对宫内乙型肝炎病毒感染婴儿特异性杀伤性T淋巴细胞功能的探讨
作者：吕晴 朱启 熊恩东 段恕诚
单位：200032 上海医科大学儿科医院(吕晴、朱启、段恕诚)；上海医科大学分子病毒学实验室(熊恩东)
关键词：
中华儿科杂志/980519 乙型肝炎病毒(简称乙肝，HBV)感染后特异性杀伤性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL)的作用是清除病毒的关键。为了解宫内HBV感染婴儿特异性CTL功能及与乙肝疫苗反应性的关系，我们应用含HBV特异性杀伤性T淋巴细胞抗原表位的多肽诱导效应细胞，通过细胞溶解试验检测宫内HBV感染婴儿特异性CTL功能。
对象：宫内HBV感染婴儿12例，年
附表 各组HBc18-27诱导的CTL反应 组别
, http://www.100md.com
例数
年龄
(
±s，月)
细胞溶解率(%)
(±s，%)
t′值*
P值
宫内感染(a)
12
6.1±2.8
, http://www.100md.com
21.9±12.3
免疫有效(a1)
7
6.1±2.7
28.4±12.1
3.1 (与b)
<0.05
免疫无效(a2)
5
6.0±3.1
12.9± 4.6
2.7 (与a1)
, http://www.100md.com
<0.05
急性HBV感染(b)
7
10.5±3.6
51.9±16.9
5.3 (与a2)
<0.01
慢性HBV感染(c)
6
18.2±4.1
14.3± 9.2
0.33 (与a2)
, http://www.100md.com
>0.05
*各组细胞溶解率比较龄2个月～10个月，平均6.1±2.8(月)。其母亲为HBV携带者，新生儿出生时外周血乙肝表面抗原(HBsAg)阳性(用Abbott试剂检测)，伴血清HBV-DNA阳性(用地高辛标记的斑点杂交法)，持续超过2个月。出生后按0个月、1个月、6个月程序接种乙肝疫苗，若抗HBs阳转，HBsAg转阴则为免疫有效组；HBsAg和HBV-DNA持续阳性则为免疫无效组。另选择急性乙型肝炎恢复期小儿7例，慢性HBV感染小儿6例。
方法：合成含特异性CTL抗原表位的乙肝病毒核心(HBc)18-27多肽，氨基酸序列为FLPSPFFPSV，以这一多肽诱导外周血单个核细胞作为效应细胞，以3孔均值计算细胞溶解率(%)。另外，将另一段来源于破伤风类毒素的多肽(比830-844，氨基酸序列为QYIKANSKFIGITEL)与HBc18-27多肽共同刺激，观察这一含“多能”T细胞抗原表位的多肽对特异性CTL的影响。
, 百拇医药
结果：宫内HBV感染婴儿组细胞溶解率为21.9%，明显低于急性乙肝恢复期组；宫内感染免疫无效组细胞溶解率与慢性HBV感染组相似，明显低于免疫有效组，见附表。
将tt830-844与HBc18-27多肽共同刺激，观察复合抗原表位对细胞溶解率的影响，结果宫内感染免疫有效组细胞溶解率从28.4%±12.1%提高到46.1%±7.0%(t=2.69，P<0.05)；宫内感染免疫无效组细胞溶解率从12.9%±4.6%升至31.4%±14.3%(t=4.59，P<0.01)。
讨论：CTL能识别经细胞加工的、与人类主要组织相容性抗原(human histocompatibility leukocyte antigen, HLA)Ⅰ类分子结合的病毒多肽，HLAⅠ类分子与病毒多肽结合部位为深槽状三维结构，不同个体间HLA结构和空间构型差异很大，往往会影响与病毒多肽结合而不能产生有效的免疫反应。
, http://www.100md.com 应用现代免疫学技术已确立HBcAg中最短的CTL抗原表位为10个氨基酸组成的多肽，即HBc18-27肽段。本组的结果表明宫内HBV感染婴儿对这一多肽的CTL反应低于急性HBV感染恢复期患儿，提示宫内HBV感染婴儿在T细胞水平存在一定程度的免疫耐受。宫内感染免疫无效组CTL反应明显低于免疫有效组，表明CTL功能影响婴儿对乙肝疫苗的反应。由于CTL的作用主要与病毒清除有关，在其功能轻度低下或受暂时抑制时，在体内因素协同下仍可清除已感染的乙肝病毒，使免疫耐受得以中止或逆转而能对疫苗产生反应，若CTL功能严重受损或缺如则病毒感染仍持续，因而免疫无效。
我们应用破伤风类毒素来源的多肽与HBc18-27共同刺激，结果能明显增强CTL反应，这一初步结果为将来应用免疫调控方法进一步提高宫内HBV感染婴儿的CTL反应提供了可能的途径。, http://www.100md.com
单位：200032 上海医科大学儿科医院(吕晴、朱启、段恕诚)；上海医科大学分子病毒学实验室(熊恩东)
关键词：
中华儿科杂志/980519 乙型肝炎病毒(简称乙肝，HBV)感染后特异性杀伤性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL)的作用是清除病毒的关键。为了解宫内HBV感染婴儿特异性CTL功能及与乙肝疫苗反应性的关系，我们应用含HBV特异性杀伤性T淋巴细胞抗原表位的多肽诱导效应细胞，通过细胞溶解试验检测宫内HBV感染婴儿特异性CTL功能。
对象：宫内HBV感染婴儿12例，年
附表 各组HBc18-27诱导的CTL反应 组别
, http://www.100md.com
例数
年龄
(
±s，月)细胞溶解率(%)
(
±s，%)t′值*
P值
宫内感染(a)
12
6.1±2.8
, http://www.100md.com
21.9±12.3
免疫有效(a1)
7
6.1±2.7
28.4±12.1
3.1 (与b)
<0.05
免疫无效(a2)
5
6.0±3.1
12.9± 4.6
2.7 (与a1)
, http://www.100md.com
<0.05
急性HBV感染(b)
7
10.5±3.6
51.9±16.9
5.3 (与a2)
<0.01
慢性HBV感染(c)
6
18.2±4.1
14.3± 9.2
0.33 (与a2)
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>0.05
*各组细胞溶解率比较龄2个月～10个月，平均6.1±2.8(月)。其母亲为HBV携带者，新生儿出生时外周血乙肝表面抗原(HBsAg)阳性(用Abbott试剂检测)，伴血清HBV-DNA阳性(用地高辛标记的斑点杂交法)，持续超过2个月。出生后按0个月、1个月、6个月程序接种乙肝疫苗，若抗HBs阳转，HBsAg转阴则为免疫有效组；HBsAg和HBV-DNA持续阳性则为免疫无效组。另选择急性乙型肝炎恢复期小儿7例，慢性HBV感染小儿6例。
方法：合成含特异性CTL抗原表位的乙肝病毒核心(HBc)18-27多肽，氨基酸序列为FLPSPFFPSV，以这一多肽诱导外周血单个核细胞作为效应细胞，以3孔均值计算细胞溶解率(%)。另外，将另一段来源于破伤风类毒素的多肽(比830-844，氨基酸序列为QYIKANSKFIGITEL)与HBc18-27多肽共同刺激，观察这一含“多能”T细胞抗原表位的多肽对特异性CTL的影响。
, 百拇医药
结果：宫内HBV感染婴儿组细胞溶解率为21.9%，明显低于急性乙肝恢复期组；宫内感染免疫无效组细胞溶解率与慢性HBV感染组相似，明显低于免疫有效组，见附表。
将tt830-844与HBc18-27多肽共同刺激，观察复合抗原表位对细胞溶解率的影响，结果宫内感染免疫有效组细胞溶解率从28.4%±12.1%提高到46.1%±7.0%(t=2.69，P<0.05)；宫内感染免疫无效组细胞溶解率从12.9%±4.6%升至31.4%±14.3%(t=4.59，P<0.01)。
讨论：CTL能识别经细胞加工的、与人类主要组织相容性抗原(human histocompatibility leukocyte antigen, HLA)Ⅰ类分子结合的病毒多肽，HLAⅠ类分子与病毒多肽结合部位为深槽状三维结构，不同个体间HLA结构和空间构型差异很大，往往会影响与病毒多肽结合而不能产生有效的免疫反应。
, http://www.100md.com 应用现代免疫学技术已确立HBcAg中最短的CTL抗原表位为10个氨基酸组成的多肽，即HBc18-27肽段。本组的结果表明宫内HBV感染婴儿对这一多肽的CTL反应低于急性HBV感染恢复期患儿，提示宫内HBV感染婴儿在T细胞水平存在一定程度的免疫耐受。宫内感染免疫无效组CTL反应明显低于免疫有效组，表明CTL功能影响婴儿对乙肝疫苗的反应。由于CTL的作用主要与病毒清除有关，在其功能轻度低下或受暂时抑制时，在体内因素协同下仍可清除已感染的乙肝病毒，使免疫耐受得以中止或逆转而能对疫苗产生反应，若CTL功能严重受损或缺如则病毒感染仍持续，因而免疫无效。
我们应用破伤风类毒素来源的多肽与HBc18-27共同刺激，结果能明显增强CTL反应，这一初步结果为将来应用免疫调控方法进一步提高宫内HBV感染婴儿的CTL反应提供了可能的途径。, http://www.100md.com