维生素D对免疫功能调节作用的初步研究
作者：林岚 关智平
单位：510080 广州中山医科大学附属第一医院儿科(第一作者现在工作单位：510120 广州市儿童医院)
关键词：
中华儿科杂志990220 本研究初步探讨在体条件下维生素D(VD)缺乏性佝偻病患儿VD缺乏对外周血单个核细胞(PBMC) 分泌的肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响及VD对其的调节作用，并同时检测了该组患儿的免疫球蛋白的水平及血锌水平。
对象及方法：(1)对象：11例有VD缺乏的佝偻病患儿，年龄2个月～3岁，平均年龄15±12个月，男2例，女9例，无明显感染病史，无严重肝、肾及骨骼畸型。15例无VD缺乏的健康儿童作对照，男8例，女7例，年龄10个月～11岁，平均5±4岁。(2)方法：每例佝偻病患儿肌内注射VD3 50万U，分2次，间隔5周。于治疗前后间隔7周2次抽静脉血测定：(1)25-OHD：用竞争蛋白结合法。(2)TNF-α：分离PBMC，经脂多糖(LPS)诱生12小时，收获培养上清，置-30℃冰箱保存集中测定。TNF-α测定用酶联免疫吸附方法(军事科学院试剂盒)。(3)血清免疫球蛋白：用散射比浊速率法。(4)血锌：用原子吸收法。所有数据用SPSS 6.0版统计软件处理，TNF-α经对数转换，采用配对t检验和成组t检验。
, 百拇医药
结果：1.临床观察：11例佝偻病患儿，根据佝偻病临床分度标准，2例属于中度，余皆为轻度患者，治疗后复查9例，佝偻病体征有不同程度的改善。
2.健康对照组分年龄及性别比较PBMC经LPS诱生后TNF-α水平。年龄分组示：<3岁组9例与>3岁组6例之间差异无显著意义[0.7(0.3～2.5)，1.3(0.9～2.5) ng/ml，P>0.05]；性别分组示：男8例，女7例，之间差异亦无显著意义[0.9(0.4～2.5)，1.8(0.3～2.5) ng/ml，P>0.05]。
3.治疗前后各项指标测定结果(表1)。佝偻病患儿治疗前与对照组(<3岁组)及治疗后的25-OHD水平比较，差异均有显著意义；治疗前后PBMC经LPS诱生TNF-α水平的变化：治疗前TNF-α值低于正常对照，治疗后TNF-α升高到正常儿水平，治疗前与正常对照比较差异有显著意义[0.4(0.3～0.7)，0.7(0.3～2.5) ng/ml，P<0.001]治疗前、后比较差异有显著意义[0.4(0.3～0.7)，0.8(0.5～2.0) ng/ml，P<0.05]。9例治疗前后配对比较差异有显著意义。治疗前后IgG、IgA、IgM水平无明显变化，与参考值比较无明显低下，治疗前后血锌均低于参考值。
, 百拇医药
表1 9例佝偻病患儿治疗前后25-OHD、TNF-α、IgA、IgG、IgM、Zn值及比较(
±s) 组别
25-OHD(ng/ml)
TNF-α(ng/ml)
IgA
(g/L)
IgG
(g/L)
IgM
(g/L)
Zn
, 百拇医药
(μmol/L)
中位数
范围
对照
26.3±9.0
0.7
0.3～2.5
治疗前
16.6±2.1
0.4
0.3～0.7
0.92±0.25
11±5
, 百拇医药
1.5±0.4
8.1±1.5
治疗后
27.0±7.2
0.8
0.5～2.0
0.80±0.41
9±4
1.4±0.5
8.7±0.9
t值
5.72
3.87
, http://www.100md.com
-0.66
0.84
-0.20
0.37
P值
<0.001
<0.05
>0.05
>0.05
>0.05
>0.05
讨论：TNF是一类能直接造成肿瘤细胞死亡的细胞因子。根据其来源和结构的不同分为两种类型，即TNF-α和TNF-β。前者主要由巨噬细胞产生，LPS是诱导其产生的较强刺激剂；后者主要由活化T细胞产生。TNF-α在低浓度时可作为一种白细胞和内皮细胞的旁分泌和自分泌调节剂，对机体的作用为一种免疫生理过程。低浓度TNF-α的生物学活性主要表现为抗感染，引起炎症反应和抗肿瘤。本研究结果显示VD缺乏性佝偻病患儿其TNF-α的水平明显低下，经用VD治疗后当25-OHD恢复正常时，TNF-α水平亦明显升高，显示VD对其有调节作用。与动物及离体实验所观察到的VD缺乏可引起单核巨噬细胞细胞因子(IL-6、TNF、IL-1)产生减少，而将PBMC与1，25-OHD共育，细胞因子产生增加的结果一致。有报道VD缺乏导致巨噬细胞吞噬作用及趋化性下降，外源性给予IL-1、TNF能提高抗菌能力，单核巨噬细胞细胞因子IL-1、IL-6、TNF的分泌减少则削弱了其抗感染的免疫能力， 因此异常的吞噬细胞功能可能是VD缺乏性佝偻病患儿易于感染的原因。本研究中佝偻病患儿免疫球蛋白的水平无明显低下，与国内外的大多数报道一致。但本研究不能排除VD缺乏对抗原特异性抗体反应及IgG亚类的影响，迄今国内外尚无这两方面报道。本组患儿血锌低，与佝偻病患儿血锌低的报道一致。于治疗前后血锌无明显变化可排除其对本研究的影响。
(收稿：1997-07-18 修回：1998-05-21), 百拇医药
单位：510080 广州中山医科大学附属第一医院儿科(第一作者现在工作单位：510120 广州市儿童医院)
关键词：
中华儿科杂志990220 本研究初步探讨在体条件下维生素D(VD)缺乏性佝偻病患儿VD缺乏对外周血单个核细胞(PBMC) 分泌的肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响及VD对其的调节作用，并同时检测了该组患儿的免疫球蛋白的水平及血锌水平。
对象及方法：(1)对象：11例有VD缺乏的佝偻病患儿，年龄2个月～3岁，平均年龄15±12个月，男2例，女9例，无明显感染病史，无严重肝、肾及骨骼畸型。15例无VD缺乏的健康儿童作对照，男8例，女7例，年龄10个月～11岁，平均5±4岁。(2)方法：每例佝偻病患儿肌内注射VD3 50万U，分2次，间隔5周。于治疗前后间隔7周2次抽静脉血测定：(1)25-OHD：用竞争蛋白结合法。(2)TNF-α：分离PBMC，经脂多糖(LPS)诱生12小时，收获培养上清，置-30℃冰箱保存集中测定。TNF-α测定用酶联免疫吸附方法(军事科学院试剂盒)。(3)血清免疫球蛋白：用散射比浊速率法。(4)血锌：用原子吸收法。所有数据用SPSS 6.0版统计软件处理，TNF-α经对数转换，采用配对t检验和成组t检验。
, 百拇医药
结果：1.临床观察：11例佝偻病患儿，根据佝偻病临床分度标准，2例属于中度，余皆为轻度患者，治疗后复查9例，佝偻病体征有不同程度的改善。
2.健康对照组分年龄及性别比较PBMC经LPS诱生后TNF-α水平。年龄分组示：<3岁组9例与>3岁组6例之间差异无显著意义[0.7(0.3～2.5)，1.3(0.9～2.5) ng/ml，P>0.05]；性别分组示：男8例，女7例，之间差异亦无显著意义[0.9(0.4～2.5)，1.8(0.3～2.5) ng/ml，P>0.05]。
3.治疗前后各项指标测定结果(表1)。佝偻病患儿治疗前与对照组(<3岁组)及治疗后的25-OHD水平比较，差异均有显著意义；治疗前后PBMC经LPS诱生TNF-α水平的变化：治疗前TNF-α值低于正常对照，治疗后TNF-α升高到正常儿水平，治疗前与正常对照比较差异有显著意义[0.4(0.3～0.7)，0.7(0.3～2.5) ng/ml，P<0.001]治疗前、后比较差异有显著意义[0.4(0.3～0.7)，0.8(0.5～2.0) ng/ml，P<0.05]。9例治疗前后配对比较差异有显著意义。治疗前后IgG、IgA、IgM水平无明显变化，与参考值比较无明显低下，治疗前后血锌均低于参考值。
, 百拇医药
表1 9例佝偻病患儿治疗前后25-OHD、TNF-α、IgA、IgG、IgM、Zn值及比较(
±s) 组别25-OHD(ng/ml)
TNF-α(ng/ml)
IgA
(g/L)
IgG
(g/L)
IgM
(g/L)
Zn
, 百拇医药
(μmol/L)
中位数
范围
对照
26.3±9.0
0.7
0.3～2.5
治疗前
16.6±2.1
0.4
0.3～0.7
0.92±0.25
11±5
, 百拇医药
1.5±0.4
8.1±1.5
治疗后
27.0±7.2
0.8
0.5～2.0
0.80±0.41
9±4
1.4±0.5
8.7±0.9
t值
5.72
3.87
, http://www.100md.com
-0.66
0.84
-0.20
0.37
P值
<0.001
<0.05
>0.05
>0.05
>0.05
>0.05
讨论：TNF是一类能直接造成肿瘤细胞死亡的细胞因子。根据其来源和结构的不同分为两种类型，即TNF-α和TNF-β。前者主要由巨噬细胞产生，LPS是诱导其产生的较强刺激剂；后者主要由活化T细胞产生。TNF-α在低浓度时可作为一种白细胞和内皮细胞的旁分泌和自分泌调节剂，对机体的作用为一种免疫生理过程。低浓度TNF-α的生物学活性主要表现为抗感染，引起炎症反应和抗肿瘤。本研究结果显示VD缺乏性佝偻病患儿其TNF-α的水平明显低下，经用VD治疗后当25-OHD恢复正常时，TNF-α水平亦明显升高，显示VD对其有调节作用。与动物及离体实验所观察到的VD缺乏可引起单核巨噬细胞细胞因子(IL-6、TNF、IL-1)产生减少，而将PBMC与1，25-OHD共育，细胞因子产生增加的结果一致。有报道VD缺乏导致巨噬细胞吞噬作用及趋化性下降，外源性给予IL-1、TNF能提高抗菌能力，单核巨噬细胞细胞因子IL-1、IL-6、TNF的分泌减少则削弱了其抗感染的免疫能力， 因此异常的吞噬细胞功能可能是VD缺乏性佝偻病患儿易于感染的原因。本研究中佝偻病患儿免疫球蛋白的水平无明显低下，与国内外的大多数报道一致。但本研究不能排除VD缺乏对抗原特异性抗体反应及IgG亚类的影响，迄今国内外尚无这两方面报道。本组患儿血锌低，与佝偻病患儿血锌低的报道一致。于治疗前后血锌无明显变化可排除其对本研究的影响。
(收稿：1997-07-18 修回：1998-05-21), 百拇医药