中国医科大学附属第二医院妇产科一氧化氮与盆腔沙眼衣原体感染的关系
作者：王跃红 杨天宇
单位：110003 沈阳,中国医科大学附属第二医院妇产科
关键词：
中华妇产科杂志990618 近年来，妇女生殖道沙眼衣原体(chlamydia trachomatis, CT)感染的发病率不断上升[1]，可导致不孕或异位妊娠。为了解其感染的免疫机理和致病机理，国外学者通过动物实验证实，细胞介导的免疫反应在控制CT感染中起关键作用[2]。本研究对输卵管性不孕患者和输卵管结扎术后患者的部分输卵管组织行CT-DNA检测及病理学检查，并测定血清及盆腔液中一氧化氮(NO)及γ-干扰素(IFN-γ)的水平，寻求NO与女性盆腔CT感染的关系。
一、资料与方法
1.研究对象：1997年8月至1998年1月在我院妇科就诊不孕两年以上、经盆腔检查及输卵管碘油造影检查证实为输卵管堵塞的患者，21例；输卵管结扎术后行再通术者9例。平均年龄(30.0±3.8)岁，均无恶性肿瘤、糖尿病、高血压、自身免疫病、其他感染性疾病，无近期服用硝酸盐类药物史。根据Ruijs等[3]所制定的标准，即术中检查存在输卵管、卵巢周围粘连、输卵管积水，及因此引起输卵管梗阻者，诊断为盆腔炎。
, http://www.100md.com
2.方法：(1)输卵管组织标本采集：对输卵管性不孕患者在行腹腔镜下粘连分离或造口术时切取3 mm输卵管组织；对拟行输卵管再通术患者在开腹手术中，于结扎瘢痕处切取相同大小的输卵管组织。将组织块切成两段，一段置盛生理盐水的无菌试管中，-20℃冰箱保存，另一段置10%中性甲醛液中固定。(2)血清标本采集：手术前一日上午9时取肘正中静脉血2 ml，4℃、3 000 r/min离心15分钟，取上清液分装于两个试管内，置-20℃冰箱保存。(3)盆腔液采集：手术进入腹腔后立即抽取盆腔液4 ml，处理方法与血清相同，分装于两个试管内，置-20℃冰箱保存。(4)输卵管组织CT-DNA检测：使用套式聚合酶链反应(PCR)技术检测，试剂盒由无锡市克隆遗传技术研究所提供，于405 bp处出现荧光光带者为CT-DNA阳性。(5)血清及盆腔液中NO检测：使用酶法检测NO，试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。此方法利用硝酸还原酶特异地将NO3-还原为NO2-，通过检测NO2-的浓度间接反应NO的水平。用分光光度计于550 nm、0.5 cm光处，检测反应样品的吸光度值，计算NO水平。(6)血清及盆腔液中IFN-γ的检测：采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定，试剂盒由华美生化有限公司提供。(7)组织病理学检查：将固定好的组织块石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下观察。
, 百拇医药
3.统计学方法：采用t检验和χ2检验，相关性分析采用直线回归分析检验。
二、结果
1.30例患者输卵管组织CT-DNA检测结果：输卵管性不孕患者中13例CT-DNA阳性，阳性率62%；输卵管结扎术后患者CT-DNA阳性4例(4/9)，两者比较，差异无显著性(P>0.05)。
2.输卵管组织CT-DNA阳性与阴性患者的血清及盆腔液中NO测定结果：以输卵管组织CT-DNA阳性与否分别观察，CT-DNA阳性者血清NO水平明显高于CT-DNA阴性者；两者的盆腔液NO水平无明显差异。见表1。
表1 输卵管组织CT-DNA阳性与
阴性患者血清及盆腔液中NO
测定结果(μmol/L,
±s) 输卵管
, 百拇医药
组织
CT-DNA
血清
盆腔液
例数
NO
例数
NO
阳性
17
47.5±5.8
13
26.9±2.4
, 百拇医药
阴性
13
21.6±1.4
11
28.4±6.3
P值
<0.01
>0.05
注：有6例盆腔液混入血液，未计在内
3.30例患者血清与盆腔液中NO和IFN-γ测定结果：盆腔液与血清中的NO、IFN-γ均呈正相关，见表2。表2 30例患者血清与盆腔液中NO
和IFN-γ测定结果(±s)
, http://www.100md.com
类别
总
例
数
NO
(μmol/L)
IFN-γ
(ng/L)
r
P值
血清
30
45.3
, http://www.100md.com
±5.0
42.0
±1.1
0.862
<0.01
盆腔液
24
27.4
±3.0
19.2
±1.8
0.691
<0.01
, 百拇医药
4.盆腔炎患者与非盆腔炎患者盆腔液中NO水平比较：输卵管性不孕、CT-DNA阳性患者中9例(69%)有盆腔炎。盆腔炎患者CT-DNA阳性者盆腔液NO水平明显高于非盆腔炎患者CT-DNA阳性者，见表3。
表3 输卵管组织CT-DNA阴性与阳性
伴或不伴盆腔炎患者盆腔液中
NO水平比较(μmol/L,±s)
输卵管
组织
CT-DNA
盆腔炎
, http://www.100md.com 非盆腔炎
P值
例数
NO
例数
NO
阳性
9
32.3
±2.7
4
17.7
±3.1
<0.01
, http://www.100md.com
阴性
6
33.5
±7.2
5
12.9
±1.2
<0.05
5.组织病理学检查结果：13例CT-DNA阳性输卵管性不孕患者的组织标本，均有炎性细胞浸润，1例以输卵管粘膜下层中性粒细胞浸润为主，并伴有淋巴细胞和浆细胞浸润；12例(95%)以淋巴细胞浸润为主，分布于粘膜下层，并达输卵管壁各层，形成淋巴滤泡样结构，聚集成团、蓝色深染，粘膜上皮中断，上皮细胞肿胀、变形或破碎，可见淋巴细胞与上皮细胞紧密相邻，有的已脱入输卵管腔，伴有不同程度浆细胞浸润稀疏散在于粘膜下层；巨噬细胞却极少见。
, 百拇医药
三、讨论
1.输卵管性不孕与CT引起的盆腔炎直接相关：本资料中输卵管性不孕者CT-DNA阳性检出率62%，且有9/13例(69%)显示有盆腔炎改变，其发生率与国内外报道相一致[1]。
2.NO与盆腔CT感染相关：CT-DNA阳性者血清NO水平明显高于CT-DNA阴性者，血清及盆腔液中NO与IFN-γ水平间呈正相关。提示，盆腔CT感染可引起血中NO水平升高，且NO的生成可能受IFN-γ调节。关于细胞介导的免疫机理国外学者已在体外模型和动物实验中证实[2]，在人体尚缺乏证据。本资料中13例输卵管组织CT-DNA阳性者病理检查显示有95%为淋巴细胞及浆细胞浸润，巨噬细胞却极少见。说明，NO可能做为细胞内的效应分子杀伤细胞内寄生的CT，造成感染组织的损伤。
盆腔液NO水平在CT-DNA阳性与阴性者间无显著差异，而盆腔炎者CT-DNA阳性明显高于非盆腔炎者；同时，CT-DNA阳性、CT-DNA阴性患者的盆腔液和血清NO水平无明显相关。其原因，可能是盆腔液的NO除一小部分由血液渗透外，大部分来源局部的免疫反应，即当CT感染局限于输卵管内未引起炎症时，盆腔液的NO水平不升高。本资料中盆腔炎者，无论CT-DNA阳性或阴性，其盆腔液中NO水平均升高，可解释NO升高并非CT感染的特异表现[4]，也可能见于其他病原体引起的慢性炎症。
, 百拇医药
参考文献
1 李豫峰，罗丽兰. 生殖道沙眼衣原体感染与输卵管性不孕关系的研究. 中华妇产科杂志，1995， 30：471-474.
2 Patton DL. Immunopathology and histopa- thology of experimental chlamydial salpingitis. Rev Infect Dis, 1985, 7: 746-753.
3 Ruijs Gj, Kauer FM, Jager S, et al. Further details on sequelae at the cervical and tubal level of chlamydia trachomatis infection in infertile women. Fertil Steril, 1991, 56: 20-26.
4 孔宪寿. 一氧化氮与微生物感染. 国外医学微生物学分册，1997，20： 16-19.
收稿：1998-11-03
修回：1999-03-18, 百拇医药
单位：110003 沈阳,中国医科大学附属第二医院妇产科
关键词：
中华妇产科杂志990618 近年来，妇女生殖道沙眼衣原体(chlamydia trachomatis, CT)感染的发病率不断上升[1]，可导致不孕或异位妊娠。为了解其感染的免疫机理和致病机理，国外学者通过动物实验证实，细胞介导的免疫反应在控制CT感染中起关键作用[2]。本研究对输卵管性不孕患者和输卵管结扎术后患者的部分输卵管组织行CT-DNA检测及病理学检查，并测定血清及盆腔液中一氧化氮(NO)及γ-干扰素(IFN-γ)的水平，寻求NO与女性盆腔CT感染的关系。
一、资料与方法
1.研究对象：1997年8月至1998年1月在我院妇科就诊不孕两年以上、经盆腔检查及输卵管碘油造影检查证实为输卵管堵塞的患者，21例；输卵管结扎术后行再通术者9例。平均年龄(30.0±3.8)岁，均无恶性肿瘤、糖尿病、高血压、自身免疫病、其他感染性疾病，无近期服用硝酸盐类药物史。根据Ruijs等[3]所制定的标准，即术中检查存在输卵管、卵巢周围粘连、输卵管积水，及因此引起输卵管梗阻者，诊断为盆腔炎。
, http://www.100md.com
2.方法：(1)输卵管组织标本采集：对输卵管性不孕患者在行腹腔镜下粘连分离或造口术时切取3 mm输卵管组织；对拟行输卵管再通术患者在开腹手术中，于结扎瘢痕处切取相同大小的输卵管组织。将组织块切成两段，一段置盛生理盐水的无菌试管中，-20℃冰箱保存，另一段置10%中性甲醛液中固定。(2)血清标本采集：手术前一日上午9时取肘正中静脉血2 ml，4℃、3 000 r/min离心15分钟，取上清液分装于两个试管内，置-20℃冰箱保存。(3)盆腔液采集：手术进入腹腔后立即抽取盆腔液4 ml，处理方法与血清相同，分装于两个试管内，置-20℃冰箱保存。(4)输卵管组织CT-DNA检测：使用套式聚合酶链反应(PCR)技术检测，试剂盒由无锡市克隆遗传技术研究所提供，于405 bp处出现荧光光带者为CT-DNA阳性。(5)血清及盆腔液中NO检测：使用酶法检测NO，试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。此方法利用硝酸还原酶特异地将NO3-还原为NO2-，通过检测NO2-的浓度间接反应NO的水平。用分光光度计于550 nm、0.5 cm光处，检测反应样品的吸光度值，计算NO水平。(6)血清及盆腔液中IFN-γ的检测：采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定，试剂盒由华美生化有限公司提供。(7)组织病理学检查：将固定好的组织块石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下观察。
, 百拇医药
3.统计学方法：采用t检验和χ2检验，相关性分析采用直线回归分析检验。
二、结果
1.30例患者输卵管组织CT-DNA检测结果：输卵管性不孕患者中13例CT-DNA阳性，阳性率62%；输卵管结扎术后患者CT-DNA阳性4例(4/9)，两者比较，差异无显著性(P>0.05)。
2.输卵管组织CT-DNA阳性与阴性患者的血清及盆腔液中NO测定结果：以输卵管组织CT-DNA阳性与否分别观察，CT-DNA阳性者血清NO水平明显高于CT-DNA阴性者；两者的盆腔液NO水平无明显差异。见表1。
表1 输卵管组织CT-DNA阳性与
阴性患者血清及盆腔液中NO
测定结果(μmol/L,
±s) 输卵管, 百拇医药
组织
CT-DNA
血清
盆腔液
例数
NO
例数
NO
阳性
17
47.5±5.8
13
26.9±2.4
, 百拇医药
阴性
13
21.6±1.4
11
28.4±6.3
P值
<0.01
>0.05
注：有6例盆腔液混入血液，未计在内
3.30例患者血清与盆腔液中NO和IFN-γ测定结果：盆腔液与血清中的NO、IFN-γ均呈正相关，见表2。表2 30例患者血清与盆腔液中NO
和IFN-γ测定结果(
±s), http://www.100md.com
类别
总
例
数
NO
(μmol/L)
IFN-γ
(ng/L)
r
P值
血清
30
45.3
, http://www.100md.com
±5.0
42.0
±1.1
0.862
<0.01
盆腔液
24
27.4
±3.0
19.2
±1.8
0.691
<0.01
, 百拇医药
4.盆腔炎患者与非盆腔炎患者盆腔液中NO水平比较：输卵管性不孕、CT-DNA阳性患者中9例(69%)有盆腔炎。盆腔炎患者CT-DNA阳性者盆腔液NO水平明显高于非盆腔炎患者CT-DNA阳性者，见表3。
表3 输卵管组织CT-DNA阴性与阳性
伴或不伴盆腔炎患者盆腔液中
NO水平比较(μmol/L,
±s)输卵管
组织
CT-DNA
盆腔炎
, http://www.100md.com 非盆腔炎
P值
例数
NO
例数
NO
阳性
9
32.3
±2.7
4
17.7
±3.1
<0.01
, http://www.100md.com
阴性
6
33.5
±7.2
5
12.9
±1.2
<0.05
5.组织病理学检查结果：13例CT-DNA阳性输卵管性不孕患者的组织标本，均有炎性细胞浸润，1例以输卵管粘膜下层中性粒细胞浸润为主，并伴有淋巴细胞和浆细胞浸润；12例(95%)以淋巴细胞浸润为主，分布于粘膜下层，并达输卵管壁各层，形成淋巴滤泡样结构，聚集成团、蓝色深染，粘膜上皮中断，上皮细胞肿胀、变形或破碎，可见淋巴细胞与上皮细胞紧密相邻，有的已脱入输卵管腔，伴有不同程度浆细胞浸润稀疏散在于粘膜下层；巨噬细胞却极少见。
, 百拇医药
三、讨论
1.输卵管性不孕与CT引起的盆腔炎直接相关：本资料中输卵管性不孕者CT-DNA阳性检出率62%，且有9/13例(69%)显示有盆腔炎改变，其发生率与国内外报道相一致[1]。
2.NO与盆腔CT感染相关：CT-DNA阳性者血清NO水平明显高于CT-DNA阴性者，血清及盆腔液中NO与IFN-γ水平间呈正相关。提示，盆腔CT感染可引起血中NO水平升高，且NO的生成可能受IFN-γ调节。关于细胞介导的免疫机理国外学者已在体外模型和动物实验中证实[2]，在人体尚缺乏证据。本资料中13例输卵管组织CT-DNA阳性者病理检查显示有95%为淋巴细胞及浆细胞浸润，巨噬细胞却极少见。说明，NO可能做为细胞内的效应分子杀伤细胞内寄生的CT，造成感染组织的损伤。
盆腔液NO水平在CT-DNA阳性与阴性者间无显著差异，而盆腔炎者CT-DNA阳性明显高于非盆腔炎者；同时，CT-DNA阳性、CT-DNA阴性患者的盆腔液和血清NO水平无明显相关。其原因，可能是盆腔液的NO除一小部分由血液渗透外，大部分来源局部的免疫反应，即当CT感染局限于输卵管内未引起炎症时，盆腔液的NO水平不升高。本资料中盆腔炎者，无论CT-DNA阳性或阴性，其盆腔液中NO水平均升高，可解释NO升高并非CT感染的特异表现[4]，也可能见于其他病原体引起的慢性炎症。
, 百拇医药
参考文献
1 李豫峰，罗丽兰. 生殖道沙眼衣原体感染与输卵管性不孕关系的研究. 中华妇产科杂志，1995， 30：471-474.
2 Patton DL. Immunopathology and histopa- thology of experimental chlamydial salpingitis. Rev Infect Dis, 1985, 7: 746-753.
3 Ruijs Gj, Kauer FM, Jager S, et al. Further details on sequelae at the cervical and tubal level of chlamydia trachomatis infection in infertile women. Fertil Steril, 1991, 56: 20-26.
4 孔宪寿. 一氧化氮与微生物感染. 国外医学微生物学分册，1997，20： 16-19.
收稿：1998-11-03
修回：1999-03-18, 百拇医药