学玲
单位：272149 山东省济宁市第二人民医院妇产科(刘香环，徐凤英，李金兰，韩学玲)，检验科(孙玉贵)；山东医科大学附属医院妇产科(张师前)
关键词：
中华妇产科杂志990320 磷脂酰肌醇(phosphoinositide,PI)及其代谢产物三磷酸肌醇(inositol triphosphate,IP3)是血管平滑肌细胞内钙浓度稳定与否的重要调控因素[1]，近年来，他们在原发性高血压发病中的作用，已引起国内外学者的关注[2]。本研究旨在观察妊高征患者血小板在基础状态及凝血酶刺激下，PI降解的程度、IP3含量与钙内流变化，以期对他们在妊高征发生、发展中的作用有所认识。
一、资料与方法
, http://www.100md.com
1.研究对象：妊高征组32例，为1995年1月至1997年1月在我院妇产科住院的中、重度妊高征患者。诊断标准根据《妇产科学》(第4版)[3]。孕妇平均年龄28.1岁(23～34岁)，平均孕周(38.2±1.5)周(34～41周)。初产妇29例，经产妇3例。正常孕妇组44例为同期住院待产孕妇，无高血压、糠尿病及心脏疾患，肝肾功能正常者，平均年龄26.4岁(23～30岁)，平均孕周(39.0±1.3)周(36～41周)，均为初产妇。
2.方法：空腹抽取静脉血，常规离心去除血浆、红细胞及白细胞；按Vickers等[4]方法，测定血小板氚[3H]-1-磷酸肌醇累积量(IPs)，以评价PI的降解程度，同时测定IP3含量(单位为dpm/109血小板)，血小板钙离子(45Ca2+)内流参照Valerie等[5]建立的方法测定(单位为pmol/108血小板)。放射性标记物由中国原子能研究院提供。以凝血酶1U/ml作为刺激诱导剂。
, 百拇医药
3.统计学处理：实验数据以
±s表示，统计分析采用t检验和相关性分析。
二、结果
1.血小板IPs、IP3和45Ca2+内流变化：妊高征组血小板基础状态和凝血酶刺激诱导下，IPs、IP3和45Ca2+内流均显著高于正常孕妇组(P均<0.01)。见表1，2。
表1 两组孕妇基础状态下血小板IPs、IP3和45Ca2+内流变化(±s) 组别
, 百拇医药 例数
IPs
(dpm/109血小板)
IP3
(dpm/109血小板)
45 Ca2+内流*
(pmol/108血小板)
妊高征组
32
969±84
214±31
, 百拇医药
130±8
正常孕妇组
44
903±78
167±26
71±5
*为加45CaCI2 2分钟所测值
表2 两组孕妇在凝血酶诱导下血小板IPs、IP3和45Ca2+内流变化(±s) 组别
例数
, 百拇医药
IPs
(dpm/109血小板)
IP3
(dpm/109血小板)
45 Ca2+内流*
(pmol/108血小板)
妊高征组
32
1 967±145
499±41
, 百拇医药
297±26
正常孕妇组
44
1 406±143
448±39
246±29
*为加凝血酶1U/ml 20秒所测值
2.各指标相关性分析：妊高征组45 Ca2+内流与IPs和IP3呈显著正相关(r分别为0.263和0.275，P均<0.05)。两组45Ca2+内流上升幅值(刺激诱导值与基础值之差)分别与IPs(r=0.449，0.425)及IP3(r=0.405,0.391)的上升幅值呈明显正相关(P均<0.05)。
, 百拇医药
三、讨论
1.PI与钙动员的关系：细胞内的肌醇磷脂代谢过程，是近年来发现的有别于腺苷酸环化酶-环磷酰苷-蛋白激酶信号传递系统的另一重要的信使系统[6]。人体细胞内有3种肌醇磷脂，即PI、磷脂酰肌醇-4-磷酸(phosphatideylinositol-4-phosphate;PI4P)和磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸(PI4，5P2)，其中最丰富者为PI。PI在其激酶和磷酸单脂酶作用下维持细胞代谢及功能的动态平衡。多数研究证实，PI的代谢产物磷脂酰肌醇-1，4，5-三磷酸肌醇为细胞内新的第2信使，在钙动员过程中起重要作用[7]。IP3主要通过两种受体形成，即结合调节蛋白偶联受体和酪氨酸激酶偶联受体，上述两种受体激活各自相应的磷脂酶C，进而水解PI4，5P2，形成IP3。IP3形成后与其受体——三磷酸肌醇受体结合，促使内源性45Ca2+释放(动员钙)，促进外源性钙内流，维持细胞的代谢和功能调节。
, 百拇医药
2.妊高征与磷酸肌醇代谢及钙动员的关系：研究表明，妊高征患者血小板膜Ca2+-ATP酶活性增高，而K+-Na+-ATP酶活力下降，细胞内Ca2+升高，膜流动性及胆固醇与磷脂比率增加[8]。IP3除作为第2信使直接参与钙动员外，还可活化血小板引起平滑肌收缩[9]。本研究发现，妊高征患者血小板在基础状态下，IPs、IP3及45Ca2+内流均明显高于正常孕妇，45Ca2+内流与IPs、IP3呈正相关，提示妊高征患者血小板PI膜降解增强和IP3增加，导致45Ca2+内流增多；凝血酶刺激诱导下3项指标间的变化关系，进一步证实妊高征患者存在磷酸肌醇代谢与钙动员的失衡。因此，我们认为，血小板膜PI降解增加，和细胞内IP3含量升高，可能通过增加钙内流而参与妊高征的发生和发展过程。血小板膜PI降解可开放受体依赖性钙通道，IP3还可以某种方式激活钙通道或以容量性进入(capacitative entry)方式，增加钙内流。但至今，人们对PI降解增强和IP3升高的原因知之甚少[5-8]。本研究发现，凝血酶刺激诱导下，妊高征患者IPs、IP3的增加均显著高于正常孕妇，提示血小板膜PI降解对凝血酶敏感性增强，这种现象在妊高征孕妇血管平滑肌细胞中是否同样存在，并成为导致平滑肌细胞膜降解增加和IP3升高的主要机理，尚有待进一步探讨。
, http://www.100md.com
参考文献
1 贾鸿鹏，文见镒.磷酸肌醇与胞内钙稳态.生理科学，1988，8：451-454.
2 Heagerty Z, Smith JB, Ashko H, et al. The phosphoinotide signalling system and hypertension. J Hypertens, 1987,5:515-518.
3 乐杰主编.妇产科学.第4版.北京：人民卫生出版社，1996.115-116.
4 Vickers JD, Radene L, Mustard JF, et al. Accumalation of the inositol phosphates in thrombin-stimulated, washed rabbit platelets in the presence of lithium. Biochem J, 1984,224:399-403.
, http://www.100md.com
5 Valerie M, Doyle UT, Ruegg K. Lack of evidence for voltage dependent, calcium on platelets. Biochem Biophys Res Commun, 1985,127:161-164.
6 胡申江，黄之伟，李英.G蛋白-肌醇磷脂途径及其与高血压的关系.生理科学进展，1996，27：31-33.
7 Berridge MJ. Inositol Triphosphate as second messenger. Biochem J, 1984,220:395-399.
8 Romann C, Tranguilli AL, Cester IV, et al. Modifications induced by gestational hypertension on platelet calcium transport. Exp Mol Pathol, 1991,54:122-129.
9 周林. 三磷酸肌醇在高血压发病中的作用.心血管病学进展，1993，14：293-295.
(收稿：1998-04-23 修回：1998-12-12), 百拇医药
单位：272149 山东省济宁市第二人民医院妇产科(刘香环，徐凤英，李金兰，韩学玲)，检验科(孙玉贵)；山东医科大学附属医院妇产科(张师前)
关键词：
中华妇产科杂志990320 磷脂酰肌醇(phosphoinositide,PI)及其代谢产物三磷酸肌醇(inositol triphosphate,IP3)是血管平滑肌细胞内钙浓度稳定与否的重要调控因素[1]，近年来，他们在原发性高血压发病中的作用，已引起国内外学者的关注[2]。本研究旨在观察妊高征患者血小板在基础状态及凝血酶刺激下，PI降解的程度、IP3含量与钙内流变化，以期对他们在妊高征发生、发展中的作用有所认识。
一、资料与方法
, http://www.100md.com
1.研究对象：妊高征组32例，为1995年1月至1997年1月在我院妇产科住院的中、重度妊高征患者。诊断标准根据《妇产科学》(第4版)[3]。孕妇平均年龄28.1岁(23～34岁)，平均孕周(38.2±1.5)周(34～41周)。初产妇29例，经产妇3例。正常孕妇组44例为同期住院待产孕妇，无高血压、糠尿病及心脏疾患，肝肾功能正常者，平均年龄26.4岁(23～30岁)，平均孕周(39.0±1.3)周(36～41周)，均为初产妇。
2.方法：空腹抽取静脉血，常规离心去除血浆、红细胞及白细胞；按Vickers等[4]方法，测定血小板氚[3H]-1-磷酸肌醇累积量(IPs)，以评价PI的降解程度，同时测定IP3含量(单位为dpm/109血小板)，血小板钙离子(45Ca2+)内流参照Valerie等[5]建立的方法测定(单位为pmol/108血小板)。放射性标记物由中国原子能研究院提供。以凝血酶1U/ml作为刺激诱导剂。
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3.统计学处理：实验数据以
±s表示，统计分析采用t检验和相关性分析。二、结果
1.血小板IPs、IP3和45Ca2+内流变化：妊高征组血小板基础状态和凝血酶刺激诱导下，IPs、IP3和45Ca2+内流均显著高于正常孕妇组(P均<0.01)。见表1，2。
表1 两组孕妇基础状态下血小板IPs、IP3和45Ca2+内流变化(
±s) 组别, 百拇医药 例数
IPs
(dpm/109血小板)
IP3
(dpm/109血小板)
45 Ca2+内流*
(pmol/108血小板)
妊高征组
32
969±84
214±31
, 百拇医药
130±8
正常孕妇组
44
903±78
167±26
71±5
*为加45CaCI2 2分钟所测值
表2 两组孕妇在凝血酶诱导下血小板IPs、IP3和45Ca2+内流变化(
±s) 组别例数
, 百拇医药
IPs
(dpm/109血小板)
IP3
(dpm/109血小板)
45 Ca2+内流*
(pmol/108血小板)
妊高征组
32
1 967±145
499±41
, 百拇医药
297±26
正常孕妇组
44
1 406±143
448±39
246±29
*为加凝血酶1U/ml 20秒所测值
2.各指标相关性分析：妊高征组45 Ca2+内流与IPs和IP3呈显著正相关(r分别为0.263和0.275，P均<0.05)。两组45Ca2+内流上升幅值(刺激诱导值与基础值之差)分别与IPs(r=0.449，0.425)及IP3(r=0.405,0.391)的上升幅值呈明显正相关(P均<0.05)。
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三、讨论
1.PI与钙动员的关系：细胞内的肌醇磷脂代谢过程，是近年来发现的有别于腺苷酸环化酶-环磷酰苷-蛋白激酶信号传递系统的另一重要的信使系统[6]。人体细胞内有3种肌醇磷脂，即PI、磷脂酰肌醇-4-磷酸(phosphatideylinositol-4-phosphate;PI4P)和磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸(PI4，5P2)，其中最丰富者为PI。PI在其激酶和磷酸单脂酶作用下维持细胞代谢及功能的动态平衡。多数研究证实，PI的代谢产物磷脂酰肌醇-1，4，5-三磷酸肌醇为细胞内新的第2信使，在钙动员过程中起重要作用[7]。IP3主要通过两种受体形成，即结合调节蛋白偶联受体和酪氨酸激酶偶联受体，上述两种受体激活各自相应的磷脂酶C，进而水解PI4，5P2，形成IP3。IP3形成后与其受体——三磷酸肌醇受体结合，促使内源性45Ca2+释放(动员钙)，促进外源性钙内流，维持细胞的代谢和功能调节。
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2.妊高征与磷酸肌醇代谢及钙动员的关系：研究表明，妊高征患者血小板膜Ca2+-ATP酶活性增高，而K+-Na+-ATP酶活力下降，细胞内Ca2+升高，膜流动性及胆固醇与磷脂比率增加[8]。IP3除作为第2信使直接参与钙动员外，还可活化血小板引起平滑肌收缩[9]。本研究发现，妊高征患者血小板在基础状态下，IPs、IP3及45Ca2+内流均明显高于正常孕妇，45Ca2+内流与IPs、IP3呈正相关，提示妊高征患者血小板PI膜降解增强和IP3增加，导致45Ca2+内流增多；凝血酶刺激诱导下3项指标间的变化关系，进一步证实妊高征患者存在磷酸肌醇代谢与钙动员的失衡。因此，我们认为，血小板膜PI降解增加，和细胞内IP3含量升高，可能通过增加钙内流而参与妊高征的发生和发展过程。血小板膜PI降解可开放受体依赖性钙通道，IP3还可以某种方式激活钙通道或以容量性进入(capacitative entry)方式，增加钙内流。但至今，人们对PI降解增强和IP3升高的原因知之甚少[5-8]。本研究发现，凝血酶刺激诱导下，妊高征患者IPs、IP3的增加均显著高于正常孕妇，提示血小板膜PI降解对凝血酶敏感性增强，这种现象在妊高征孕妇血管平滑肌细胞中是否同样存在，并成为导致平滑肌细胞膜降解增加和IP3升高的主要机理，尚有待进一步探讨。
, http://www.100md.com
参考文献
1 贾鸿鹏，文见镒.磷酸肌醇与胞内钙稳态.生理科学，1988，8：451-454.
2 Heagerty Z, Smith JB, Ashko H, et al. The phosphoinotide signalling system and hypertension. J Hypertens, 1987,5:515-518.
3 乐杰主编.妇产科学.第4版.北京：人民卫生出版社，1996.115-116.
4 Vickers JD, Radene L, Mustard JF, et al. Accumalation of the inositol phosphates in thrombin-stimulated, washed rabbit platelets in the presence of lithium. Biochem J, 1984,224:399-403.
, http://www.100md.com
5 Valerie M, Doyle UT, Ruegg K. Lack of evidence for voltage dependent, calcium on platelets. Biochem Biophys Res Commun, 1985,127:161-164.
6 胡申江，黄之伟，李英.G蛋白-肌醇磷脂途径及其与高血压的关系.生理科学进展，1996，27：31-33.
7 Berridge MJ. Inositol Triphosphate as second messenger. Biochem J, 1984,220:395-399.
8 Romann C, Tranguilli AL, Cester IV, et al. Modifications induced by gestational hypertension on platelet calcium transport. Exp Mol Pathol, 1991,54:122-129.
9 周林. 三磷酸肌醇在高血压发病中的作用.心血管病学进展，1993，14：293-295.
(收稿：1998-04-23 修回：1998-12-12), 百拇医药