丙型肝炎病毒母婴宫内传播的研究
作者：敖黎明 钱丽清 张东华 金根娣 钱龙华 蒋明华 黄心蕊 陆志檬 吴圣楣
单位：200092 上海市儿科医学研究所(敖黎明、钱龙华、蒋明华)；上海第二医科大学附属瑞金医院(张东华、金根娣、陆志檬)；上海第二医科大学附属新华医院(钱丽清、黄心蕊、吴圣楣)
关键词：肝炎病毒组；丙型；疾病传播；垂直；肝炎；丙型
中华儿科杂志/980513 【摘要】 目的 为研究丙型肝炎病毒(HCV)的母婴宫内传播，评估HCV母婴传播的危险性。方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测HCV，以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HCV-RNA。结果 检测的4 277例孕晚期孕妇血清抗-HCV，其中6例阳性，进一步检查HCV-RNA，结果6例中有5例阳性，且均有受血史，5例阳性孕妇其配对婴儿脐血抗-HCV均阳性，其中2例HCV-RNA阳性，肝功能异常；1例出生时HCV-RNA阴性，到24个月时HCV-RNA阳转。HCV母婴宫内传播率为2/5。结论 表明上海地区存在HCV母婴宫内传播，应重视有受血史的生育妇女孕期及孕前的HCV检查及HCV感染儿的随访。
, 百拇医药
The study on maternal-fetal transmission of hepatitis C virus
Ao Liming*, Qian Liqing, Zhang Donghua, et al. *
Shanghai Institute of Pediatrics, Shanghai 200092
【Abstract】 Objective To study the maternal-fetal transmission of hepatitis C virus (HCV) and to evaluate its risk.Methods Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) techniques were used in this study. Results A total of 4 277 pregnant women were screened for their serum anti-HCV antibody during the third trimester. Six pregnant women were anti-HCV positive. HCV-RNA was further detected using RT-PCR technique. It was found that 5 out of 6 anti-HCV seropositive women were HCV-RNA positive and they all had history of blood transfusion. Five neonates born to HCV infected mother were also found to be anti-HCV positive. Among them two were HCV-RNA positive and had abnormal hepatic functions. One of those neonates who were HCV-RNA negative at birth was found to be HCV-RNA positive at 24 months of age. Therefore, the maternal-fetal transmission rate of HCV was 2/5.Conclusion Maternal-fetal transmission of HCV exists in Shanghai. It is necessary for all the child-bearing aged women who had history of blood transfusion to have their serum HCV tested before conception and during pregnancy. Meanwhile, the infected neonates should be followed up.
, 百拇医药
【Key words】 【Key words】 Hepatitis C viruses Disease transmission, vertical Hepatitis C
丙型肝炎病毒(HCV)主要传播途径是经输血或血制品[1]，但有50%的HCV感染者无明显受血史，表明有其他传播途径。近年来国内外已有关于HCV母婴传播研究。我们于1993年3月至1995年6月对4 277名孕妇及其所生4 287名婴儿进行了HCV母婴传播的研究，现将结果报告如下。
对象与方法
一、研究对象和步骤 一、研究对象和步骤
自1993年3月至1995年6月，检测上海吴淞中心医院、公利医院、四平、凤城、江浦、潍坊街道医院4 277例孕妇血清及4 287例配对婴儿脐血抗-HCV，阳性者换一种酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对同份标本进行复检，复检阳性者才确认抗-HCV阳性，同时检测HCV-RNA及肝功能。
, http://www.100md.com
二、检测方法
初检抗-HCV试剂盒由上海华能博赛生物技术公司提供，复检用ELISA试剂盒由美国Abbott公司提供，均为第二代试剂。
三、HCV-RNA检测
1.引物设计：按照引物设计原则，根据电脑基因库提供HCV-J株核苷酸序列，在5′非编码区选择两对引物(由复旦大学合成)分别为外引物：P(5′GGCGACACTCCACCATAGATC3′)，P(5′GCACGGTCTACGAGACCTCCCG3′)，内引物：P(5′TGAGGAACTAC-TGTCTTCACGC3′)，P(5′TGCTCCCTATCAGGCA GTACCA3′)。这两对引物用来作套式聚合酶链反应(PCR)，扩增的片段分别为340 bp和260 bp。
附表 14例配对母婴抗-HCV、HCV-RNA检测结果 例号
, 百拇医药
母受
血史
孕母血清
肝功能
婴儿脐血
肝功能
随访婴儿血清
肝功能
随访
月龄
抗-HCV
HCV-RNA
抗-HCV
, 百拇医药
HCV-RNA
初检
复检
初检
复检
HCV-RNA
1
有
+
+
+
正常
+
+
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+
异常
-
正常
46
2
有
+
+
+
正常
+
+
-
, 百拇医药
正常
+
正常
24
3
有
+
+
+
正常
+
+
+
异常
, 百拇医药
-
正常
32
4
有
+
+
+
正常
+
+
-
正常
-
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正常
32
5
有
+
+
+
正常
+
+
-
正常
-
正常
, 百拇医药
30
6
无
+
+
-
正常
+
+
-
正常
失访
7～14
无
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+
-
-
正常
-
-
-
正常
2.标本处理(HCV-RNA抽提) 取血清50μl加裂解液500 μl(含4 mol/L异硫氰酸胍，0.02 mol/L柠檬酸纳，0.5%肌酸钠及0.1 mol/L 2-硫基乙醇)，再加入等体积抽提液(酚、氯仿、异戊醇)，4℃11 000 r/min，离心10分钟，水相部分加入1/10体积3 mol/L、pH5.6醋酸钠和2.5倍体积无水乙醇，-20℃>2h，4℃13 000 r/min离心20分钟，再以80%乙醇洗涤沉淀，用10 μl双蒸水(含20URNA酶抑制剂)溶解。
, 百拇医药
3.cDNA合成：20 μl逆转录体系中含上述抽提的RNA溶液10 μl，dNTPs200 μmol/L反向引物1.25 μmol/L，逆转录酶(华美公司提供)20U。经40℃60 min产物即作PCR。
4.套式PCR(试剂由华美公司提供)：第一轮PCR，反应体系100 μl(含cDNA20 μl，dNTPs200 μmol/L，外引物各1.25 μmol/L，Taq DNA多聚酶2U)，94℃5分钟后按94℃ 1分钟→55℃ 1.5分钟→72℃ 2分钟组成一个循环，共30个循环。第二轮PCR反应体系仍为100 μl，引物改为内引物，其他组份同第一轮PCR，所用扩增条件也相同。
5.结果观察：15分钟于紫外光下观察结果，第二轮PCR扩增产物于1.8%琼脂糖凝胶电泳，阳性标本在260 bp处可见清晰条带。结果
一、抗-HCV检测结果
, 百拇医药
用ELISA方法检测4 277例孕晚期孕妇血清抗-HCV，初检出抗-HCV阳性14例，复检结果8例阴性，6例阳性。6例阳性孕妇其配对婴儿脐血均检出抗-HCV阳性，复检结果仍阳性，其中4例在出生后1月、3月、6月血清均阳性，但有2例分别于7个月、13个月时转阴，2例6月后转阴。其余4 281例(其中双胎10例)婴儿脐血抗-HCV均阴性。
二、抗-HCV阴性者复检情况
8例复检抗-HCV阴性孕妇，同时检测HCV-RNA均阴性，所生婴儿脐血抗-HCV、复检及HCV-RNA均阴性，孕前孕期均未接受过血及血制品。
三、HCV-RNA检测情况
6例抗-HCV阳性孕妇血清中有5例同时检出HCV-RNA阳性，此5例孕妇孕前均有受血史，但肝功能正常，HBsAg均阴性，其丈夫抗-HCV、HCV-RNA均阴性。5例孕妇所生婴儿中有2例抗-HCV、HCV-RNA均为阳性，肝功能异常。24～36个月时14例配对母婴抗-HCV、HCV-RNA检测及随访结果见附表，HCV基因组5′非编码区逆转录-PCR(RT-PCR)产物的电泳结果为3例母亲阳性，婴儿阴性；2例母婴均阳性。
, 百拇医药
讨论
一、重视有受血史孕妇的抗-HCV检测
本组检测抗-HCV分别用两家不同公司提供的试剂进行初检和复检，结果初检孕妇14例阳性，复检结果只有6例阳性，8例阴性，前者同时检测HCV-RNA有5例阳性，且孕前均有受血史(高危人群)，而后者8例HCV-RNA均阴性，也无受血史，表明此8例孕妇为抗-HCV假阳性(占57%)与文献基本相符[2]，提示选择敏感性、特异性较好的试剂检测高危孕妇(输用过未经筛查献血员的血液及血制品者，不明原因的急性肝炎患者，静脉药瘾者，患性传播疾病者等)用以初步确诊HCV感染是合理的，且应同时测HCV-RNA作最后确诊。由此可见，重视有受血史孕妇在孕期甚至孕前的HCV检测是对提高优生质量保证孕母健康的一个重要措施。
二、HCV母婴宫内传播
检测抗-HCV阳性孕妇所生婴儿脐血抗-HCV曾作为研究HCV母婴传播的主要指标，但近年研究证实由于抗-HCV为IgG型，其可通过胎盘使胎儿被动获得抗-HCV[3]，不能视为HCV感染。本组新生儿脐血抗-HCV阳性6例，其中4例在出生6个月后逐渐转阴，支持上述观点。
, 百拇医药
HCV母婴宫内传播目前已成为人们普遍关注的问题，本组如附表所示5例血清抗-HCV和HCV-RNA同时阳性的孕妇所生婴儿中，2例婴儿脐血同时检出抗-HCV、HCV-RNA，且肝功能异常，母婴宫内传播率为2/5。1例出生时HCV-RNA阴性，到24个月时HCV-RNA阳转，此例属宫内感染抑或生后感染尚难定论。本研究表明HCV确实存在母婴宫内传播。但各家报道有很大差异(0%～100%)[3～5]。究其原因可能在异地各学者选择PCR引物，设定位点不同；单步PCR或套式PCR敏感性不一；孕妇婴儿HCV-RNA水平、分离和保存差异；研究群体样本、选择检测时间不一致等均是引起差异的因素。
本研究还发现母亲HCV-RNA阴性(例号6～14)所生婴儿HCV-RNA皆阴性，显示HCV母婴传播与孕妇HCV-RNA是否阳性相关，当母亲HCV-RNA阳性时容易发生母婴传播[6]。此外，母亲在孕晚期处于病毒血症期是否也是个重要因素，有待今后进一步研究证实。
, 百拇医药
三、婴儿感染HCV后的结局
婴儿感染HCV后，可出现暂时性病毒血症、间歇性病毒血症或持续性病毒血症，表现为急性或慢性丙型肝炎[7，8]。本组2例HCV感染婴儿(例号1,3)出生5个月后病毒血症消失，但肝功能1岁仍异常，分别到32个月、46个月时才恢复正常。而例2即在出生时HCV-RNA阴性到24个月时HCV-RNA阳转，呈间歇性病毒血症、丙氨酸转氨酶(ALT)正常和无临床症状，结果提示围产期HCV感染儿存在着上述不同的状态。为此，继续随访围产期HCV感染小儿，对了解丙型肝炎长期进展是有意义的。
志谢 本研究得到上海吴淞中心医院，公利医院，凤城、四平、江浦、潍坊医院的大力支持，谨此志谢
参考文献
1 Alter MJ, Coleman PJ，Alexander WJ，et al.Importonc of hetero-sexual activity in the transmisson of hepatits B and non-A, non-B hepatitis. JAMA，1989，262：1201-1205.
, http://www.100md.com
2 张树林.丙型肝炎的母婴传播与预防.国外医学妇产科学分册，1992，19：338-339.
3 Roudot T F, Pawlotsky JM,Thiers V, et al.Lack of motherto-infant transmission of hepatitis C virus in human immunodeficiency virus-sero-negative woman:a prospective study with hepatitis C virus RNA testing.Hepatology,1993,17:772-777.
4 李春洪，王延民，乐杰.逆转录套式聚合酶链反应在丙型肝炎病毒母婴传播研究中的应用.中华妇产科杂志,1996，31：34-35.
5 黄华芬.丙型肝炎病毒的母婴感染.国外医学妇产科学分册，1997，24：4235-4236.
, http://www.100md.com
6 Resti M, Azzari C, Lega L, et al. Mother to infant transmission of hepatitis C virus.Acta Pediatr,1995,184:251-255.
7 Novati R, Thiers V, Monforte AD, et al. Mother to child transmission of hepatitis C virus detected dy nested polymerase chain reaction. J Infect Dis, 1992,165：720-723.
8 Paccagnini S, Principi N, Massironi E, et al.Parinatal transmission and manifestation of hepatitis c Virus infection in a high risk population. Pediatr lnfect Dis J, 1995, 14:195-199., 百拇医药
单位：200092 上海市儿科医学研究所(敖黎明、钱龙华、蒋明华)；上海第二医科大学附属瑞金医院(张东华、金根娣、陆志檬)；上海第二医科大学附属新华医院(钱丽清、黄心蕊、吴圣楣)
关键词：肝炎病毒组；丙型；疾病传播；垂直；肝炎；丙型
中华儿科杂志/980513 【摘要】 目的 为研究丙型肝炎病毒(HCV)的母婴宫内传播，评估HCV母婴传播的危险性。方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测HCV，以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HCV-RNA。结果 检测的4 277例孕晚期孕妇血清抗-HCV，其中6例阳性，进一步检查HCV-RNA，结果6例中有5例阳性，且均有受血史，5例阳性孕妇其配对婴儿脐血抗-HCV均阳性，其中2例HCV-RNA阳性，肝功能异常；1例出生时HCV-RNA阴性，到24个月时HCV-RNA阳转。HCV母婴宫内传播率为2/5。结论 表明上海地区存在HCV母婴宫内传播，应重视有受血史的生育妇女孕期及孕前的HCV检查及HCV感染儿的随访。
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The study on maternal-fetal transmission of hepatitis C virus
Ao Liming*, Qian Liqing, Zhang Donghua, et al. *
Shanghai Institute of Pediatrics, Shanghai 200092
【Abstract】 Objective To study the maternal-fetal transmission of hepatitis C virus (HCV) and to evaluate its risk.Methods Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) techniques were used in this study. Results A total of 4 277 pregnant women were screened for their serum anti-HCV antibody during the third trimester. Six pregnant women were anti-HCV positive. HCV-RNA was further detected using RT-PCR technique. It was found that 5 out of 6 anti-HCV seropositive women were HCV-RNA positive and they all had history of blood transfusion. Five neonates born to HCV infected mother were also found to be anti-HCV positive. Among them two were HCV-RNA positive and had abnormal hepatic functions. One of those neonates who were HCV-RNA negative at birth was found to be HCV-RNA positive at 24 months of age. Therefore, the maternal-fetal transmission rate of HCV was 2/5.Conclusion Maternal-fetal transmission of HCV exists in Shanghai. It is necessary for all the child-bearing aged women who had history of blood transfusion to have their serum HCV tested before conception and during pregnancy. Meanwhile, the infected neonates should be followed up.
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【Key words】 【Key words】 Hepatitis C viruses Disease transmission, vertical Hepatitis C
丙型肝炎病毒(HCV)主要传播途径是经输血或血制品[1]，但有50%的HCV感染者无明显受血史，表明有其他传播途径。近年来国内外已有关于HCV母婴传播研究。我们于1993年3月至1995年6月对4 277名孕妇及其所生4 287名婴儿进行了HCV母婴传播的研究，现将结果报告如下。
对象与方法
一、研究对象和步骤 一、研究对象和步骤
自1993年3月至1995年6月，检测上海吴淞中心医院、公利医院、四平、凤城、江浦、潍坊街道医院4 277例孕妇血清及4 287例配对婴儿脐血抗-HCV，阳性者换一种酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对同份标本进行复检，复检阳性者才确认抗-HCV阳性，同时检测HCV-RNA及肝功能。
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二、检测方法
初检抗-HCV试剂盒由上海华能博赛生物技术公司提供，复检用ELISA试剂盒由美国Abbott公司提供，均为第二代试剂。
三、HCV-RNA检测
1.引物设计：按照引物设计原则，根据电脑基因库提供HCV-J株核苷酸序列，在5′非编码区选择两对引物(由复旦大学合成)分别为外引物：P(5′GGCGACACTCCACCATAGATC3′)，P(5′GCACGGTCTACGAGACCTCCCG3′)，内引物：P(5′TGAGGAACTAC-TGTCTTCACGC3′)，P(5′TGCTCCCTATCAGGCA GTACCA3′)。这两对引物用来作套式聚合酶链反应(PCR)，扩增的片段分别为340 bp和260 bp。
附表 14例配对母婴抗-HCV、HCV-RNA检测结果 例号
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母受
血史
孕母血清
肝功能
婴儿脐血
肝功能
随访婴儿血清
肝功能
随访
月龄
抗-HCV
HCV-RNA
抗-HCV
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HCV-RNA
初检
复检
初检
复检
HCV-RNA
1
有
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正常
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异常
-
正常
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正常
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正常
32
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30
6
无
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正常
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失访
7～14
无
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正常
2.标本处理(HCV-RNA抽提) 取血清50μl加裂解液500 μl(含4 mol/L异硫氰酸胍，0.02 mol/L柠檬酸纳，0.5%肌酸钠及0.1 mol/L 2-硫基乙醇)，再加入等体积抽提液(酚、氯仿、异戊醇)，4℃11 000 r/min，离心10分钟，水相部分加入1/10体积3 mol/L、pH5.6醋酸钠和2.5倍体积无水乙醇，-20℃>2h，4℃13 000 r/min离心20分钟，再以80%乙醇洗涤沉淀，用10 μl双蒸水(含20URNA酶抑制剂)溶解。
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3.cDNA合成：20 μl逆转录体系中含上述抽提的RNA溶液10 μl，dNTPs200 μmol/L反向引物1.25 μmol/L，逆转录酶(华美公司提供)20U。经40℃60 min产物即作PCR。
4.套式PCR(试剂由华美公司提供)：第一轮PCR，反应体系100 μl(含cDNA20 μl，dNTPs200 μmol/L，外引物各1.25 μmol/L，Taq DNA多聚酶2U)，94℃5分钟后按94℃ 1分钟→55℃ 1.5分钟→72℃ 2分钟组成一个循环，共30个循环。第二轮PCR反应体系仍为100 μl，引物改为内引物，其他组份同第一轮PCR，所用扩增条件也相同。
5.结果观察：15分钟于紫外光下观察结果，第二轮PCR扩增产物于1.8%琼脂糖凝胶电泳，阳性标本在260 bp处可见清晰条带。结果
一、抗-HCV检测结果
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用ELISA方法检测4 277例孕晚期孕妇血清抗-HCV，初检出抗-HCV阳性14例，复检结果8例阴性，6例阳性。6例阳性孕妇其配对婴儿脐血均检出抗-HCV阳性，复检结果仍阳性，其中4例在出生后1月、3月、6月血清均阳性，但有2例分别于7个月、13个月时转阴，2例6月后转阴。其余4 281例(其中双胎10例)婴儿脐血抗-HCV均阴性。
二、抗-HCV阴性者复检情况
8例复检抗-HCV阴性孕妇，同时检测HCV-RNA均阴性，所生婴儿脐血抗-HCV、复检及HCV-RNA均阴性，孕前孕期均未接受过血及血制品。
三、HCV-RNA检测情况
6例抗-HCV阳性孕妇血清中有5例同时检出HCV-RNA阳性，此5例孕妇孕前均有受血史，但肝功能正常，HBsAg均阴性，其丈夫抗-HCV、HCV-RNA均阴性。5例孕妇所生婴儿中有2例抗-HCV、HCV-RNA均为阳性，肝功能异常。24～36个月时14例配对母婴抗-HCV、HCV-RNA检测及随访结果见附表，HCV基因组5′非编码区逆转录-PCR(RT-PCR)产物的电泳结果为3例母亲阳性，婴儿阴性；2例母婴均阳性。
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讨论
一、重视有受血史孕妇的抗-HCV检测
本组检测抗-HCV分别用两家不同公司提供的试剂进行初检和复检，结果初检孕妇14例阳性，复检结果只有6例阳性，8例阴性，前者同时检测HCV-RNA有5例阳性，且孕前均有受血史(高危人群)，而后者8例HCV-RNA均阴性，也无受血史，表明此8例孕妇为抗-HCV假阳性(占57%)与文献基本相符[2]，提示选择敏感性、特异性较好的试剂检测高危孕妇(输用过未经筛查献血员的血液及血制品者，不明原因的急性肝炎患者，静脉药瘾者，患性传播疾病者等)用以初步确诊HCV感染是合理的，且应同时测HCV-RNA作最后确诊。由此可见，重视有受血史孕妇在孕期甚至孕前的HCV检测是对提高优生质量保证孕母健康的一个重要措施。
二、HCV母婴宫内传播
检测抗-HCV阳性孕妇所生婴儿脐血抗-HCV曾作为研究HCV母婴传播的主要指标，但近年研究证实由于抗-HCV为IgG型，其可通过胎盘使胎儿被动获得抗-HCV[3]，不能视为HCV感染。本组新生儿脐血抗-HCV阳性6例，其中4例在出生6个月后逐渐转阴，支持上述观点。
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HCV母婴宫内传播目前已成为人们普遍关注的问题，本组如附表所示5例血清抗-HCV和HCV-RNA同时阳性的孕妇所生婴儿中，2例婴儿脐血同时检出抗-HCV、HCV-RNA，且肝功能异常，母婴宫内传播率为2/5。1例出生时HCV-RNA阴性，到24个月时HCV-RNA阳转，此例属宫内感染抑或生后感染尚难定论。本研究表明HCV确实存在母婴宫内传播。但各家报道有很大差异(0%～100%)[3～5]。究其原因可能在异地各学者选择PCR引物，设定位点不同；单步PCR或套式PCR敏感性不一；孕妇婴儿HCV-RNA水平、分离和保存差异；研究群体样本、选择检测时间不一致等均是引起差异的因素。
本研究还发现母亲HCV-RNA阴性(例号6～14)所生婴儿HCV-RNA皆阴性，显示HCV母婴传播与孕妇HCV-RNA是否阳性相关，当母亲HCV-RNA阳性时容易发生母婴传播[6]。此外，母亲在孕晚期处于病毒血症期是否也是个重要因素，有待今后进一步研究证实。
, 百拇医药
三、婴儿感染HCV后的结局
婴儿感染HCV后，可出现暂时性病毒血症、间歇性病毒血症或持续性病毒血症，表现为急性或慢性丙型肝炎[7，8]。本组2例HCV感染婴儿(例号1,3)出生5个月后病毒血症消失，但肝功能1岁仍异常，分别到32个月、46个月时才恢复正常。而例2即在出生时HCV-RNA阴性到24个月时HCV-RNA阳转，呈间歇性病毒血症、丙氨酸转氨酶(ALT)正常和无临床症状，结果提示围产期HCV感染儿存在着上述不同的状态。为此，继续随访围产期HCV感染小儿，对了解丙型肝炎长期进展是有意义的。
志谢 本研究得到上海吴淞中心医院，公利医院，凤城、四平、江浦、潍坊医院的大力支持，谨此志谢
参考文献
1 Alter MJ, Coleman PJ，Alexander WJ，et al.Importonc of hetero-sexual activity in the transmisson of hepatits B and non-A, non-B hepatitis. JAMA，1989，262：1201-1205.
, http://www.100md.com
2 张树林.丙型肝炎的母婴传播与预防.国外医学妇产科学分册，1992，19：338-339.
3 Roudot T F, Pawlotsky JM,Thiers V, et al.Lack of motherto-infant transmission of hepatitis C virus in human immunodeficiency virus-sero-negative woman:a prospective study with hepatitis C virus RNA testing.Hepatology,1993,17:772-777.
4 李春洪，王延民，乐杰.逆转录套式聚合酶链反应在丙型肝炎病毒母婴传播研究中的应用.中华妇产科杂志,1996，31：34-35.
5 黄华芬.丙型肝炎病毒的母婴感染.国外医学妇产科学分册，1997，24：4235-4236.
, http://www.100md.com
6 Resti M, Azzari C, Lega L, et al. Mother to infant transmission of hepatitis C virus.Acta Pediatr,1995,184:251-255.
7 Novati R, Thiers V, Monforte AD, et al. Mother to child transmission of hepatitis C virus detected dy nested polymerase chain reaction. J Infect Dis, 1992,165：720-723.
8 Paccagnini S, Principi N, Massironi E, et al.Parinatal transmission and manifestation of hepatitis c Virus infection in a high risk population. Pediatr lnfect Dis J, 1995, 14:195-199., 百拇医药