单纯疱疹病毒性脑炎诊断方法与治疗观察
作者：张庆荣 朱文彪 周宇 谢兆丰 莫小青 黄志成
单位：511400 广东番禺市何贤纪念医院儿科(张庆荣、周宇、谢兆丰、莫小青)，PCR室(朱文彪)，遗传实验室(黄志成)
关键词：脑炎；病毒性；聚合酶链反应；酶联免疫吸附测定；疱疹病毒科感染
中华儿科杂志/980408 【摘要】 目的 探讨单纯疱疹病毒性脑炎(HSVE)的诊断方法，了解对HSVE的治疗效果。方法 应用聚合酶链反应(PCR)技术和酶联免疫吸附测定(ELISA)方法，对27例病毒性脑炎患儿的脑脊液进行单纯疱疹病毒(HSV)DNA和特异性IgM抗体检测。结果 HSV-DNA阳性11例；HSV-IgM阳性4例，其中Ⅰ型3例，Ⅱ型1例；DNA与IgM同时阳性3例。将脑脊液检查HSV-DNA阳性或HSV-IgM抗体阳性者12例诊断为HSVE，占44%。对HSVE患儿予以静脉滴注无环鸟苷，连续用药一周，结果治愈8例，好转2例，自动出院及死亡各1例。结论 PCR与IgM抗体检测两种方法相结合有助于HSVE病原学早期诊断，并指导HSVE的临床治疗。
, http://www.100md.com
Diagnosis and treatment of herpes simplex virus encephalitis
Zhang Qingrong, Zhu Wenbiao, Zhou Yu, et al.
Department of Pediatrics, Hexian Commemorate Hospital, Panyu 511400
【Abstract 】 Objective To study the diagnosis, clinical characteristics and prognosis of children with herpes simplex virus (HSV) encephalitis (HSVE). Methods HSV-specific DNA and anti-HSV IgM in the cerebrospinal fluid (CSF) were determined by polymerase chain reaction (PCR) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in 27 children with sporadic viral encephalitis. Results It was found that HSV DNA was positive in CSF specimens from 11 cases, and HSV IgM was positive in CSF specimens of 4 cases, including HSV type Ⅰ in 3 and type Ⅱ in 1; both HSV DNA and IgM were positive in specimens of 3 cases. Specimens from 8 cases were positive for HVS DNA but negative for HSV IgM. Only one specimen was positive for HSV IgM but negative for HSV DNA. The positivity for either HSV DNA or HSV IgM in the CSF specimens was considered to be HSVE. HSVE was diagnosed in 12 (44.4%) of the 27 children. All patients with HSVE received intravenous acyclovir therapy for 7 days as soon as the diagnosis was confirmed. Eight patients recorved completely, two had significant improvementm, one was discharged from the hospital with no improvement and one died. Conclusions The present study suggested that the conbination of specific DNA with IgM antibody determination should be used to obtain more accurate diagnosis of HSVE and the early identification of pathogen will be helpful to guide the treatment and improve the prognosis of HSVE.
, 百拇医药
【Key words 】 Encephalitis, viral Polymerase chain reaction Enzyme-linked immunosorbent assayHerpesviridae infections
随着抗生素的广泛使用，病毒性脑炎已日益成为近代儿科最常见的中枢神经系统感染性疾病，其中又以单纯疱疹病毒(HSV)感染居首位。病毒性脑炎的病原学快速诊断一直是临床试图解决的课题。聚合酶链反应(PCR)技术具有简单快捷、特异性及敏感性高等特点，PCR与IgM抗体检测两种方法相结合有助于对HSV进行早期病原学诊断。我们应用PCR技术和酶联免疫吸附测定(ELISA)特异性IgM抗体方法，对病毒性脑炎患儿脑脊液进行了HSV检测。
对象和方法
一、对象
1993年10月至1997年3月在我院儿科住院的27例病毒性脑炎患儿，其中男12例，女15例，年龄3个月～12岁。全部病例经脑脊液、头颅CT、脑电图检查，均符合病毒性脑炎的诊断条件(病例组)。
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选择同期住院的非中枢神经系统感染性疾病6例(对照组)，其中高热惊厥2例，癫痫3例，脑性瘫痪1例。
二、方法
于患儿入院后(发病第1～15天)经腰穿用无菌试管留取脑脊液，分别做常规、生化、HSV-DNA及HSV-Ⅰ、Ⅱ型IgM抗体检查。
1.HSV-DNA检测：试剂盒由华美公司供应，其组成：裂解缓冲液；HSV-PCR反应液；Taq DNA；液体石蜡；阳性对照。本试剂为同时检测HSV-Ⅰ型及Ⅱ型。若脑脊液标本有肉眼可见血色，先离心去红细胞，取上清液检测。在紫外灯下观察结果，有与阳性对照相同大小扩增带为阳性。
2.HSV-Ⅰ型、Ⅱ型特异性IgM检测：试剂盒由深圳晶美生物公司提供，采用固相酶联免疫吸附测定方法。试剂盒主要组成：HSV-Ⅰ、Ⅱ型抗原包被的96孔酶标板；阳性及阴性对照血清；冻干羊抗人IgG血清；酶联物，辣根过氧化酶标志抗人IgM单抗；底物A、B液；反应终止液。
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结果判断：应用目测及酶标仪自动测定两种方法。(1)目测：待测标本孔显蓝色为阳性，比阴性对照浅或不显色为阴性。(2)酶标仪测定：阳性：标本吸收值≥2.1×阴性对照吸收值；阴性：标本吸收值≤阴性对照吸收值；介于上述两者之间为可疑。
结果
一、病原学检测
在病例组27例患儿脑脊液标本中，HSV-DNA阳性11例，阳性率为41%，其中有2例巨细胞病毒、1例腺病毒DNA亦同时阳性。HSV-IgM阳性4例，其中Ⅰ型3例，Ⅱ型1例，阳性率为15%。HSV-DNA与HSV-IgM同时阳性3例，HSV-DNA阳性而HSV-IgM阴性8例，1例HSV-Ⅰ型IgM阳性而HSV-DNA阴性。将脑脊液检查HSV-DNA阳性或HSV-IgM抗体阳性者诊断为单纯疱疹病毒性脑炎(HSVE)，12例(44%)患儿可确诊为HSVE。对照组所有患儿脑脊液上述两项检查均呈阴性。
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二、HSVE临床资料
12例患儿中，发热：37.5～39.1℃，全身性抽搐8例，单侧肢体性抽搐2例。面神经麻痹2例。共济失调、视物不清、失明各1例。口周疱疹2例。
脑脊液：细胞数升高(24～125×106/L)6例，蛋白含量升高(0.84～2.15 g/L)8例，3例有红细胞(6～50×106/L)。
头颅CT：12例患儿于发病后3～16天做头颅CT检查，颞叶或额叶低密度灶5例，轻度脑萎缩2例，外周性脑积水1例，4例未见异常。
脑电图：中～重度弥漫性异常5例，轻度异常6例，处于边缘状态1例。
三、治疗与转归
入院后以脱水、止惊、抗病毒为主要治疗措施。一旦确诊为HSVE即予以静脉滴注无环鸟苷(阿昔洛韦)5 mg/kg，每隔8小时静脉滴注一次，连续给药一周。同时辅以能量合剂、脑活素、胞二磷胆碱或光量子充氧血、高压氧等治疗。结果治愈8例，好转2例，自动出院1例，死亡1例。
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讨论
一、HSV是小儿中枢神经系统感染的常见病原体
HSV能引起人类多种疾患，随着检测手段的改进，HSVE病例日渐增多，在澳大利亚每年大约十万个儿童中就有2例HSVE病例发生[1]，本组资料显示，HSVE占病毒性脑炎病例的44%，显然，HSV是小儿中枢神经系统感染的常见病原体。
二、不同型别HSV的临床表现
不同型别的HSV所引起的临床表现各有差异，Ⅰ型主要引起局灶性脑炎，Ⅱ型则倾向于脑膜脑炎。绝大部分HSVE是由HSV-Ⅰ型引起，Ⅱ型感染不足6%[2]。本组病例，亦以Ⅰ型感染居多。在一部分HSVE病例中可同时合并其他病毒混合感染。
三、HSV的检测
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病毒性脑炎患者脑脊液检查HSV-DNA阳性或HSV-IgM抗体阳性，可诊断为HSVE[3]。
PCR方法具有简捷、敏感、特异性高等特点，检测时间一天内即可完成，用于早期快速诊断HSVE备受推崇，认为其可靠性甚至优于脑组织活检技术[4]。近期采用的PCR定量检测方法除用于诊断外，尚可根据其含量的变化评价治疗效果[5]，使诊断和治疗又上一个新台阶。
IgM抗体属早期反应抗体，在接触病毒后3～5天最先产生。在起病后1～5天的HSVE脑脊液中即可测出HSV-IgM抗体[6]，至发病后24天仍能测到该抗体[1]。但IgM抗体检测方法敏感性较低，其敏感性仅为PCR方法的36%。虽然如此，本组资料中亦有一例患儿脑脊液HSV-DNA阴性而IgM抗体阳性。诚然，PCR与IgM抗体检查两者相结合可提高HSVE的诊断准确和阳性率。
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四、HSVE的治疗
无环鸟苷是目前公认治疗HSVE较有效的药物，其抗病毒谱广，毒副作用较少。HSVE如能获得早期诊断并用无环鸟苷治疗，可大大降低死亡率，显著改善预后[7]。
参考文献
1 Uren EC, Johnson PD, Montanaro, et al. Herpes simplex virus encephalitis in pediatrics: diagnosis by detection of antibodies and DNA in cerebrospinal fluid. Pediatr Infect Dis J, 1993, 12:1001-1006.
2 Aurelius E, Johansson B, Sk
ldenberg B, et al. Encephalitis in immuno competent patients due to herpes simplex virus type 1 or 2 as determined by type-specific polymerase chain reaction and antibody assays of cerebrospinal fluid. J Med Virol, 1995, 39:178-186.
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3 周晓敏，王新利，隋丽梅，等.31例散发性脑炎的病原学诊断与临床分析.中国实用儿科杂志，1996，11：225-226.
4 Lakeman FD, Whitley RJ. Diagnosis of herpes simplex encephalitis: application of poly meras chain reaction to cerebrospinal fluid from brain-biopsied patients and correlation with disease. J Infect Dis. 1995, 171:857-863.
5 Ando Y, Kimura H, Miwata H, et al. Quantitative analysis of herpes simplex virus DNA in cerebrospinal fluid of children with herpes simplex encephalitis. J Med Virol, 1993, 41:170-173.
6 王宇山，候熙德，金庆文，等.PCR和ELISA对单纯疱疹病毒Ⅰ型脑炎的诊断价值.现代诊断与治疗，1995，6：144-145.
7 Richard J, Whitely CA, Alford CA, et al. Vidarabine versus acyclovir therapy in herpes simplex encephalitis. N Engl J Med, 1986, 316:144-146., 百拇医药
单位：511400 广东番禺市何贤纪念医院儿科(张庆荣、周宇、谢兆丰、莫小青)，PCR室(朱文彪)，遗传实验室(黄志成)
关键词：脑炎；病毒性；聚合酶链反应；酶联免疫吸附测定；疱疹病毒科感染
中华儿科杂志/980408 【摘要】 目的 探讨单纯疱疹病毒性脑炎(HSVE)的诊断方法，了解对HSVE的治疗效果。方法 应用聚合酶链反应(PCR)技术和酶联免疫吸附测定(ELISA)方法，对27例病毒性脑炎患儿的脑脊液进行单纯疱疹病毒(HSV)DNA和特异性IgM抗体检测。结果 HSV-DNA阳性11例；HSV-IgM阳性4例，其中Ⅰ型3例，Ⅱ型1例；DNA与IgM同时阳性3例。将脑脊液检查HSV-DNA阳性或HSV-IgM抗体阳性者12例诊断为HSVE，占44%。对HSVE患儿予以静脉滴注无环鸟苷，连续用药一周，结果治愈8例，好转2例，自动出院及死亡各1例。结论 PCR与IgM抗体检测两种方法相结合有助于HSVE病原学早期诊断，并指导HSVE的临床治疗。
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Diagnosis and treatment of herpes simplex virus encephalitis
Zhang Qingrong, Zhu Wenbiao, Zhou Yu, et al.
Department of Pediatrics, Hexian Commemorate Hospital, Panyu 511400
【Abstract 】 Objective To study the diagnosis, clinical characteristics and prognosis of children with herpes simplex virus (HSV) encephalitis (HSVE). Methods HSV-specific DNA and anti-HSV IgM in the cerebrospinal fluid (CSF) were determined by polymerase chain reaction (PCR) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in 27 children with sporadic viral encephalitis. Results It was found that HSV DNA was positive in CSF specimens from 11 cases, and HSV IgM was positive in CSF specimens of 4 cases, including HSV type Ⅰ in 3 and type Ⅱ in 1; both HSV DNA and IgM were positive in specimens of 3 cases. Specimens from 8 cases were positive for HVS DNA but negative for HSV IgM. Only one specimen was positive for HSV IgM but negative for HSV DNA. The positivity for either HSV DNA or HSV IgM in the CSF specimens was considered to be HSVE. HSVE was diagnosed in 12 (44.4%) of the 27 children. All patients with HSVE received intravenous acyclovir therapy for 7 days as soon as the diagnosis was confirmed. Eight patients recorved completely, two had significant improvementm, one was discharged from the hospital with no improvement and one died. Conclusions The present study suggested that the conbination of specific DNA with IgM antibody determination should be used to obtain more accurate diagnosis of HSVE and the early identification of pathogen will be helpful to guide the treatment and improve the prognosis of HSVE.
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【Key words 】 Encephalitis, viral Polymerase chain reaction Enzyme-linked immunosorbent assayHerpesviridae infections
随着抗生素的广泛使用，病毒性脑炎已日益成为近代儿科最常见的中枢神经系统感染性疾病，其中又以单纯疱疹病毒(HSV)感染居首位。病毒性脑炎的病原学快速诊断一直是临床试图解决的课题。聚合酶链反应(PCR)技术具有简单快捷、特异性及敏感性高等特点，PCR与IgM抗体检测两种方法相结合有助于对HSV进行早期病原学诊断。我们应用PCR技术和酶联免疫吸附测定(ELISA)特异性IgM抗体方法，对病毒性脑炎患儿脑脊液进行了HSV检测。
对象和方法
一、对象
1993年10月至1997年3月在我院儿科住院的27例病毒性脑炎患儿，其中男12例，女15例，年龄3个月～12岁。全部病例经脑脊液、头颅CT、脑电图检查，均符合病毒性脑炎的诊断条件(病例组)。
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选择同期住院的非中枢神经系统感染性疾病6例(对照组)，其中高热惊厥2例，癫痫3例，脑性瘫痪1例。
二、方法
于患儿入院后(发病第1～15天)经腰穿用无菌试管留取脑脊液，分别做常规、生化、HSV-DNA及HSV-Ⅰ、Ⅱ型IgM抗体检查。
1.HSV-DNA检测：试剂盒由华美公司供应，其组成：裂解缓冲液；HSV-PCR反应液；Taq DNA；液体石蜡；阳性对照。本试剂为同时检测HSV-Ⅰ型及Ⅱ型。若脑脊液标本有肉眼可见血色，先离心去红细胞，取上清液检测。在紫外灯下观察结果，有与阳性对照相同大小扩增带为阳性。
2.HSV-Ⅰ型、Ⅱ型特异性IgM检测：试剂盒由深圳晶美生物公司提供，采用固相酶联免疫吸附测定方法。试剂盒主要组成：HSV-Ⅰ、Ⅱ型抗原包被的96孔酶标板；阳性及阴性对照血清；冻干羊抗人IgG血清；酶联物，辣根过氧化酶标志抗人IgM单抗；底物A、B液；反应终止液。
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结果判断：应用目测及酶标仪自动测定两种方法。(1)目测：待测标本孔显蓝色为阳性，比阴性对照浅或不显色为阴性。(2)酶标仪测定：阳性：标本吸收值≥2.1×阴性对照吸收值；阴性：标本吸收值≤阴性对照吸收值；介于上述两者之间为可疑。
结果
一、病原学检测
在病例组27例患儿脑脊液标本中，HSV-DNA阳性11例，阳性率为41%，其中有2例巨细胞病毒、1例腺病毒DNA亦同时阳性。HSV-IgM阳性4例，其中Ⅰ型3例，Ⅱ型1例，阳性率为15%。HSV-DNA与HSV-IgM同时阳性3例，HSV-DNA阳性而HSV-IgM阴性8例，1例HSV-Ⅰ型IgM阳性而HSV-DNA阴性。将脑脊液检查HSV-DNA阳性或HSV-IgM抗体阳性者诊断为单纯疱疹病毒性脑炎(HSVE)，12例(44%)患儿可确诊为HSVE。对照组所有患儿脑脊液上述两项检查均呈阴性。
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二、HSVE临床资料
12例患儿中，发热：37.5～39.1℃，全身性抽搐8例，单侧肢体性抽搐2例。面神经麻痹2例。共济失调、视物不清、失明各1例。口周疱疹2例。
脑脊液：细胞数升高(24～125×106/L)6例，蛋白含量升高(0.84～2.15 g/L)8例，3例有红细胞(6～50×106/L)。
头颅CT：12例患儿于发病后3～16天做头颅CT检查，颞叶或额叶低密度灶5例，轻度脑萎缩2例，外周性脑积水1例，4例未见异常。
脑电图：中～重度弥漫性异常5例，轻度异常6例，处于边缘状态1例。
三、治疗与转归
入院后以脱水、止惊、抗病毒为主要治疗措施。一旦确诊为HSVE即予以静脉滴注无环鸟苷(阿昔洛韦)5 mg/kg，每隔8小时静脉滴注一次，连续给药一周。同时辅以能量合剂、脑活素、胞二磷胆碱或光量子充氧血、高压氧等治疗。结果治愈8例，好转2例，自动出院1例，死亡1例。
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讨论
一、HSV是小儿中枢神经系统感染的常见病原体
HSV能引起人类多种疾患，随着检测手段的改进，HSVE病例日渐增多，在澳大利亚每年大约十万个儿童中就有2例HSVE病例发生[1]，本组资料显示，HSVE占病毒性脑炎病例的44%，显然，HSV是小儿中枢神经系统感染的常见病原体。
二、不同型别HSV的临床表现
不同型别的HSV所引起的临床表现各有差异，Ⅰ型主要引起局灶性脑炎，Ⅱ型则倾向于脑膜脑炎。绝大部分HSVE是由HSV-Ⅰ型引起，Ⅱ型感染不足6%[2]。本组病例，亦以Ⅰ型感染居多。在一部分HSVE病例中可同时合并其他病毒混合感染。
三、HSV的检测
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病毒性脑炎患者脑脊液检查HSV-DNA阳性或HSV-IgM抗体阳性，可诊断为HSVE[3]。
PCR方法具有简捷、敏感、特异性高等特点，检测时间一天内即可完成，用于早期快速诊断HSVE备受推崇，认为其可靠性甚至优于脑组织活检技术[4]。近期采用的PCR定量检测方法除用于诊断外，尚可根据其含量的变化评价治疗效果[5]，使诊断和治疗又上一个新台阶。
IgM抗体属早期反应抗体，在接触病毒后3～5天最先产生。在起病后1～5天的HSVE脑脊液中即可测出HSV-IgM抗体[6]，至发病后24天仍能测到该抗体[1]。但IgM抗体检测方法敏感性较低，其敏感性仅为PCR方法的36%。虽然如此，本组资料中亦有一例患儿脑脊液HSV-DNA阴性而IgM抗体阳性。诚然，PCR与IgM抗体检查两者相结合可提高HSVE的诊断准确和阳性率。
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四、HSVE的治疗
无环鸟苷是目前公认治疗HSVE较有效的药物，其抗病毒谱广，毒副作用较少。HSVE如能获得早期诊断并用无环鸟苷治疗，可大大降低死亡率，显著改善预后[7]。
参考文献
1 Uren EC, Johnson PD, Montanaro, et al. Herpes simplex virus encephalitis in pediatrics: diagnosis by detection of antibodies and DNA in cerebrospinal fluid. Pediatr Infect Dis J, 1993, 12:1001-1006.
2 Aurelius E, Johansson B, Sk
ldenberg B, et al. Encephalitis in immuno competent patients due to herpes simplex virus type 1 or 2 as determined by type-specific polymerase chain reaction and antibody assays of cerebrospinal fluid. J Med Virol, 1995, 39:178-186., http://www.100md.com
3 周晓敏，王新利，隋丽梅，等.31例散发性脑炎的病原学诊断与临床分析.中国实用儿科杂志，1996，11：225-226.
4 Lakeman FD, Whitley RJ. Diagnosis of herpes simplex encephalitis: application of poly meras chain reaction to cerebrospinal fluid from brain-biopsied patients and correlation with disease. J Infect Dis. 1995, 171:857-863.
5 Ando Y, Kimura H, Miwata H, et al. Quantitative analysis of herpes simplex virus DNA in cerebrospinal fluid of children with herpes simplex encephalitis. J Med Virol, 1993, 41:170-173.
6 王宇山，候熙德，金庆文，等.PCR和ELISA对单纯疱疹病毒Ⅰ型脑炎的诊断价值.现代诊断与治疗，1995，6：144-145.
7 Richard J, Whitely CA, Alford CA, et al. Vidarabine versus acyclovir therapy in herpes simplex encephalitis. N Engl J Med, 1986, 316:144-146., 百拇医药