耳廓假性囊肿免疫学病因的初步探讨
作者：陈乾美 赵田芬 杨秀海 吴波 林尚泽 汪彪 费樱 罗殿熙
单位：550004 贵阳医学院耳鼻咽喉学教研室(陈乾美、赵田芬、杨秀海、吴波、林尚泽)，临床免疫学教研室(汪彪、费樱、罗殿熙)
关键词：外耳；免疫测定；自身免疫
中华耳鼻烟喉科杂志990413 摘要 目的 探讨耳廓假性囊肿发病与全身免疫功能及局部免疫状态的关系。方法 采集44例耳廓假性囊肿患者的囊液和外周静脉血标本，用免疫单扩散法分别检测囊液和血清中的抗体IgG、 IgA、IgM和补体C3水平；用聚乙二醇比浊法分别检测囊液和患者血清中的免疫复合物含量；用聚合酶链反应检测囊液中巨细胞病毒DNA；用免疫荧光技术检测囊液和血清中的抗核抗体，用间接荧光抗体检测法(indirect immnofluoresce assay,IFA)检查囊液和患者血清与健康小鼠耳廓冰冻组织切片的反应情况。结果 耳廓假性囊肿患者囊液中抗体IgG、IgA、IgM和补体C3水平均明显低于血清中者(P<0.01)，囊液和患者血清中均未检出免疫复合物，囊液中也未检测出巨细胞病毒DNA；但在部分(3/10)患者囊液中发现了抗核抗体，在小鼠冰冻切片中发现了位于软骨组织上的抗原抗体复合物。结论 耳廓假性囊肿中部分患者可能是局限于耳廓的自身免疫性疾病，可能是由于自身抗体与耳廓组织发生自身免疫反应导致反应性渗出液在局部聚集形成囊肿。
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The immunological cause of auricular pseudocyst
CHEN Qianmei, ZHAO Tianfen, YANG Xiuhai, et al.
Department of Otorhinolaryngology, First Affiliated Hospital of Guiyang Medical College, Guiyang 550004
Abstract Objective To elucidate the relationship between the auricular pseudocyst and the systemic and local immunological status. Methods The cyst fluid and blood samples of 44 cases were collected to measure contents of IgG, IgA, IgM and complement C3 by radial immunodiffusion, the content of immune complex by polyethylene glycol turbidimetry, DNA of cytomegalovirus in the fluid by polymerose chain reaction, anti-nuclear antibody(ANA) by immunofluorescent technique and reactions between samples and frozen sections of healthy white rat. Results Contents of IgG,IgA,IgM and C3 in the cyst fluid were significantly lower than those in the serum (P<0.01). No immune complex could be detected in both serum and cyst fluid. No DNA of cytomegalovirus was found in cyst fluid, whereas ANA was discovered. Reactive immunocomplex in the auricular cartilaginous tissue was found in the frozen sections of white rats. Conclusion The results suggest that auriular pseudocyst may be an autoimmune disease involving the auricle. The possible mechanism may be an accumulation of reactive exudate due to immunoreactions of autologous antibody and auricular tissue.
, 百拇医药
Key words Ear,external Immunoassay Autoimmunity
耳廓假性囊肿 (pseudocyst of auricle)是耳科常见疾病，表现为耳廓外侧面上半部的局限性肿胀，内有浆液性液体聚集形成囊肿样隆起。其病因及发病机制至今仍不清楚[1，2]。为了探讨该病与机体的免疫功能是否有关，我们对44例耳廓假性囊肿患者的囊液和血清中的3种免疫球蛋白、补体C3、抗核抗体及免疫复合物等进行了初步检测。
资料及方法
一、临床资料
44例耳廓假性囊肿患者系本院1997～1998 年的门诊患者，男38例，女6例；年龄20～80岁。均为单耳发病，均系首次发病，其中右耳28例，左耳16例。囊肿部位在舟状窝者22例, 在耳甲腔5例，耳甲艇8例，三角窝9例。病程7天～3个月。
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二、实验方法
1. 用无菌空针抽取囊液，同时采患者静脉血3 ml。 用免疫单扩散法分别检测囊液和血清中的IgG、IgA、IgM和补体C3水平(抗血清由上海生物制品研究所提供)；聚乙二醇比浊法分别检测囊液和血清中的免疫复合物含量。用相同方法检测100例健康人血清中上述抗体和补体C3含量。
2. 用免疫荧光技术检测10份患者血清和囊液中的抗核抗体。
3. 用聚合酶链反应检测20份囊液中巨细胞病毒DNA(药盒购自成都华美生物工程公司)。
4. 将健康的昆明小鼠12只处死后，取耳廓制作快速冰冻切片为抗原，用间接免疫荧光抗体检测 (indirect immnofluoresce assay,IFA) 法检查13份囊液中抗体是否与之反应以及反应发生的部位；用同样方法观察13例患者血清和10例健康人血清与抗原的反应。
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三、统计方法
在计算机上使用美国SPSS统计软件包对实验1各项结果作两样本均数比较u检验t检验。
结果
1. 44份患者囊液及血清中抗体和补体C3检测结果见表1。健康人血清IgG、IgA、IgM和 C3水平(
±s)分别为(12.87±1.35)g/L、(2.35±0.34)g/L、(1.08±0.24)g/L和(1.14±0.27)g/L，患者血清中抗体和补体C3结果相比，差异无显著性，P值均>0.05。
表1 耳廓囊肿44例患者囊液及血清中抗体和补体检测结果(g/L，±s) 检测标本
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IgG
IgA
IgM
C3
血清
12.08±4.20
2.30±1.56
1.24±0.62
1.22±0.40
囊液
6.22±3.87
1.30±1.41
, 百拇医药
0.91±0.72
0.83±0.48
u值
6.8081
2.3188
2.2852
4.1487
P值
<0.0001
<0.05
<0.05
<0.0001
, http://www.100md.com 2. 44份囊液和血清中免疫复合物检测均为阴性。
3. 10份患者血清中抗核抗体呈阴性；3份囊液中抗核抗体阳性。
4. 检测20份囊液中均未发现巨细胞病毒DNA。
5. IFA发现，13份囊液中的抗体均可与小鼠耳廓的组织产生结合(包括3份抗核抗体阳性的囊液)，反应性免疫复合物位于耳廓的软骨组织内(图1)。患者血清及健康人血清也与小鼠耳廓组织产生一定结合；但反应部位发生在皮肤角质层(图2)。
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图1 小鼠耳廓与患者囊液作用后，可见小鼠耳廓软骨细胞周围有强烈的荧光反应。A 耳廓软骨细胞，C 耳廓皮肤角质层，下图同。 IFA ×145 图2 小鼠耳廓与患者血清作用后，小鼠耳廓软骨细胞周围未见明显荧光反应，但皮肤角质层有荧光反应。 IFA ×145
讨论
耳廓假性囊肿是一种无菌性浆液性渗出反应[3]。从本组检测结果看，患者囊液中亦未发现巨细胞病毒的DNA，显示耳廓假性囊肿与巨细胞病毒感染无关。
Helm等[4]1992年用直接免疫荧光技术检查了1例合并有耳廓假性囊肿的多发性软骨炎复发患者，发现在软骨膜上有IgG和C3，表皮真皮层有IgG，提出直接免疫荧光技术可在临床常规组织学检查发现阳性结果之前诊断复发。孙捷英等[5]1990年报道29例耳廓假性囊肿患者的免疫学检查，发现患者血清中的抗体IgA、IgG及免疫复合物比正常对照组高，囊液中的免疫复合物水平与对照组血清中者相比差异有显著性意义。
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本组检测发现患者血清中的各种抗体和补体C3均与健康人差异无显著性, 初步提示患者整体免疫功能可能是正常的；囊液中的抗体IgG、IgA、IgM和C3的水平均明显低于其血清中的含量(P<0.05～0.0001)。一种可能的解释是：囊液很可能是由血浆中渗出的，因此其抗体和补体C3的水平低于血清；另一种可能是囊肿中很可能有免疫反应发生，部分抗体以及补体可能与相应的抗原结合了。
但是，无论在患者的血清和囊液中都未检测到免疫复合物，说明即使有抗原存在，也不会是可溶性抗原，而可能是局限在病变部位的组织抗原。基于这种假设，我们用小鼠耳廓的冰冻组织切片与囊液作间接荧光抗体反应，结果在小鼠耳廓软骨组织内发现了抗原抗体复合物，提示患者囊液中的抗体是一种抗组织抗体，对人体是一种自身抗体。检测中发现部分囊液中(3/10)有抗核抗体存在，进一步说明这部分耳廓假性囊肿很可能是一种自身免疫性疾病，由于自身抗体与耳廓软骨组织发生免疫反应，导致液体在局部聚集而形成囊肿。
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本项目由贵州省科学基金资助(黔基1998-198号)
参考文献
1 朱利相，王秀云(综述). 耳廓假性囊肿.国外医学耳鼻咽喉科分册，1993，17:136-138.
2 刘文忠. 耳廓假性囊肿发病机理的探讨.中华耳鼻咽喉科杂志，1986，21:50-51.
3 黄选兆，主编. 耳鼻咽喉科学. 北京：人民卫生出版社，1995.240-241.
4 Helm NT，Valenzuela R，Glanz S，et al. Relapsing polychondritis: a case diagnosed by direct immunofluorescence and coexisting with pseudocyst of the auricle.J Am Acad Dermatol，1992,26:315-318.
5 孙捷英，马银霞，汤慧华，等.耳廓假性囊肿免疫球蛋白和溶菌酶检查.中华耳鼻咽喉科杂志，1990，25:262.
(收稿：1999-01-28 修回：1999-04-25), 百拇医药
单位：550004 贵阳医学院耳鼻咽喉学教研室(陈乾美、赵田芬、杨秀海、吴波、林尚泽)，临床免疫学教研室(汪彪、费樱、罗殿熙)
关键词：外耳；免疫测定；自身免疫
中华耳鼻烟喉科杂志990413 摘要 目的 探讨耳廓假性囊肿发病与全身免疫功能及局部免疫状态的关系。方法 采集44例耳廓假性囊肿患者的囊液和外周静脉血标本，用免疫单扩散法分别检测囊液和血清中的抗体IgG、 IgA、IgM和补体C3水平；用聚乙二醇比浊法分别检测囊液和患者血清中的免疫复合物含量；用聚合酶链反应检测囊液中巨细胞病毒DNA；用免疫荧光技术检测囊液和血清中的抗核抗体，用间接荧光抗体检测法(indirect immnofluoresce assay,IFA)检查囊液和患者血清与健康小鼠耳廓冰冻组织切片的反应情况。结果 耳廓假性囊肿患者囊液中抗体IgG、IgA、IgM和补体C3水平均明显低于血清中者(P<0.01)，囊液和患者血清中均未检出免疫复合物，囊液中也未检测出巨细胞病毒DNA；但在部分(3/10)患者囊液中发现了抗核抗体，在小鼠冰冻切片中发现了位于软骨组织上的抗原抗体复合物。结论 耳廓假性囊肿中部分患者可能是局限于耳廓的自身免疫性疾病，可能是由于自身抗体与耳廓组织发生自身免疫反应导致反应性渗出液在局部聚集形成囊肿。
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The immunological cause of auricular pseudocyst
CHEN Qianmei, ZHAO Tianfen, YANG Xiuhai, et al.
Department of Otorhinolaryngology, First Affiliated Hospital of Guiyang Medical College, Guiyang 550004
Abstract Objective To elucidate the relationship between the auricular pseudocyst and the systemic and local immunological status. Methods The cyst fluid and blood samples of 44 cases were collected to measure contents of IgG, IgA, IgM and complement C3 by radial immunodiffusion, the content of immune complex by polyethylene glycol turbidimetry, DNA of cytomegalovirus in the fluid by polymerose chain reaction, anti-nuclear antibody(ANA) by immunofluorescent technique and reactions between samples and frozen sections of healthy white rat. Results Contents of IgG,IgA,IgM and C3 in the cyst fluid were significantly lower than those in the serum (P<0.01). No immune complex could be detected in both serum and cyst fluid. No DNA of cytomegalovirus was found in cyst fluid, whereas ANA was discovered. Reactive immunocomplex in the auricular cartilaginous tissue was found in the frozen sections of white rats. Conclusion The results suggest that auriular pseudocyst may be an autoimmune disease involving the auricle. The possible mechanism may be an accumulation of reactive exudate due to immunoreactions of autologous antibody and auricular tissue.
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Key words Ear,external Immunoassay Autoimmunity
耳廓假性囊肿 (pseudocyst of auricle)是耳科常见疾病，表现为耳廓外侧面上半部的局限性肿胀，内有浆液性液体聚集形成囊肿样隆起。其病因及发病机制至今仍不清楚[1，2]。为了探讨该病与机体的免疫功能是否有关，我们对44例耳廓假性囊肿患者的囊液和血清中的3种免疫球蛋白、补体C3、抗核抗体及免疫复合物等进行了初步检测。
资料及方法
一、临床资料
44例耳廓假性囊肿患者系本院1997～1998 年的门诊患者，男38例，女6例；年龄20～80岁。均为单耳发病，均系首次发病，其中右耳28例，左耳16例。囊肿部位在舟状窝者22例, 在耳甲腔5例，耳甲艇8例，三角窝9例。病程7天～3个月。
, 百拇医药
二、实验方法
1. 用无菌空针抽取囊液，同时采患者静脉血3 ml。 用免疫单扩散法分别检测囊液和血清中的IgG、IgA、IgM和补体C3水平(抗血清由上海生物制品研究所提供)；聚乙二醇比浊法分别检测囊液和血清中的免疫复合物含量。用相同方法检测100例健康人血清中上述抗体和补体C3含量。
2. 用免疫荧光技术检测10份患者血清和囊液中的抗核抗体。
3. 用聚合酶链反应检测20份囊液中巨细胞病毒DNA(药盒购自成都华美生物工程公司)。
4. 将健康的昆明小鼠12只处死后，取耳廓制作快速冰冻切片为抗原，用间接免疫荧光抗体检测 (indirect immnofluoresce assay,IFA) 法检查13份囊液中抗体是否与之反应以及反应发生的部位；用同样方法观察13例患者血清和10例健康人血清与抗原的反应。
, 百拇医药
三、统计方法
在计算机上使用美国SPSS统计软件包对实验1各项结果作两样本均数比较u检验t检验。
结果
1. 44份患者囊液及血清中抗体和补体C3检测结果见表1。健康人血清IgG、IgA、IgM和 C3水平(
±s)分别为(12.87±1.35)g/L、(2.35±0.34)g/L、(1.08±0.24)g/L和(1.14±0.27)g/L，患者血清中抗体和补体C3结果相比，差异无显著性，P值均>0.05。表1 耳廓囊肿44例患者囊液及血清中抗体和补体检测结果(g/L，
±s) 检测标本, 百拇医药
IgG
IgA
IgM
C3
血清
12.08±4.20
2.30±1.56
1.24±0.62
1.22±0.40
囊液
6.22±3.87
1.30±1.41
, 百拇医药
0.91±0.72
0.83±0.48
u值
6.8081
2.3188
2.2852
4.1487
P值
<0.0001
<0.05
<0.05
<0.0001
, http://www.100md.com 2. 44份囊液和血清中免疫复合物检测均为阴性。
3. 10份患者血清中抗核抗体呈阴性；3份囊液中抗核抗体阳性。
4. 检测20份囊液中均未发现巨细胞病毒DNA。
5. IFA发现，13份囊液中的抗体均可与小鼠耳廓的组织产生结合(包括3份抗核抗体阳性的囊液)，反应性免疫复合物位于耳廓的软骨组织内(图1)。患者血清及健康人血清也与小鼠耳廓组织产生一定结合；但反应部位发生在皮肤角质层(图2)。
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图1 小鼠耳廓与患者囊液作用后，可见小鼠耳廓软骨细胞周围有强烈的荧光反应。A 耳廓软骨细胞，C 耳廓皮肤角质层，下图同。 IFA ×145 图2 小鼠耳廓与患者血清作用后，小鼠耳廓软骨细胞周围未见明显荧光反应，但皮肤角质层有荧光反应。 IFA ×145
讨论
耳廓假性囊肿是一种无菌性浆液性渗出反应[3]。从本组检测结果看，患者囊液中亦未发现巨细胞病毒的DNA，显示耳廓假性囊肿与巨细胞病毒感染无关。
Helm等[4]1992年用直接免疫荧光技术检查了1例合并有耳廓假性囊肿的多发性软骨炎复发患者，发现在软骨膜上有IgG和C3，表皮真皮层有IgG，提出直接免疫荧光技术可在临床常规组织学检查发现阳性结果之前诊断复发。孙捷英等[5]1990年报道29例耳廓假性囊肿患者的免疫学检查，发现患者血清中的抗体IgA、IgG及免疫复合物比正常对照组高，囊液中的免疫复合物水平与对照组血清中者相比差异有显著性意义。
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本组检测发现患者血清中的各种抗体和补体C3均与健康人差异无显著性, 初步提示患者整体免疫功能可能是正常的；囊液中的抗体IgG、IgA、IgM和C3的水平均明显低于其血清中的含量(P<0.05～0.0001)。一种可能的解释是：囊液很可能是由血浆中渗出的，因此其抗体和补体C3的水平低于血清；另一种可能是囊肿中很可能有免疫反应发生，部分抗体以及补体可能与相应的抗原结合了。
但是，无论在患者的血清和囊液中都未检测到免疫复合物，说明即使有抗原存在，也不会是可溶性抗原，而可能是局限在病变部位的组织抗原。基于这种假设，我们用小鼠耳廓的冰冻组织切片与囊液作间接荧光抗体反应，结果在小鼠耳廓软骨组织内发现了抗原抗体复合物，提示患者囊液中的抗体是一种抗组织抗体，对人体是一种自身抗体。检测中发现部分囊液中(3/10)有抗核抗体存在，进一步说明这部分耳廓假性囊肿很可能是一种自身免疫性疾病，由于自身抗体与耳廓软骨组织发生免疫反应，导致液体在局部聚集而形成囊肿。
, http://www.100md.com
本项目由贵州省科学基金资助(黔基1998-198号)
参考文献
1 朱利相，王秀云(综述). 耳廓假性囊肿.国外医学耳鼻咽喉科分册，1993，17:136-138.
2 刘文忠. 耳廓假性囊肿发病机理的探讨.中华耳鼻咽喉科杂志，1986，21:50-51.
3 黄选兆，主编. 耳鼻咽喉科学. 北京：人民卫生出版社，1995.240-241.
4 Helm NT，Valenzuela R，Glanz S，et al. Relapsing polychondritis: a case diagnosed by direct immunofluorescence and coexisting with pseudocyst of the auricle.J Am Acad Dermatol，1992,26:315-318.
5 孙捷英，马银霞，汤慧华，等.耳廓假性囊肿免疫球蛋白和溶菌酶检查.中华耳鼻咽喉科杂志，1990，25:262.
(收稿：1999-01-28 修回：1999-04-25), 百拇医药