大鼠肺内一氧化氮合酶的分布及急性缺氧对其活性的影响
作者：王燕 张灵恩 沈惟堂 陈莲 樊绍曾
单位：200032 上海医科大学儿科医院抢救室
关键词：
中华儿科杂志/980417
我们采用组织化学法对正常和急性缺氧大鼠肺组织内一氧化氮合酶(NOS)的分布和活性进行了研究，旨在探讨大鼠肺组织NOS分布及缺氧对其分布和活性的影响。
材料：20只雄性Wistar大鼠(上海医科大学实验动物部提供)。氯胺酮，多聚甲醛和Triton-100为Merck公司产品，NADPH为Sigma公司产品，四硝基唑蓝(NBT)。20只大鼠随机分两组，每组10只。
方法：将10只大鼠置于缺氧舱，用氮气稀释舱内氧气并控制舱内氧浓度在8%±0.5%(用测氧仪监测)，缺氧时间1小时。组织准备：将大鼠麻醉后开胸，取出肺后，剪下肺组织块0.5 cm3，固定处理后，用恒冷切片机于-20℃冰冻切片，切片厚度15 μm。组织化学染色：应用NADPH-黄递酶组织化学法对切片进行处理。结果观察及判定：光镜下每只动物观察3张间隔切片，采用目测半定量法即深蓝色：强阳性，蓝色：中度阳性反应，浅蓝色：阳性反应、可疑阳性，着色与背景相同：阴性反应。计算机软件分析：经MIAS-300图像分析对肺血管内膜NOS染色反应进行光亮度定量，光亮度为相对值，范围0～255。
, http://www.100md.com
结果：(1)正常大鼠肺组织NOS的分布：大鼠小支气管、细支气管、终末细支气管、呼吸细支气管及肺泡囊上皮细胞均呈NOS强阳性反应，肺泡为阴性，肺血管内膜都呈NOS阳性反应，其着色强度依次为肺小动脉>小静脉>毛细血管，而肺血管中、外膜未见NOS阳性着色。(2)急性缺氧时大鼠肺组织NOS的分布和活性变化：缺氧1小时后肺小血管内膜NOS阳性反应减轻，以肺小动脉的变化为著。应用计算机软件对肺小血管内膜NOS光亮度进行分析，正常组光亮度为110±11，缺氧组为100±8，两组比较差异有非常显著意义(P<0.01)。缺氧后各级支气管、肺泡管和肺泡囊上皮细胞仍呈NOS强阳性反应，与正常大鼠无明显差别。
讨论：支气管上皮细胞存在NOS，能合成NO，起舒张支气管平滑肌的作用，但在形态学上证实较少，本研究表明大鼠各级支气管、肺泡管及肺泡囊上皮细胞均存在NOS，本研究还显示正常大鼠肺血管内膜存在NOS，且着色强度为肺小动脉>小静脉>毛细血管。NO是重要的内皮源性舒张因子，其在舒张血管平滑肌，维持血管张力和抑制平滑肌增殖等方面起重要作用，缺氧是引起急性缺氧性肺血管收缩反应(HPV)和慢性缺氧性肺动脉高压(HPH)的起始环节，其发病机理和一氧化氮合成减少及内皮素合成增加等因素有关。在临床上缺氧是多种疾病如呼吸系统疾病常见的病理生理过程，其可引起一系列细胞因子等发生变化，从而影响机体的正常生理过程。本研究结果表明缺氧后肺血管内膜NOS活性明显减低，提示急性缺氧可抑制血管内膜NOS活性的表达，从而导致合成NO减少，此不仅阐明了NO合成减少的机制与急性缺氧性肺血管收缩反应和肺动脉高压的发生有关，而且为临床应用吸入NO治疗相应的缺氧性疾病提供了理论依据。本研究还发现，缺氧后各级支气管、肺泡管和肺泡囊上皮细胞仍呈NOS强阳性反应，与正常大鼠无明显差别，提示肺血管内膜NOS活性的调节和各级支气管上皮细胞内NOS活性的调节存在不同的机制，值得进一步研究。总之NOS广泛分布于正常大鼠的肺组织，具有广泛的病理和生理功能。, 百拇医药
单位：200032 上海医科大学儿科医院抢救室
关键词：
中华儿科杂志/980417
我们采用组织化学法对正常和急性缺氧大鼠肺组织内一氧化氮合酶(NOS)的分布和活性进行了研究，旨在探讨大鼠肺组织NOS分布及缺氧对其分布和活性的影响。
材料：20只雄性Wistar大鼠(上海医科大学实验动物部提供)。氯胺酮，多聚甲醛和Triton-100为Merck公司产品，NADPH为Sigma公司产品，四硝基唑蓝(NBT)。20只大鼠随机分两组，每组10只。
方法：将10只大鼠置于缺氧舱，用氮气稀释舱内氧气并控制舱内氧浓度在8%±0.5%(用测氧仪监测)，缺氧时间1小时。组织准备：将大鼠麻醉后开胸，取出肺后，剪下肺组织块0.5 cm3，固定处理后，用恒冷切片机于-20℃冰冻切片，切片厚度15 μm。组织化学染色：应用NADPH-黄递酶组织化学法对切片进行处理。结果观察及判定：光镜下每只动物观察3张间隔切片，采用目测半定量法即深蓝色：强阳性，蓝色：中度阳性反应，浅蓝色：阳性反应、可疑阳性，着色与背景相同：阴性反应。计算机软件分析：经MIAS-300图像分析对肺血管内膜NOS染色反应进行光亮度定量，光亮度为相对值，范围0～255。
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结果：(1)正常大鼠肺组织NOS的分布：大鼠小支气管、细支气管、终末细支气管、呼吸细支气管及肺泡囊上皮细胞均呈NOS强阳性反应，肺泡为阴性，肺血管内膜都呈NOS阳性反应，其着色强度依次为肺小动脉>小静脉>毛细血管，而肺血管中、外膜未见NOS阳性着色。(2)急性缺氧时大鼠肺组织NOS的分布和活性变化：缺氧1小时后肺小血管内膜NOS阳性反应减轻，以肺小动脉的变化为著。应用计算机软件对肺小血管内膜NOS光亮度进行分析，正常组光亮度为110±11，缺氧组为100±8，两组比较差异有非常显著意义(P<0.01)。缺氧后各级支气管、肺泡管和肺泡囊上皮细胞仍呈NOS强阳性反应，与正常大鼠无明显差别。
讨论：支气管上皮细胞存在NOS，能合成NO，起舒张支气管平滑肌的作用，但在形态学上证实较少，本研究表明大鼠各级支气管、肺泡管及肺泡囊上皮细胞均存在NOS，本研究还显示正常大鼠肺血管内膜存在NOS，且着色强度为肺小动脉>小静脉>毛细血管。NO是重要的内皮源性舒张因子，其在舒张血管平滑肌，维持血管张力和抑制平滑肌增殖等方面起重要作用，缺氧是引起急性缺氧性肺血管收缩反应(HPV)和慢性缺氧性肺动脉高压(HPH)的起始环节，其发病机理和一氧化氮合成减少及内皮素合成增加等因素有关。在临床上缺氧是多种疾病如呼吸系统疾病常见的病理生理过程，其可引起一系列细胞因子等发生变化，从而影响机体的正常生理过程。本研究结果表明缺氧后肺血管内膜NOS活性明显减低，提示急性缺氧可抑制血管内膜NOS活性的表达，从而导致合成NO减少，此不仅阐明了NO合成减少的机制与急性缺氧性肺血管收缩反应和肺动脉高压的发生有关，而且为临床应用吸入NO治疗相应的缺氧性疾病提供了理论依据。本研究还发现，缺氧后各级支气管、肺泡管和肺泡囊上皮细胞仍呈NOS强阳性反应，与正常大鼠无明显差别，提示肺血管内膜NOS活性的调节和各级支气管上皮细胞内NOS活性的调节存在不同的机制，值得进一步研究。总之NOS广泛分布于正常大鼠的肺组织，具有广泛的病理和生理功能。, 百拇医药