育龄期、围绝经期及绝经后妇女外周血血小板活化分子的检测
作者：李秀云 尹格平 王玉芝 陈涌芬 孙晓明
单位：李秀云，尹格平，王玉芝，陈涌芬 济南军区总医院妇产科 250031；孙晓明 流式细胞研究室
关键词：
中华妇产科杂志990825 为探讨育龄期、围绝经期及绝经后妇女外周血血小板活化状态以及与心血管疾病的相关关系，本研究对265例不同时期的健康者和绝经后患有心、脑血管等疾病患者外周血血小板活化分子P选择素(CD62p)、整合素Ⅲa链CD41及整合素Ⅱb链CD61进行测定，现报道如下。
一、资料及方法
1.研究对象：1997年1月至1998年2月在我院门诊查体的健康妇女及住院患者，共265例。育龄组：60例，平均年龄31岁；围绝经期组：66例，平均年龄47岁；绝经后健康组；49例，平均年龄59岁；绝经后疾病组90例，其中患冠心病、糖尿病、脑梗塞和高血压病的例数和平均年龄分别是31例、63岁，13例、57岁，20例、59岁和26例、56岁。
, 百拇医药
2.方法：(1)富含血小板血清的制备：抽肘静脉血1 ml，以2%乙二氨四己酸(1∶9)抗凝，离心(800 r/min)5分钟取血清。(2)异硫氰酸荧光素标记的3种鼠抗人单克隆CD61、CD41及CD62p免疫标记血小板：取4支试管，均加血小板血清500 μl，再分别加入CD62p、CD41、CD61及羊抗鼠IgG1工作液20 μl，避光反应30分钟，离心(2000r/min)15分钟，除去上清液后加500 μl磷酸盐缓冲液待检。(3)FACScan型流式细胞仪检测：每份样品检测2万个血小板。(4)血小板活化分子检出率：以被单克隆抗体标记阳性的血小板百分数表示。计算方法：活化血小板检出率=单克隆抗体标记阳性血小板%-羊抗鼠IgG1标记阳性血小板%(被羊抗鼠IgG1标记阳性的血小板是免疫反应中的误差)[1]。
, 百拇医药 3.统计学方法：采用t检验。
二、结果
绝经后健康组较育龄组CD62p增加3.37倍(P<0.01)。CD61及CD41均增加(P<0.05)；围绝经期组CD62p较育龄组增加1.60倍(P<0.05)，CD61及CD41分别增加1.60和1.53倍(P>0.05)；绝经后健康组CD62p较围绝经期组增加2.11倍(P<0.05)。育龄组、围绝经期组和绝经后妇女随年龄增长，血小板CD62p、CD61及CD41水平呈逐渐上升趋势。绝经后疾病组血小板CD62p均显著高于绝经后健康组(P均<0.05)；脑梗塞和高血压病患者CD61检出率显著增高(P<0.05)；糖尿病、脑梗塞及高血压病患者CD41检出率显著增高(P<0.05)。在绝经后疾病组患者之间血小板活化分子检出率差异无显著性(P>0.05)。见表1。
, 百拇医药
表1 各组患者外周血小板活化分子检出率(%，x±s) 组别
总例数
CD62p
CD61
CD41
育龄组
60
2.07±1.51
1.53±1.31
2.59±1.33
围绝经期组
, 百拇医药
66
3.31±1.07
2.45±1.48
3.97±1.83
绝经后健康组
49
6.97±2.36*
4.14±2.16
6.17±2.40
绝经后疾病组
90
冠心病
, http://www.100md.com
31
9.38±3.17**
6.75±3.24*
8.91±4.43*
糖尿病
13
10.97±4.14**
6.54±3.01*
11.74±5.94**
脑梗塞
, http://www.100md.com 20
11.70±5.61**
7.96±3.52*
11.36±5.01**
高血压病
26
10.36±4.48**
7.57±4.01*
10.20±3.74**
与绝经前比较，*P<0.05 **P<0.01
, 百拇医药
三、讨论
CD62p作为抗原分子在血小板α-颗粒内表达，经激活或凝血酶刺激后，此抗原转移到血小板和内皮细胞表面，介导中性粒细胞和单核细胞对活化血小板和内皮细胞的粘附，使血小板成为活化血小板[2]；CD61又称血小板整合素α-Ⅱb链，与CD41联合形成GPⅡb/Ⅲa复合物，后者是纤维蛋白原的受体。CD62p的表达以及GPⅡb/Ⅲa复合物的形成，是血小板活化的重要标志[3]。
从本研究结果看，健康妇女随年龄增长，血小板活化分子CD62p、CD61及CD41逐渐增多，冠心病、糖尿病，脑梗塞及高血压病患者均与血小板活化分子增多有密切关系。这也是重要的病理生化特征，而CD62p的改变最为明显。
, 百拇医药
参考文献
1 尹格平，孙晓明，方强三.老年癌症患者手术前后血小板活化状态检测的临床意义.中国肿瘤临床与康复，1998，5：26-28.
2 Lucia G, Piet WM, Albert EG, et al. P-selectin Ca-dependent adhesion of activated platelets to many different types of leukocytes: detection by flow cytometry. Blood, 1992,80：134-142.
3 武艺，左连富，曹雪笠，等.冠心病患者血小板膜结合纤维蛋白原的免疫荧光定量研究.中华心血管病杂志，1996, 24：200-202.
(收稿：1998-05-04 修回：1999-05-06), 百拇医药
单位：李秀云，尹格平，王玉芝，陈涌芬 济南军区总医院妇产科 250031；孙晓明 流式细胞研究室
关键词：
中华妇产科杂志990825 为探讨育龄期、围绝经期及绝经后妇女外周血血小板活化状态以及与心血管疾病的相关关系，本研究对265例不同时期的健康者和绝经后患有心、脑血管等疾病患者外周血血小板活化分子P选择素(CD62p)、整合素Ⅲa链CD41及整合素Ⅱb链CD61进行测定，现报道如下。
一、资料及方法
1.研究对象：1997年1月至1998年2月在我院门诊查体的健康妇女及住院患者，共265例。育龄组：60例，平均年龄31岁；围绝经期组：66例，平均年龄47岁；绝经后健康组；49例，平均年龄59岁；绝经后疾病组90例，其中患冠心病、糖尿病、脑梗塞和高血压病的例数和平均年龄分别是31例、63岁，13例、57岁，20例、59岁和26例、56岁。
, 百拇医药
2.方法：(1)富含血小板血清的制备：抽肘静脉血1 ml，以2%乙二氨四己酸(1∶9)抗凝，离心(800 r/min)5分钟取血清。(2)异硫氰酸荧光素标记的3种鼠抗人单克隆CD61、CD41及CD62p免疫标记血小板：取4支试管，均加血小板血清500 μl，再分别加入CD62p、CD41、CD61及羊抗鼠IgG1工作液20 μl，避光反应30分钟，离心(2000r/min)15分钟，除去上清液后加500 μl磷酸盐缓冲液待检。(3)FACScan型流式细胞仪检测：每份样品检测2万个血小板。(4)血小板活化分子检出率：以被单克隆抗体标记阳性的血小板百分数表示。计算方法：活化血小板检出率=单克隆抗体标记阳性血小板%-羊抗鼠IgG1标记阳性血小板%(被羊抗鼠IgG1标记阳性的血小板是免疫反应中的误差)[1]。
, 百拇医药 3.统计学方法：采用t检验。
二、结果
绝经后健康组较育龄组CD62p增加3.37倍(P<0.01)。CD61及CD41均增加(P<0.05)；围绝经期组CD62p较育龄组增加1.60倍(P<0.05)，CD61及CD41分别增加1.60和1.53倍(P>0.05)；绝经后健康组CD62p较围绝经期组增加2.11倍(P<0.05)。育龄组、围绝经期组和绝经后妇女随年龄增长，血小板CD62p、CD61及CD41水平呈逐渐上升趋势。绝经后疾病组血小板CD62p均显著高于绝经后健康组(P均<0.05)；脑梗塞和高血压病患者CD61检出率显著增高(P<0.05)；糖尿病、脑梗塞及高血压病患者CD41检出率显著增高(P<0.05)。在绝经后疾病组患者之间血小板活化分子检出率差异无显著性(P>0.05)。见表1。
, 百拇医药
表1 各组患者外周血小板活化分子检出率(%，x±s) 组别
总例数
CD62p
CD61
CD41
育龄组
60
2.07±1.51
1.53±1.31
2.59±1.33
围绝经期组
, 百拇医药
66
3.31±1.07
2.45±1.48
3.97±1.83
绝经后健康组
49
6.97±2.36*
4.14±2.16
6.17±2.40
绝经后疾病组
90
冠心病
, http://www.100md.com
31
9.38±3.17**
6.75±3.24*
8.91±4.43*
糖尿病
13
10.97±4.14**
6.54±3.01*
11.74±5.94**
脑梗塞
, http://www.100md.com 20
11.70±5.61**
7.96±3.52*
11.36±5.01**
高血压病
26
10.36±4.48**
7.57±4.01*
10.20±3.74**
与绝经前比较，*P<0.05 **P<0.01
, 百拇医药
三、讨论
CD62p作为抗原分子在血小板α-颗粒内表达，经激活或凝血酶刺激后，此抗原转移到血小板和内皮细胞表面，介导中性粒细胞和单核细胞对活化血小板和内皮细胞的粘附，使血小板成为活化血小板[2]；CD61又称血小板整合素α-Ⅱb链，与CD41联合形成GPⅡb/Ⅲa复合物，后者是纤维蛋白原的受体。CD62p的表达以及GPⅡb/Ⅲa复合物的形成，是血小板活化的重要标志[3]。
从本研究结果看，健康妇女随年龄增长，血小板活化分子CD62p、CD61及CD41逐渐增多，冠心病、糖尿病，脑梗塞及高血压病患者均与血小板活化分子增多有密切关系。这也是重要的病理生化特征，而CD62p的改变最为明显。
, 百拇医药
参考文献
1 尹格平，孙晓明，方强三.老年癌症患者手术前后血小板活化状态检测的临床意义.中国肿瘤临床与康复，1998，5：26-28.
2 Lucia G, Piet WM, Albert EG, et al. P-selectin Ca-dependent adhesion of activated platelets to many different types of leukocytes: detection by flow cytometry. Blood, 1992,80：134-142.
3 武艺，左连富，曹雪笠，等.冠心病患者血小板膜结合纤维蛋白原的免疫荧光定量研究.中华心血管病杂志，1996, 24：200-202.
(收稿：1998-05-04 修回：1999-05-06), 百拇医药