应用胃小球采取胃液用PCR方法诊断胃幽门螺杆菌感染
作者：王玉坤 栾佐 谢邦铁
单位：100045 首都儿科研究所(王玉坤)；海军总医院(栾佐、谢邦铁)
关键词：
中华儿科杂志990321 检测幽门螺杆菌(Hp)感染有多种方法，除13C-尿素呼气试验和血清检查抗体外，均为有创性检查，因而儿科应用受到很大限制。为此，我们应用胃小球取胃液经HpPCR诊断小儿Hp感染，获得满意效果。
对象及方法：1.对象：临床疑似Hp感染的门诊患儿33例，年龄5岁～10岁；男18人次，女15人次。患儿受检前禁用抗生素1周，禁食12小时。
2.方法：所有患儿分别先后进行胃小球采取胃液和胃镜活检胃粘膜检测Hp。(1)胃小球法：胃小球呈多层网状结构，顶端有系线相连，压缩装入1.1×0.3 cm的胶囊中，再包裹两层胶囊，以减少污染和受潮。检查前弃去外两层胶囊，展开系线。测量剑突至鼻尖至耳垂的距离并将系线打结，以标记口至幽门的距离。令患儿吞咽胶囊，必要时温开水(<30 ml)送服，至系线打结位于门齿为准。留置半小时后提出，以无菌镊助提。置入4 ml、4℃生理盐水的无菌瓶中送检。HpPCR药盒由北京医科大学人民医院引航医学生物技术研究所提供。该试剂盒选用一对引物以Hp染色体1.9 kb片断为靶基因。该引物对Hp特异，而对空肠弯曲菌无交叉反应。扩增产物全长应是203 bp，出现此特异性条带即可定为阳性结果。(2)胃镜检查法：常规胃镜检查，留取胃窦粘膜2块，14例做WS染色，19例做快速尿素酶试验。尿素酶测试纸由福建三强生物化工有限公司生产。
, http://www.100md.com
结果：胃小球胃液HpPCR阳性25例，阴性8例。胃镜粘膜组织学Hp检测阳性19例，阴性14例。符合率81.8%。一致性χ2=11.429，P<0.001，校正卡方统计χc=4.160，P<0.05。胃小球胃液HpPCR与胃粘膜WS染色符合率75%。与胃粘膜快速尿素酶试验符合率100%。HpPCR检测结果见表1。
表1 HpPCR检测结果 胃液HpPCR
胃粘膜
合计
快速尿素酶
(+)
WS染色
(-)
, 百拇医药
+
19
6
25
-
0
8
8
合计
19
14
33
讨论：1.小儿胃Hp感染诊断方法分两类：第一类为无创性，即13C-尿素呼气试验和血清学检查。前者检查仪器昂贵，检测费用大，难以普及[1]。血清抗体检测，简便易行，但对现行感染，尤其是抗Hp疗效观察的价值尚有争议[2]；第二类为有创性检查：均为胃镜粘膜组织学检查。特异性和敏感性都好，但胃镜检查小儿难以接受和普及。为此，我们改制成人胃细胞采取球自行设计了小儿规格的胃小球。经胃小球采取胃液进行HpPCR检测，并选择了胃镜胃粘膜组织学检测方法中，WS染色和快速尿素酶试验作为对照。结果表明，胃小球胃液HpPCR与胃粘膜组织学检测一致性χ2检验P<0.001。胃小球HpPCR与胃粘膜快速尿素酶试验诊断Hp感染，阳性率及阴性率完全一致。胃小球胃液HpPCR和胃粘膜快速尿素酶结果阳性，而胃粘膜WS染色阴性，原因可能有：(1)Hp感染呈斑点状分布，粘膜活检有漏取的可能；(2)组织切片有漏切或漏看的可能，所以有资料表明胃粘膜WS染色Hp敏感性偏低。这类患儿经抗Hp治疗后消化道症状消失，提示胃小球胃液HpPCR的敏感度优于胃粘膜WS染色检查。
, 百拇医药
2.Hp感染定居于胃粘膜下，有人认为胃液中Hp检出率十分低，即使检出，由于Hp可在口腔中寄生，胃液检出Hp亦不表明胃粘膜Hp感染。本研究表明胃小球HpPCR敏感性及特异性与胃粘膜快速尿素酶完全一致。国内亦有报道胃镜取胃粘膜与胃镜取胃液进行HpPCR检测，结果也相一致[3]。本研究采用胃小球取胃液，该小球吞噬后在胃部膨胀，体积增大4～5倍，滞留于幽门部。利用球体各层网状结构滤过胃液。加之Hp表面菌毛样结构和粘着素的高度粘附性，使Hp易于被捕捉，大大提高了胃液HpPCR检出率。该法具有以下优点：(1)为非创性检查，敏感性高，特异性强。(2)安全，简便，儿童易接受，可重复性强，在医院内、外均可使用。(3)PCR检测技术比较普及，收费适中，易于推广。
参考文献
1 伏胡莲，周殿元，贾博琦，主编.幽门螺杆菌感染的基础与临床.北京：中国科学技术出版社，1997.272.
2 伏胡莲，周殿元，贾博琦，主编.幽门螺杆菌感染的基础与临床.北京：中国科学技术出版社，1997.273.
3 徐晓华，刘凤霖，陈悦，等.应用聚合酶链反应检测胃液诊断幽门螺杆菌感染，中华儿科杂志，1997，35：124.
(收稿：1998-07-10 修回：1998-11-09), 百拇医药
单位：100045 首都儿科研究所(王玉坤)；海军总医院(栾佐、谢邦铁)
关键词：
中华儿科杂志990321 检测幽门螺杆菌(Hp)感染有多种方法，除13C-尿素呼气试验和血清检查抗体外，均为有创性检查，因而儿科应用受到很大限制。为此，我们应用胃小球取胃液经HpPCR诊断小儿Hp感染，获得满意效果。
对象及方法：1.对象：临床疑似Hp感染的门诊患儿33例，年龄5岁～10岁；男18人次，女15人次。患儿受检前禁用抗生素1周，禁食12小时。
2.方法：所有患儿分别先后进行胃小球采取胃液和胃镜活检胃粘膜检测Hp。(1)胃小球法：胃小球呈多层网状结构，顶端有系线相连，压缩装入1.1×0.3 cm的胶囊中，再包裹两层胶囊，以减少污染和受潮。检查前弃去外两层胶囊，展开系线。测量剑突至鼻尖至耳垂的距离并将系线打结，以标记口至幽门的距离。令患儿吞咽胶囊，必要时温开水(<30 ml)送服，至系线打结位于门齿为准。留置半小时后提出，以无菌镊助提。置入4 ml、4℃生理盐水的无菌瓶中送检。HpPCR药盒由北京医科大学人民医院引航医学生物技术研究所提供。该试剂盒选用一对引物以Hp染色体1.9 kb片断为靶基因。该引物对Hp特异，而对空肠弯曲菌无交叉反应。扩增产物全长应是203 bp，出现此特异性条带即可定为阳性结果。(2)胃镜检查法：常规胃镜检查，留取胃窦粘膜2块，14例做WS染色，19例做快速尿素酶试验。尿素酶测试纸由福建三强生物化工有限公司生产。
, http://www.100md.com
结果：胃小球胃液HpPCR阳性25例，阴性8例。胃镜粘膜组织学Hp检测阳性19例，阴性14例。符合率81.8%。一致性χ2=11.429，P<0.001，校正卡方统计χc=4.160，P<0.05。胃小球胃液HpPCR与胃粘膜WS染色符合率75%。与胃粘膜快速尿素酶试验符合率100%。HpPCR检测结果见表1。
表1 HpPCR检测结果 胃液HpPCR
胃粘膜
合计
快速尿素酶
(+)
WS染色
(-)
, 百拇医药
+
19
6
25
-
0
8
8
合计
19
14
33
讨论：1.小儿胃Hp感染诊断方法分两类：第一类为无创性，即13C-尿素呼气试验和血清学检查。前者检查仪器昂贵，检测费用大，难以普及[1]。血清抗体检测，简便易行，但对现行感染，尤其是抗Hp疗效观察的价值尚有争议[2]；第二类为有创性检查：均为胃镜粘膜组织学检查。特异性和敏感性都好，但胃镜检查小儿难以接受和普及。为此，我们改制成人胃细胞采取球自行设计了小儿规格的胃小球。经胃小球采取胃液进行HpPCR检测，并选择了胃镜胃粘膜组织学检测方法中，WS染色和快速尿素酶试验作为对照。结果表明，胃小球胃液HpPCR与胃粘膜组织学检测一致性χ2检验P<0.001。胃小球HpPCR与胃粘膜快速尿素酶试验诊断Hp感染，阳性率及阴性率完全一致。胃小球胃液HpPCR和胃粘膜快速尿素酶结果阳性，而胃粘膜WS染色阴性，原因可能有：(1)Hp感染呈斑点状分布，粘膜活检有漏取的可能；(2)组织切片有漏切或漏看的可能，所以有资料表明胃粘膜WS染色Hp敏感性偏低。这类患儿经抗Hp治疗后消化道症状消失，提示胃小球胃液HpPCR的敏感度优于胃粘膜WS染色检查。
, 百拇医药
2.Hp感染定居于胃粘膜下，有人认为胃液中Hp检出率十分低，即使检出，由于Hp可在口腔中寄生，胃液检出Hp亦不表明胃粘膜Hp感染。本研究表明胃小球HpPCR敏感性及特异性与胃粘膜快速尿素酶完全一致。国内亦有报道胃镜取胃粘膜与胃镜取胃液进行HpPCR检测，结果也相一致[3]。本研究采用胃小球取胃液，该小球吞噬后在胃部膨胀，体积增大4～5倍，滞留于幽门部。利用球体各层网状结构滤过胃液。加之Hp表面菌毛样结构和粘着素的高度粘附性，使Hp易于被捕捉，大大提高了胃液HpPCR检出率。该法具有以下优点：(1)为非创性检查，敏感性高，特异性强。(2)安全，简便，儿童易接受，可重复性强，在医院内、外均可使用。(3)PCR检测技术比较普及，收费适中，易于推广。
参考文献
1 伏胡莲，周殿元，贾博琦，主编.幽门螺杆菌感染的基础与临床.北京：中国科学技术出版社，1997.272.
2 伏胡莲，周殿元，贾博琦，主编.幽门螺杆菌感染的基础与临床.北京：中国科学技术出版社，1997.273.
3 徐晓华，刘凤霖，陈悦，等.应用聚合酶链反应检测胃液诊断幽门螺杆菌感染，中华儿科杂志，1997，35：124.
(收稿：1998-07-10 修回：1998-11-09), 百拇医药