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编号:10268556
头颈部恶性肿瘤患者血小板聚集性的电镜观察
http://www.100md.com 《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》 1998年第5期
     作者:郑芸 梁传余

    单位:610041 成都 华西医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科

    关键词:头颈部肿瘤;;血小板聚集;;预后;;显微镜检查;电子

    中华耳鼻咽喉科杂志980505 【摘要】 目的 探讨头颈部恶性肿瘤与血小板聚集性的关系。方法 采用电镜方法,以血小板聚集型百分比为指标,检测了37例头颈部恶性肿瘤患者的血小板聚集性,并以非肿瘤患者和良性肿瘤患者各10例作为对照。随访了手术后4~6个月的25例头颈部恶性肿瘤患者的血小板聚集性的改变值。结果 ①头颈部恶性肿瘤患者的血小板聚集型百分比均数显著高于非肿瘤患者和良性肿瘤患者(P值均小于0.05);②头颈部恶性肿瘤患者血小板聚集型百分比随临床分期进展而显著增高(P<0.05);③手术后4~6月的随访患者中,17例无转移和无复发患者的血小板聚集型百分比较手术前显著降低(P<0.05);8例有转移或有复发患者的血小板聚集型百分比则较手术前显著增高(P<0.05)。结论 ①头颈部恶性肿瘤患者的血小板聚集性增加;②电镜方法测定的血小板聚集型百分比在判断头颈部恶性肿瘤的发展、疗效和预后上可能有潜在的价值。
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    Observation on platelet aggregative ability in patients with malignant tumors of head and neck by electron microscope Zheng Yun, Liang Chuanyu . ENT Department , The First University Hospital of West China University of Medical Sciences , Chengdu 610041

    【Abstract】 Objective To investigate the relationship between the platelet aggregative ability and malignant tumors of head and neck. Method Platelet aggregative ability was detected by electron microscopy (EM) in 37 patients with malignant tumors of head and neck(Group C), 10 patients with non-neoplastic diseases(GroupA) and 10 patients with benign tumors of head and neck(Group B) as the control group, with the ratio of aggregative type platelets as the index. Twenty-five of 37 patients with malignant tumors except 8 cases of nasopharyngeal carcinoma were included in the follow-up study 4-6 months after operations. Results ①The mean ratio of aggregative type platelets in patients from Group C was significantly higher that that of Group A or Group B patients (P<0.05);②In Gronp C , the mean ratio of aggegative type platelets inereased significantly with the development of clinical staging(P<0.05);③In follow-up study, the mean ratio of aggregative type platelets of 17 patients without metastasis and recurrence was significantly lower than that before-operation, while the results of 8 patients with metastasis or recurrence was totally opposite. Conclusions ①The aggregative ability of platelets increased in patients with malignant tumors of head and neck;②The ratio of aggregative type platelets detected by EM has an important potential value in judging the development、therapeutic effects and prognosis of the malignant tumors of head and neck.
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    【Key words】 Head and neck neoplasms Platelet aggregation Prognosis Microscopy, electron

    近年来血小板与恶性肿瘤的关系日益受到重视。本实验目的在于通过对头颈部恶性肿瘤患者血小板聚集情况的电镜观察,初步探索血小板聚集性与头颈部恶性肿瘤的关系,以期为抗血小板药物在头颈部恶性肿瘤治疗中的应用提供实验参考,从而为在该领域进行更深入的研究作些前期工作。

    材料与方法

    一、对象及分组

    A组:非肿瘤患者10例,其中慢性中耳炎4例,慢性扁桃体炎、食管异物、鼾症、鼻中隔偏曲、慢性上颌窦炎、Hunt综合症各1例。年龄45岁~68岁,平均51.3岁。均为男性。

    B组:为头颈部良性肿瘤患者10例,其中鼻乳头状瘤5例,外耳道乳头状瘤2例,口咽部粘液腺瘤、会厌平滑肌瘤及喉乳头状瘤各1例。年龄42岁~65岁,平均51.5岁。男7例,女3例。
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    C组:为头颈部恶性肿瘤患者37例,其中鼻咽癌8例,喉鳞癌18例,下咽鳞癌5例,鼻腔鼻窦恶性肿瘤6例。按UICC 1987年头颈部恶性肿瘤TNM分期标准,Ⅰ期和Ⅱ期18例,Ⅲ期及Ⅳ期19例。年龄44岁~68岁,平均54.5岁。男34例,女3例。

    D组:为C组中除去8例鼻咽癌(因放射治疗对血小板聚集性有影响)后的29例中随访4~6个月的25例。此组仅经过手术治疗,又分为a、b两组。

    a组:手术后无转移和无复发组,共17例。鼻腔鼻窦恶性肿瘤3例,喉鳞癌12例,下咽鳞癌2例。其中,Ⅰ期和Ⅱ期患者13例,Ⅲ期和Ⅳ期患者4例。年龄44~64岁,平均55.4岁。男15例,女2例。

    b组:手术后有转移或复发组,共8例。鼻腔鼻窦恶性肿瘤1例,喉鳞癌5例,下咽鳞癌2例。其中,Ⅰ期和Ⅱ期患者1例,Ⅲ期和Ⅳ期患者7例。局部复发2例,颈淋巴结转移5例,远处转移1例。年龄44~6.8岁。均为男性。
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    二、方法

    1.标本的采集、制备:晨起空腹肘静脉取血1 ml,迅速注入含抗凝剂的试管内,并轻轻摇匀。将抗凝血铺于有Formvar膜的铜网载片上,37℃下孵育3分钟。清水冲洗后固定2分钟至5分钟。自然干燥后电镜观察。

    2. 电镜观察:每例标本在电镜下(日本日立H-600型透射电子显微镜)连续观察100个不同的血小板,并同时进行分类计数。

    3. 观测指标及判定标准: 电镜下血小板分四型:圆型、树枝型、展平型和聚集型[1]。本实验以聚集型所占百分比为观测指标。除聚集型外,其余三型均称单体血小板。按下列公式计算血小板聚集型所占百分比:

    各型血小板的判定标准[1]:①圆型:形圆或椭圆,体积小,有一个大的电子致密核心,边缘为低电子密度的狭窄透明带(图1);②树枝型:形态不规则,从中央致密区发出数量不等的细长或分枝状的伪足突起(图2);③展平型:中央有一小的致密核心,周围有一相当宽的透明带,边缘光滑或有小突起(图3);④聚集型:由数量不等的血小板聚集在一起形成的大小不等的聚集体,其中的血小板互相接触或彼此融合,周缘部的血小板可见有不同的伪足(图4)。两个或两个以上血小板粘连聚集在一起即称一个聚集型。
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    4.统计分析:对A、B、C三组间血小板聚集型百分比的比较用横断面研究,采用方差分析。

    对D组手术前后血小板聚集性的比较是用自身前后对照研究,采用配对比较的符号秩和检验进行统计分析。

    结果

    1.A、B、C组患者血小板聚集型百分比均数(±s,%)分别为:A组 20.90±10.43; B组22.90± 8.32; C组37.38±18.71; C组的“Ⅰ期+Ⅱ期”31.39±13.76; C组的“Ⅲ期+Ⅳ期”43.05±21.24。 由此可见:A、B两组间血小板聚集型百分比均数差异无显著性(P>0.05)。C组血小板聚集型百分比均数显著大于A组、B组(P值均小于0.05)。C组中Ⅰ期和Ⅱ期患者血小板聚集型百分比均数与A组、B组比较,结果差异无显著性(P值均大于0.05),C组中Ⅲ期和Ⅳ期患者血小板聚集型百分比均数则显著大于A、B两组(P值均小于0.05)。
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    2.D组(随访组)中的a组术前与术后4~6个月的血小板聚集型百分比分别为(30.59±10.55)%和(25.82±6.26)%,二者之间差异有显著性(P<0.05);b组术前与术后4~6个月的血小板聚集型百分比分别为(56.00±13.94)%和(65.25±9.05)%,二者间差异亦有显著性(P<0.05)。

    讨论

    大多数头颈部恶性肿瘤的原发灶经手术、放射治疗、化学治疗后多可得以控制,但肿瘤的转移和复发却常使治疗失败。研究血小板聚集性与头颈部恶性肿瘤的关系可以初步了解血小板在头颈部恶性肿瘤发展过程中所起作用,以寻找一种能有效地辅助治疗头颈部恶性肿瘤的方法,提高治疗效果。

    测定血小板聚集性的方法中常见的是通过测定富含血小板血浆经搅动或加入聚集剂后的光密度变化来测定血小板聚集性。本实验是以Formvar膜为人工粗糙面使血小板粘附聚集,然后在电镜下测定Formvar膜上的血小板聚集型比例。此方法的优点在于不仅能通过对Formvar膜上的血小板分类计数计算出聚集型的比例,而且能直接看到血小板聚集型的大小。此外,本法所需血量不多(仅1ml),操作简易,所需试剂容易获得,是测定血小板聚集性的一种较为理想的方法。
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    本实验观察到电镜下血小板有四种形态:圆型、树枝型、展平型和聚集型,与文献报道一致[1]。不同类型的血小板代表不同的功能状态:圆型与树枝型血小板表面活性小,聚集性低;展平型表面活性较大,提示血小板有聚集趋势;聚集型血小板是不同类型血小板相互接触或融合形成的血小板聚合物,可直接反映血小板聚集性。正常情况下,电镜下各型血小板有一定比例。据文献报道,聚集型血小板在25%以下为正常范围,26%~30%为可疑增高范围,30%以上应考虑为病理值。血小板聚集型的增加提示血小板聚集性增加及血小板的活化,并提示有容易形成血栓和发生栓塞的危险。

    本实验发现的头颈恶性肿瘤患者的血小板聚集性显著高于非肿瘤及良性肿瘤患者,与国内外有关其它类型恶性肿瘤伴血小板聚集性增高的报道一致[2,3]。提示头颈部恶性肿瘤具有激活血小板并促其聚集的能力。其具体机制包括:①恶性肿瘤细胞通过释放ADP[4]、浆膜微泡和组织蛋白酶-B[5];②激活凝血系统产生凝血酶[2,4];③激活瘤细胞表面的胰酶敏感的蛋白质和血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa多功能受体[6]以及④激活花生四烯酸代谢[4],破坏前列腺素I2和血栓素A2的平衡等不同机制来激活血小板,促其聚集性增加。
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    本实验结果也提示:头颈部恶性肿瘤随临床分期的增高、转移或复发的发生,对机体正常组织的侵蚀破坏越严重,释放的代谢产物以及蛋白分解产物越多,对血小板聚集功能影响越大,故而血小板聚集性越高。血小板可能在头颈部恶性肿瘤的发展过程中起一定促进作用,这可能是因为随血小板聚集型百分比增加,血小板聚集性和活化程度增高,释放各种活性物质[7,8](如血小板源性衍生生长因子、血小板因子4、血小板碱性蛋白、转化因子β等)的能力就越强,而这些活性物质在肿瘤的增殖、浸润性生长和转移等过程中均起着较强的促进作用。

    图1 圆型血小板:血小板为圆形或椭圆形,体积小,有一个大的电子致密核心,边缘为低电子密度的狭窄透明带。EM×3 000 图2 树枝型血小板:形态不规则,从中央致密区发出数量不等的细长或分枝状的伪足突起。EM×3 000 图3 展平型血小板:中央有一小的致密核心,周围有一相当宽的透明带,边缘光滑或有小突起。EM×2 000 图4 聚集型血小板:由数量不等的血小板粘连聚集在一起形成的大小不等的聚集体,其中的血小板互相接触或彼此融合,周缘部的血小板可见有不同的伪足。EM×2 000
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    参考文献

    1 洪明理,崔萍,付治峰,等.血小板超微结构研究Ⅱ:粘附,聚集血小板的电镜观察. 中华血液学杂志, 1982,3:266-268.

    2 Longenecder GL,Beyers BJ, Bowen RJ, et al. Human rhabdosarcoma cell-induced aggregation of blood platelets. Cancer Res, 1989,49:16-19.

    3 Gasic GJ,Gasic TR, Stewart CC. Platelet-tumor cell interaction in mice. The role of platelets in the spread of malignant disease. Int J Cancer, 1973,11:704-708.
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    4 Bastida E,Ordinas A. Platelet contribution to the formation of metastatic foci: the role of cancer cell-induced platelet activation. Haemostasis, 1988,18:29-34.

    5 Naschitz JE, Yeshurum D, Lev LM. Thromboembolism in cancer. Cancer, 1993,71:1384-1389.

    6 Kitogawa H, Yamamoto N, Yamamoto k, et al. Involvement of platelet membrane glycoprotein Ib and glycoproteinⅡb/Ⅲa complex in thrombin-depenpendent platelet aggregation induced by tumor cells. Cancer Res, 1989,49:537-540.
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    7 Annotation. Malignancy and hemostasis. Br J Haematol, 1980,44:173-178.

    8 Mehta P. Potential role of platelets in the pathogenesis of tumor metastasis. Blood, 1984,63:55-57.

    (收稿:1998-03-03 修回:1998-07-08)

    消息

    中华医学会耳鼻咽喉科学分会中华耳鼻咽喉科杂志编委会

    1999年学术会议计划

    中华医学会耳鼻咽喉科学分会中华耳鼻咽喉科杂志编委会拟订1999年学术会议计划,通知如下。
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    一、1999年5月在深圳召开全国喉功能保留手术治疗学术会议,交流喉肿瘤外科治疗经验,举办专题演讲。征文内容:①喉癌部分喉切除术及修复;②下咽癌喉功能保留手术;③舌根癌手术治疗中的喉功能问题;④有关保留喉功能的其他治疗方案;⑤部分喉手术的命名、手术范围及适应症。

    二、1999年9月在成都召开中华耳鼻咽喉科杂志第六届编委会第二次会议暨全国耳鼻咽喉-头颈外科主任座谈会。

    三、1999年9月在成都召开全国耳鼻咽喉科遗传和免疫专题学术会议。征稿内容:①耳鼻咽喉科遗传性和免疫性疾病的基础研究和临床研究;②头颈肿瘤与免疫。

    希望各地分会及时通知耳鼻咽喉科及相关学科工作者,并相互转告,欢迎积极投稿。投稿请寄中文论文一份,并附结构式摘要一式二份(1000字以下)。文稿请注明作者单位,地址及邮政编码。请附单位介绍信。不退稿。截稿日期分别是1999年2月底和1999年6月底。收稿地点:北京东四西大街42号中华耳鼻咽喉科杂志编辑部(邮编:100710;Tel:010-65273369),请务必在信封左下角注明会议名称,以免混淆。

    中华医学会耳鼻咽喉科分会中华耳鼻咽喉科杂志编委会

    (收稿:1998-08-26), 百拇医药