维生素A对新生儿单个核细胞IgM生成能力的促进作用
作者：丁艳华 王卫平
单位：200032 上海医科大学儿科医院
关键词：维生素A；婴儿；新生；胎血；IgM；单核细胞
中华儿科杂志/980606 【摘要】 目的 探讨维生素A(VitA)对新生儿脐血单个核细胞IgM生成能力的影响。方法 应用体外培养试验在培养基中加入一定量的视黄酸(RA)，观察VitA水平正常组与缺乏组新生儿脐血单个核细胞生成IgM的变化。结果 RA能够增加SAC刺激下的单个核细胞的IgM生成，加RA后VitA正常组IgM由666±402 μg/L增加到1 389±982 μg/L(P<0.01)，VitA缺乏组由350±136 μg/L(增到581±241 μg/L)(P<0.01)。尽管体外加RA后Vit A缺乏组的IgM水平有所上升，但增加量和增加幅度都显著低于VitA正常组。相关分析的结果表明，新生儿脐血VitA含量与体外培养加RA后IgM的增加幅度之间存在着一定的正相关关系。结论 VitA对新生儿单个核细胞生成IgM的能力具有重要的促进作用。
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The effects of vitamin A nutritional status on the IgM producing ability of the cord blood mononuclear cells
Ding Yanhua, Wang Weiping. The Children′s Hospital,Shanghai Medical University, Shanghai 200032
【Abstract 】 Objective To assess the effect of vitamin A(Vit A) nutritional status on the IgM producing ability of the cord blood mononuclear cells (CBMNC). Methods The IgM production of newborns′ CBMNC after supplenting a certain dosage of retinoic acid (RA) in vitro was investigated in both VitA normal and deficient groups. Results RA was able to augment the IgM production of CBMNC induced by staphylococcus aureus cowan. In VitA normal group, the IgM production increased from 666±402 μg/L to 1389±982 μg/L(P<0.05), while in VitA deficient group, it increased from 350±136 μg/L to 581±241 μg/L. The level of IgM production in VitA deficient group was significantly lower than that in VitA normal group (P<0.05). Both the enhanced quantity and the enhanced amplitude in VitA deficient group were lower than those in VitA normal group. The serum VitA concentration of newborns correlated positively with the enhanced amplitude of IgM production of CBMNC. Conclusion VitA is important for the mononuclear cells to produce sufficient IgM.
, 百拇医药
【Key words 】 VitA Infant, newborn Fetal blood IGM Monocytes
维生素A(Vit A)及其代谢产物视黄醇为机体许多重要的生理过程所必需，如暗适应、维持上皮组织的完整性、促进机体生长发育等。近年来，VitA与免疫之间的关系又为人们所关注，特别是VitA对体液免疫的促进作用，被认为是提高机体抗感染能力的主要原因之一。
Buck等[1]的细胞培养结果显示，视黄醇可发挥B淋巴细胞生长因子的作用，且B淋巴细胞生长速度呈现与VitA“剂量相关性”的增高。视黄酸(RA)是天然VitA在体内代谢后的活性产物，正常血清水平远低于视黄醇，但对多种组织的分化增殖和功能成熟具有更明显的促进作用。Wang等[2]将RA用于体外细胞培养，证实RA能增强SAC(staphylococcus aureus cowan I，又称溶血性葡萄球菌cowanⅠ株)刺激下的脐血单个核细胞的IgM生成，其最适浓度为1×10-6 mol/L。本研究在此实验基础上，进一步探讨了新生儿自身的VitA营养状况对于RA增强单个核细胞IgM生成能力作用的影响。
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对象及方法
一、研究对象与标本采集
1.采集上海市国际和平妇幼保健院的34例健康足月新生儿脐血10 ml，肝素抗凝。
2.采用荧光分光光度法测定新生儿脐血中血清VitA含量，其中血清VitA含量>0.70 μmol/L者(20例)为VitA正常组；血清VitA含量≤0.70 μmol/L(14例)为VitA缺乏组。两组新生儿身高与体重差异无显著意义。
二、测定方法
1.将抗凝的脐血经密度梯度离心法分离得单个核细胞，并调整细胞浓度至1×106个/ml。
2.于96孔培养板中，将细胞混悬液分为三组：空白组：不加任何刺激物；对照组：加SAC刺激；试验组：加SAC与RA共同培养。每组三份，其中SAC的最终稀释度为1∶ 1 800，RA的最终浓度为1×10-6mol/L。
, 百拇医药
3.于5% 37℃的二氧化碳(CO2)孵箱中培养细胞8天后，收集细胞上清液。
4.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)双抗夹心法检测上清IgM。
三、统计学处理
统计分析采用Lotus 1-2-3 Release 4.01软件在IBM-PC/XT微型计算机上处理。
结果及分析
一、VitA对新生儿脐血单个核细胞IgM生成水平的促进作用
体外培养加RA后增加了SAC诱导的脐血单个核细胞产生IgM的量，其中VitA正常组由666±402 μg/L增加到1389±982 μg/L，差异有非常显著意义(P<0.01)；缺乏组由350±136 μg/L增加到581±241 μg/L，差异有非常显著意义(P<0.01)(附表)。
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附表 两组新生儿脐血单个核细胞的
IgM生成水平(μg/L,
±s) 组别
未加RA
加RA后
增加量
增加幅度
(倍)
VitA正常组
666±420
1 389±982
749±602
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3.1±1.9
VitA缺乏组
350±136
581±241
246±193
2.2±1.3
t值
3.83
5.47
3.64
2.32
P值
<0.01
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<0.01
<0.01
<0.05
二、VitA正常组与缺乏组IgM生成水平的比较
由附表可见，未加RA与加RA后，VitA缺乏组的IgM生成量均低于VitA正常组，差异有非常显著意义(P<0.01)，且增加量与增加幅度也都较VitA正常组为低，差异有显著意义(P<0.05)。
三、新生儿脐血VitA水平与IgM生成水平的相关性
相关分析的结果表明，新生儿脐血VitA含量与体外培养加RA后IgM的增加幅度之间有显著正相关关系(r=0.379、>0.334，P<0.05)。
讨论
, 百拇医药
本研究的试验结果表明，1×10-6mol/L浓度下的RA能够增加SAC诱导的脐血单个核细胞产生IgM的量(P<0.01)，这与Wang等[2]的报道结果是一致的。
本研究进一步发现，在相同的体外培养条件下，VitA缺乏组的新生儿较VitA正常组脐血单个核细胞生成IgM的量有明显差异，无论是单一的SAC刺激下，还是加入RA后的SAC刺激下，缺乏组的IgM生成量均显著低于正常组(P<0.01)，而且增加量与增加幅度亦较正常组为低(P<0.05)。提示：体外培养RA对于新生儿单个核细胞生成IgM的促进作用，显然还受到新生儿机体VitA营养状况的制约。尽管加入RA后，缺乏组的IgM生成水平有所上升，但RA对于新生儿出生后IgM生成量的这种上调作用，也许较为微弱或缓慢。因此，纠正胎儿期的VitA缺乏状态，可望促进胎儿免疫功能的发育成熟，从而提高他们生后的免疫能力。
动物实验表明，VitA缺乏的小鼠呈现胸腺和淋巴器官萎缩及胸腺淋巴细胞减少，再给VitA缺乏的小鼠或家兔肌注VitA后，其胸腺和脾脏的重量显著增加，说明VitA对于免疫系统的正常维持，具有重要影响[3]。人类免疫系统的发生发育在胚胎早期已经开始。到出生时尚处于逐渐完善的继续发育阶段。胎儿时期的VitA营养不良，是否阻滞了胎儿免疫系统的发育成熟，继而影响到胎儿生后的免疫功能，值得进一步探讨。就B淋巴细胞而言，新生儿时期尽管B细胞的数量与成人相似，并且B细胞膜表面免疫球蛋白(SIg)已达到成人水平，但抗体生成却低下，且主要为IgM类抗体[4]。因此，维持和促进B细胞的抗体生成能力对提高此时期的抗感染免疫功能非常重要。
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本研究通过相关分析还发现，脐血VitA水平和体外培养加RA后IgM的增加幅度之间存在着显著的正相关关系，其机制很可能在于：视黄醇赖以结合的细胞内视黄醇特异性受体(CRAR)的表达水平与机体VitA营养有关。随着分子生物学检测技术的发展，最近已在多种组织细胞中发现视黄醇的特异性受体CRAR。CRAR属于固醇类核受体家族，多位于细胞内基因表达控制区，与RA结合后通过调节某些细胞基因的转录表达，产生特殊的功能活动或活性物质[5]。继续深入研究VitA营养对小儿淋巴细胞功能的作用机制是否同细胞内CRAR的表达水平有关，将提供VitA营养促进小儿免疫功能的直接证据。
参考文献
1 Buck J, Retter G, Dannecker L, et al. Retinol is essential for growth of activated human B cells. J Exp Med, 1990, 171:1613-1624.
, http://www.100md.com
2 Wang W, Napoli JL, Ballow M. The effects of retinol on in vitro immunoglobulin synthesis by cord blood and adult peripheral blood mononuclear cells. Clin Exp Immunol, 1993, 92:164-168.
3 衣京梅.维生素A对新生儿免疫功能的影响.国外医学儿科学分册，1994，21：248-251.
4 Watson W, Oen K, Ramdahim R, et al. Immunoglobulin and cytokine production by neonatal lymphocytes. Clin Exp Immunol, 1991, 83:169-174.
5 Petkovich M. Regulation of gene expression by vitamin A: the role of nuclear retinoic acid receptors. Annu Rev Nutr, 1992, 12:443-447., 百拇医药
单位：200032 上海医科大学儿科医院
关键词：维生素A；婴儿；新生；胎血；IgM；单核细胞
中华儿科杂志/980606 【摘要】 目的 探讨维生素A(VitA)对新生儿脐血单个核细胞IgM生成能力的影响。方法 应用体外培养试验在培养基中加入一定量的视黄酸(RA)，观察VitA水平正常组与缺乏组新生儿脐血单个核细胞生成IgM的变化。结果 RA能够增加SAC刺激下的单个核细胞的IgM生成，加RA后VitA正常组IgM由666±402 μg/L增加到1 389±982 μg/L(P<0.01)，VitA缺乏组由350±136 μg/L(增到581±241 μg/L)(P<0.01)。尽管体外加RA后Vit A缺乏组的IgM水平有所上升，但增加量和增加幅度都显著低于VitA正常组。相关分析的结果表明，新生儿脐血VitA含量与体外培养加RA后IgM的增加幅度之间存在着一定的正相关关系。结论 VitA对新生儿单个核细胞生成IgM的能力具有重要的促进作用。
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The effects of vitamin A nutritional status on the IgM producing ability of the cord blood mononuclear cells
Ding Yanhua, Wang Weiping. The Children′s Hospital,Shanghai Medical University, Shanghai 200032
【Abstract 】 Objective To assess the effect of vitamin A(Vit A) nutritional status on the IgM producing ability of the cord blood mononuclear cells (CBMNC). Methods The IgM production of newborns′ CBMNC after supplenting a certain dosage of retinoic acid (RA) in vitro was investigated in both VitA normal and deficient groups. Results RA was able to augment the IgM production of CBMNC induced by staphylococcus aureus cowan. In VitA normal group, the IgM production increased from 666±402 μg/L to 1389±982 μg/L(P<0.05), while in VitA deficient group, it increased from 350±136 μg/L to 581±241 μg/L. The level of IgM production in VitA deficient group was significantly lower than that in VitA normal group (P<0.05). Both the enhanced quantity and the enhanced amplitude in VitA deficient group were lower than those in VitA normal group. The serum VitA concentration of newborns correlated positively with the enhanced amplitude of IgM production of CBMNC. Conclusion VitA is important for the mononuclear cells to produce sufficient IgM.
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【Key words 】 VitA Infant, newborn Fetal blood IGM Monocytes
维生素A(Vit A)及其代谢产物视黄醇为机体许多重要的生理过程所必需，如暗适应、维持上皮组织的完整性、促进机体生长发育等。近年来，VitA与免疫之间的关系又为人们所关注，特别是VitA对体液免疫的促进作用，被认为是提高机体抗感染能力的主要原因之一。
Buck等[1]的细胞培养结果显示，视黄醇可发挥B淋巴细胞生长因子的作用，且B淋巴细胞生长速度呈现与VitA“剂量相关性”的增高。视黄酸(RA)是天然VitA在体内代谢后的活性产物，正常血清水平远低于视黄醇，但对多种组织的分化增殖和功能成熟具有更明显的促进作用。Wang等[2]将RA用于体外细胞培养，证实RA能增强SAC(staphylococcus aureus cowan I，又称溶血性葡萄球菌cowanⅠ株)刺激下的脐血单个核细胞的IgM生成，其最适浓度为1×10-6 mol/L。本研究在此实验基础上，进一步探讨了新生儿自身的VitA营养状况对于RA增强单个核细胞IgM生成能力作用的影响。
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对象及方法
一、研究对象与标本采集
1.采集上海市国际和平妇幼保健院的34例健康足月新生儿脐血10 ml，肝素抗凝。
2.采用荧光分光光度法测定新生儿脐血中血清VitA含量，其中血清VitA含量>0.70 μmol/L者(20例)为VitA正常组；血清VitA含量≤0.70 μmol/L(14例)为VitA缺乏组。两组新生儿身高与体重差异无显著意义。
二、测定方法
1.将抗凝的脐血经密度梯度离心法分离得单个核细胞，并调整细胞浓度至1×106个/ml。
2.于96孔培养板中，将细胞混悬液分为三组：空白组：不加任何刺激物；对照组：加SAC刺激；试验组：加SAC与RA共同培养。每组三份，其中SAC的最终稀释度为1∶ 1 800，RA的最终浓度为1×10-6mol/L。
, 百拇医药
3.于5% 37℃的二氧化碳(CO2)孵箱中培养细胞8天后，收集细胞上清液。
4.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)双抗夹心法检测上清IgM。
三、统计学处理
统计分析采用Lotus 1-2-3 Release 4.01软件在IBM-PC/XT微型计算机上处理。
结果及分析
一、VitA对新生儿脐血单个核细胞IgM生成水平的促进作用
体外培养加RA后增加了SAC诱导的脐血单个核细胞产生IgM的量，其中VitA正常组由666±402 μg/L增加到1389±982 μg/L，差异有非常显著意义(P<0.01)；缺乏组由350±136 μg/L增加到581±241 μg/L，差异有非常显著意义(P<0.01)(附表)。
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附表 两组新生儿脐血单个核细胞的
IgM生成水平(μg/L,
±s) 组别未加RA
加RA后
增加量
增加幅度
(倍)
VitA正常组
666±420
1 389±982
749±602
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3.1±1.9
VitA缺乏组
350±136
581±241
246±193
2.2±1.3
t值
3.83
5.47
3.64
2.32
P值
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二、VitA正常组与缺乏组IgM生成水平的比较
由附表可见，未加RA与加RA后，VitA缺乏组的IgM生成量均低于VitA正常组，差异有非常显著意义(P<0.01)，且增加量与增加幅度也都较VitA正常组为低，差异有显著意义(P<0.05)。
三、新生儿脐血VitA水平与IgM生成水平的相关性
相关分析的结果表明，新生儿脐血VitA含量与体外培养加RA后IgM的增加幅度之间有显著正相关关系(r=0.379、>0.334，P<0.05)。
讨论
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本研究的试验结果表明，1×10-6mol/L浓度下的RA能够增加SAC诱导的脐血单个核细胞产生IgM的量(P<0.01)，这与Wang等[2]的报道结果是一致的。
本研究进一步发现，在相同的体外培养条件下，VitA缺乏组的新生儿较VitA正常组脐血单个核细胞生成IgM的量有明显差异，无论是单一的SAC刺激下，还是加入RA后的SAC刺激下，缺乏组的IgM生成量均显著低于正常组(P<0.01)，而且增加量与增加幅度亦较正常组为低(P<0.05)。提示：体外培养RA对于新生儿单个核细胞生成IgM的促进作用，显然还受到新生儿机体VitA营养状况的制约。尽管加入RA后，缺乏组的IgM生成水平有所上升，但RA对于新生儿出生后IgM生成量的这种上调作用，也许较为微弱或缓慢。因此，纠正胎儿期的VitA缺乏状态，可望促进胎儿免疫功能的发育成熟，从而提高他们生后的免疫能力。
动物实验表明，VitA缺乏的小鼠呈现胸腺和淋巴器官萎缩及胸腺淋巴细胞减少，再给VitA缺乏的小鼠或家兔肌注VitA后，其胸腺和脾脏的重量显著增加，说明VitA对于免疫系统的正常维持，具有重要影响[3]。人类免疫系统的发生发育在胚胎早期已经开始。到出生时尚处于逐渐完善的继续发育阶段。胎儿时期的VitA营养不良，是否阻滞了胎儿免疫系统的发育成熟，继而影响到胎儿生后的免疫功能，值得进一步探讨。就B淋巴细胞而言，新生儿时期尽管B细胞的数量与成人相似，并且B细胞膜表面免疫球蛋白(SIg)已达到成人水平，但抗体生成却低下，且主要为IgM类抗体[4]。因此，维持和促进B细胞的抗体生成能力对提高此时期的抗感染免疫功能非常重要。
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本研究通过相关分析还发现，脐血VitA水平和体外培养加RA后IgM的增加幅度之间存在着显著的正相关关系，其机制很可能在于：视黄醇赖以结合的细胞内视黄醇特异性受体(CRAR)的表达水平与机体VitA营养有关。随着分子生物学检测技术的发展，最近已在多种组织细胞中发现视黄醇的特异性受体CRAR。CRAR属于固醇类核受体家族，多位于细胞内基因表达控制区，与RA结合后通过调节某些细胞基因的转录表达，产生特殊的功能活动或活性物质[5]。继续深入研究VitA营养对小儿淋巴细胞功能的作用机制是否同细胞内CRAR的表达水平有关，将提供VitA营养促进小儿免疫功能的直接证据。
参考文献
1 Buck J, Retter G, Dannecker L, et al. Retinol is essential for growth of activated human B cells. J Exp Med, 1990, 171:1613-1624.
, http://www.100md.com
2 Wang W, Napoli JL, Ballow M. The effects of retinol on in vitro immunoglobulin synthesis by cord blood and adult peripheral blood mononuclear cells. Clin Exp Immunol, 1993, 92:164-168.
3 衣京梅.维生素A对新生儿免疫功能的影响.国外医学儿科学分册，1994，21：248-251.
4 Watson W, Oen K, Ramdahim R, et al. Immunoglobulin and cytokine production by neonatal lymphocytes. Clin Exp Immunol, 1991, 83:169-174.
5 Petkovich M. Regulation of gene expression by vitamin A: the role of nuclear retinoic acid receptors. Annu Rev Nutr, 1992, 12:443-447., 百拇医药