人类白细胞抗原与儿童郎格罕组织细胞增生症关联的研究
作者：关晓蕾 杨启生 秋季南 沈晶晶孙璐 黄若君 赵新民 江载芳 孙逸平
单位：100045 首都医科大学附属北京儿童医院儿科研究所(关晓蕾、杨启生、秋季南、沈晶晶、孙璐、黄若君、江载芳)，内科(赵新民)；中日友好医院(孙逸平)
关键词：HLA抗原；细胞毒性实验；免疫；组织细胞增生症；郎格尔汉斯细胞
中华儿科杂志990504 【摘要】 目的 探讨郎格罕组织细胞增生症是否与免疫遗传学有关。方法 采用国际标准人类白细胞抗原(HLA)抗血清和国际标准微量淋巴细胞毒试验方法，对北京地区经北京儿童医院确诊的48例年龄为2.5～15岁的朗格罕组织细胞增生症患儿进行了HLA-A、HLA-B、HLA-DR抗原检测，并以100例北京健康成人作为对照组进行分析。结果 本病患儿呈显著性增高的抗原有HLA-DR3(RR=7.46、Pc<0.01)和HLA-B40(RR=3.44、Pc<0.04)，提示它们可能为易感基因。而HLA-B35(RR=0.07、Pc<0.01)在患儿组呈显著性减少，另一个下降的抗原是HLA-DR9(RR=0.28，Pc<0.04)。结论HLA与朗格罕组织细胞增生症的发病有一定关系，这为本病与免疫遗传关系的研究提供了线索。
, 百拇医药
HLA with Langerhans cell histocytosis (LCH) in Children GUAN Xiaolei, YANG Qisheng, QIU Jinan, et al. Beijing Research Institute of Pediatrics, Beijing 100045
【Abstract】 Objective Typing for HLA class Ⅰ and class Ⅱ antigens for childhood patients with Langerhans cell histocytosis LCH to determine if there is any relation between LCH and immunogenetic factors. methods Forty eight patients with LCH, aged 2.5 to 15.0 years, diagnosed in Beijing Children′s Hospital, and one hundred normal adults as the controls were included in this study. International standard HLA antisera and microcytotoxicity method were used. Results Two antigens, HLA-DR3 (RR=7.46, Pc<0.01) and HLA-B40 (RR=3.34, Pc<0.04) were increased significantly in LCH patients, which indicated that they might be susceptible to the disease, while HLA-B35 (RR=0.07, Pc<0.01) and DR9 (RR=0.28, Pc<0.04) were decreased, which suggesting that they might be the protective genes. Conclusion Immunogenetics alleles promoted by unknown environment factors play a role in initiating the disease. This finding might provide some clues for further research in terms of the pathogenesis of LCH in children.
, http://www.100md.com
【Key words】 HLA anligens Cytotoxicity tests, immunologic Histocytosis, langerhans cell
朗格罕组织细胞增生症曾被命名为组织细胞增生症X，是一组原因不明的免疫性疾病。目前多认为是一种非肿瘤性的朗格罕细胞(LC)异常增生，此种增生可能是由于内源性或外源性刺激导致免疫调节功能紊乱所致。患者常伴有胸腺发育缺陷，没有胸腺小体，且周围淋巴组织生发中心缺如，这与某些免疫缺陷综合征有相似之处[1]。由于病因不明，又存在免疫反应的异常，因此在寻找它的内外致病因素时，人类白细胞抗原(HLA)可能成为一个用于探索性研究的指标。故此我们对北方地区48例朗格罕组织细胞增生症患儿进行了人类白细胞一类抗原(HLA-A、B)及二类抗原(HLA-DR)的关联研究。
对象及方法
一、研究对象
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48例在北京儿童医院血液专业门诊确诊为朗格罕组织细胞增生症的患儿，男30例，女18例；发病年龄2.5岁～15岁；对照组为100例北方健康成人。
二、方法
采用国际标准补体依赖性微量淋巴细胞毒试验方法，检测HLA-A、B、DR抗原。HLA血清由第11届HLA国际会议提供。可供鉴定的型别包括HLA-A位点14型，B位点24型，DR位点12型，所覆盖的抗原较为完全。用10 ml肝素抗凝静脉血顺淋巴细胞分层液密度梯度分离出淋巴细胞，再经尼龙毛柱分离T、B细胞。T细胞用于HLA-I类抗原分型，1×106个细胞/μl与血清盘中的抗体在室温条件下进行反应，30分钟后加补体5 μl，1小时后加伊红染色甲醛固定。在倒置相差显微镜下观察其细胞死亡程度。HLA-Ⅱ类抗原用B细胞实验，除补体孵育条件改为1小时外，其它条件均相同。
三、统计学分析
, 百拇医药
采用相对风险(RR)和校正P值(Pc)判定显著性[2]。校正P值计算为确切P值和所检出抗原的乘积。本研究中HLA-A坐位系数为8，B坐位为19，DR坐位为9。
结 果
全部被检出的抗原共36种，包括：HLA-A1、A2、A3、A9、A10、A11、A19、A28、B5、B7、B8、B12、B13、B14、B15、B16、B17、B22、B27、B35、B37、B40、B41、B42、B46、B48、B59、DR1、DR2、DR3、DR4、DR5、DR6、DR7、DR8、DR9。对照组使用了同一地区的成人，其原因除难于获得同年龄的正常儿童HLA分型外，还因为在过去大量的国内外HLA群体研究中未发现HLA的抗原频率分布与年龄、性别有关，也未发现HLA与寿命有关[3]。表1内仅列出差异有显著意义的几种抗原。从中可见与朗格罕组织细胞增生症相关的抗原有HLA-B40、B35和DR3及DR9。其中HLA-B40的相对风险RR为3.44、Pc<0.04；HLA-DR3的相对风险RR为7.46、Pc<0.01，差异均有显著意义，构成本病的风险。A11的相对风险RR为2.69、Pc<0.09，虽无显著性，但接近于临界值。HLA-B35的抗原频率明显低于对照组，RR=0.07、Pc<0.01。DR9在患儿组的频率也呈下降的趋势，其中RR=0.28，Pc<0.04。其他所有抗原中均未发现有差异性。
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表1 与郎格罕组织细胞增生症有关联的5种HLA抗原 HLA
抗原
患儿组(n=48)
对照组(n=100)
RR值
Pc值
相关系数
r值
两组比较
χ2值
阳性数
阳性率(%)
, 百拇医药
阳性数
阳性率(%)
DR3
9
18.8
3
3.0
7.46
0.01
0.270
(8.788)*
B40
19
, 百拇医药
39.6
16
16.0
3.44
0.04
0.260
9.989*
A11
20
41.7
21
21.0
2.69
, 百拇医药
0.09
0.216
6.917*
B35
0
0
21
21.0
0.07
0.01
-0.282
1.229×10-4**
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DR9
7
14.6
38
38.0
0.28
0.04
-0.238
8.406*
注：括号中为校正χ2值；* P<0.01；**为精确检验P值
讨 论
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朗格罕组织细胞增多症是一种少见的儿科病，病因不明，主要为朗格罕细胞在某些组织中异常增生。临床表现包括肝、脾、淋巴结肿大，皮疹，咳嗽，头颅肿物，尿崩症，突眼等。有时尚有骨痛、口腔肿物和神经系统症状。本病治疗难度大，预后不良。近年在我院发现有增多的趋势，究其原因，一方面由于诊断水平的提高，能发现原来发现不了的患儿，另一方面也不能排除与环境因素的恶化有关。由于本病原因不明，有必要从各种可能的角度来研究。考虑本病有免疫异常的因素，其根据有：T4细胞减少，血清IgG、IgM异常；CD4/CD8细胞比例降低等[4]。另外也应考虑遗传因子的影响，因为曾发现在一个家族中2例男婴患本病夭折而3例女婴无恙的事实[4]。这提示有遗传因素在某种不明的环境因子的促进下启动了本病。另外，近年来国外也已注意到组织相容性抗原与本病的关系，在英国曾报道与HLA-B7相关[5]。
我们发现HLA-B40和HLA-DR3的抗原(基因)频率在患儿组中呈显著增高，疾病组达18.8%，具有发病的风险，而对照组仅占3.0%。其中值得注意的是HLA-DR3偏离正常甚大，这不可能是偶然的，且DR3是中国人少见抗原。另外，DR3为一种与自身免疫病有关联的抗原(基因)，Ⅰ型糖尿病、红斑狼疮等多种自身免疫疾病有关。本病与DR3有关，说明和免疫异常的关系密切。我们认为HLA-B40与本病相关的意义比较次要。首先因为B40是中国人一个很常见的抗原，约占正常人的16.0%～20.0%，并未发现它是一个重要的与疾病相关的抗原。虽然B40在本研究的疾病组和对照组分别为39.6%和16.0%，RR=3.44，差异有显著意义，但我们认为它应较DR3为次，风险相对较小，故其意义需要有更多的病例进一步肯定。同时，我们认为B40即使有作用也与DR3无关，而是相对独立的。因为对中国人的大量群体研究证明，B40和DR3并不存在连锁不平衡现象。A11与本病也显示出一定程度的相关，经P值校正后处于临界，故其确切意义不明确。
, 百拇医药
HLA-B35的抗原频率显著性减低。曾有报道B35使获得性免疫缺陷综合征(爱滋病，AIDS)的进程加快[6]，故此抗原可能涉及与病毒有关的疾病。另一个下降的抗原是DR9(RR=0.28，Pc<0.04)。DR9是中国人一个常见的抗原，曾有报道与胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)有一定的关系，可能涉及免疫反应异常，是中国和日本人所特有的现象[7]。
我们认为，在HLA分子在免疫反应中起提呈作用的机制日益明确的情况下，对某些原因不明的疾病做传统的HLA关联研究仍是有意义的。这能显示疾病存在免疫的异常性，从而提示免疫的失衡可能是一个病因。在表1中可以看到用相关系数r表示时，HLA抗原(基因)和疾病的相关是低的。而是受环境因素影响的。HLA是否与疾病类型及临床症状有关，值得进一步研究。
参考文献
1 邓家栋，主编.临床血液学.上海：上海科学技术出版社，1985.820-828.
, 百拇医药
2 赵桐茂，主编.HLA分型原理和应用.上海：上海科学技术出版社，1984.208-222.
3 Tiwari JI, Terasaki PI. HLA and disease associations. New York: Springer-Verlage, 1985. 445-446.
4 赵新民，胡亚美，邹道韫，等.郎格罕细胞组织细胞增生症临床和实验研究.中华儿科杂志，1993，31：266-268.
5 Yu RC, Chu AC. Langerhans cell histiocytosis-clinicopathological reappraisal and human leucocyte antigen association. Br J Dermatol, 1996, 135:36-41.
6 Sahmoud T, Laurian Y, Gazengel C, et al. Progression to AIDS in French haemophiliacs: association with HLA-B35. AIDS, 1993, 7:497-500.
7 Ju L Y, Sun Y P, Semana G, et al. Aspartic acid at position 57 of the HLA-DQ beta chain in insulin-dependent diabetes mellitus: an association with one DRw9-DQw9 subtype in the Chinese population. Tissue Antigens, 1991, 37: 218-223.
(收稿：1998-02-26 修回：1998-07-30), 百拇医药
单位：100045 首都医科大学附属北京儿童医院儿科研究所(关晓蕾、杨启生、秋季南、沈晶晶、孙璐、黄若君、江载芳)，内科(赵新民)；中日友好医院(孙逸平)
关键词：HLA抗原；细胞毒性实验；免疫；组织细胞增生症；郎格尔汉斯细胞
中华儿科杂志990504 【摘要】 目的 探讨郎格罕组织细胞增生症是否与免疫遗传学有关。方法 采用国际标准人类白细胞抗原(HLA)抗血清和国际标准微量淋巴细胞毒试验方法，对北京地区经北京儿童医院确诊的48例年龄为2.5～15岁的朗格罕组织细胞增生症患儿进行了HLA-A、HLA-B、HLA-DR抗原检测，并以100例北京健康成人作为对照组进行分析。结果 本病患儿呈显著性增高的抗原有HLA-DR3(RR=7.46、Pc<0.01)和HLA-B40(RR=3.44、Pc<0.04)，提示它们可能为易感基因。而HLA-B35(RR=0.07、Pc<0.01)在患儿组呈显著性减少，另一个下降的抗原是HLA-DR9(RR=0.28，Pc<0.04)。结论HLA与朗格罕组织细胞增生症的发病有一定关系，这为本病与免疫遗传关系的研究提供了线索。
, 百拇医药
HLA with Langerhans cell histocytosis (LCH) in Children GUAN Xiaolei, YANG Qisheng, QIU Jinan, et al. Beijing Research Institute of Pediatrics, Beijing 100045
【Abstract】 Objective Typing for HLA class Ⅰ and class Ⅱ antigens for childhood patients with Langerhans cell histocytosis LCH to determine if there is any relation between LCH and immunogenetic factors. methods Forty eight patients with LCH, aged 2.5 to 15.0 years, diagnosed in Beijing Children′s Hospital, and one hundred normal adults as the controls were included in this study. International standard HLA antisera and microcytotoxicity method were used. Results Two antigens, HLA-DR3 (RR=7.46, Pc<0.01) and HLA-B40 (RR=3.34, Pc<0.04) were increased significantly in LCH patients, which indicated that they might be susceptible to the disease, while HLA-B35 (RR=0.07, Pc<0.01) and DR9 (RR=0.28, Pc<0.04) were decreased, which suggesting that they might be the protective genes. Conclusion Immunogenetics alleles promoted by unknown environment factors play a role in initiating the disease. This finding might provide some clues for further research in terms of the pathogenesis of LCH in children.
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【Key words】 HLA anligens Cytotoxicity tests, immunologic Histocytosis, langerhans cell
朗格罕组织细胞增生症曾被命名为组织细胞增生症X，是一组原因不明的免疫性疾病。目前多认为是一种非肿瘤性的朗格罕细胞(LC)异常增生，此种增生可能是由于内源性或外源性刺激导致免疫调节功能紊乱所致。患者常伴有胸腺发育缺陷，没有胸腺小体，且周围淋巴组织生发中心缺如，这与某些免疫缺陷综合征有相似之处[1]。由于病因不明，又存在免疫反应的异常，因此在寻找它的内外致病因素时，人类白细胞抗原(HLA)可能成为一个用于探索性研究的指标。故此我们对北方地区48例朗格罕组织细胞增生症患儿进行了人类白细胞一类抗原(HLA-A、B)及二类抗原(HLA-DR)的关联研究。
对象及方法
一、研究对象
, http://www.100md.com
48例在北京儿童医院血液专业门诊确诊为朗格罕组织细胞增生症的患儿，男30例，女18例；发病年龄2.5岁～15岁；对照组为100例北方健康成人。
二、方法
采用国际标准补体依赖性微量淋巴细胞毒试验方法，检测HLA-A、B、DR抗原。HLA血清由第11届HLA国际会议提供。可供鉴定的型别包括HLA-A位点14型，B位点24型，DR位点12型，所覆盖的抗原较为完全。用10 ml肝素抗凝静脉血顺淋巴细胞分层液密度梯度分离出淋巴细胞，再经尼龙毛柱分离T、B细胞。T细胞用于HLA-I类抗原分型，1×106个细胞/μl与血清盘中的抗体在室温条件下进行反应，30分钟后加补体5 μl，1小时后加伊红染色甲醛固定。在倒置相差显微镜下观察其细胞死亡程度。HLA-Ⅱ类抗原用B细胞实验，除补体孵育条件改为1小时外，其它条件均相同。
三、统计学分析
, 百拇医药
采用相对风险(RR)和校正P值(Pc)判定显著性[2]。校正P值计算为确切P值和所检出抗原的乘积。本研究中HLA-A坐位系数为8，B坐位为19，DR坐位为9。
结 果
全部被检出的抗原共36种，包括：HLA-A1、A2、A3、A9、A10、A11、A19、A28、B5、B7、B8、B12、B13、B14、B15、B16、B17、B22、B27、B35、B37、B40、B41、B42、B46、B48、B59、DR1、DR2、DR3、DR4、DR5、DR6、DR7、DR8、DR9。对照组使用了同一地区的成人，其原因除难于获得同年龄的正常儿童HLA分型外，还因为在过去大量的国内外HLA群体研究中未发现HLA的抗原频率分布与年龄、性别有关，也未发现HLA与寿命有关[3]。表1内仅列出差异有显著意义的几种抗原。从中可见与朗格罕组织细胞增生症相关的抗原有HLA-B40、B35和DR3及DR9。其中HLA-B40的相对风险RR为3.44、Pc<0.04；HLA-DR3的相对风险RR为7.46、Pc<0.01，差异均有显著意义，构成本病的风险。A11的相对风险RR为2.69、Pc<0.09，虽无显著性，但接近于临界值。HLA-B35的抗原频率明显低于对照组，RR=0.07、Pc<0.01。DR9在患儿组的频率也呈下降的趋势，其中RR=0.28，Pc<0.04。其他所有抗原中均未发现有差异性。
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表1 与郎格罕组织细胞增生症有关联的5种HLA抗原 HLA
抗原
患儿组(n=48)
对照组(n=100)
RR值
Pc值
相关系数
r值
两组比较
χ2值
阳性数
阳性率(%)
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阳性数
阳性率(%)
DR3
9
18.8
3
3.0
7.46
0.01
0.270
(8.788)*
B40
19
, 百拇医药
39.6
16
16.0
3.44
0.04
0.260
9.989*
A11
20
41.7
21
21.0
2.69
, 百拇医药
0.09
0.216
6.917*
B35
0
0
21
21.0
0.07
0.01
-0.282
1.229×10-4**
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DR9
7
14.6
38
38.0
0.28
0.04
-0.238
8.406*
注：括号中为校正χ2值；* P<0.01；**为精确检验P值
讨 论
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朗格罕组织细胞增多症是一种少见的儿科病，病因不明，主要为朗格罕细胞在某些组织中异常增生。临床表现包括肝、脾、淋巴结肿大，皮疹，咳嗽，头颅肿物，尿崩症，突眼等。有时尚有骨痛、口腔肿物和神经系统症状。本病治疗难度大，预后不良。近年在我院发现有增多的趋势，究其原因，一方面由于诊断水平的提高，能发现原来发现不了的患儿，另一方面也不能排除与环境因素的恶化有关。由于本病原因不明，有必要从各种可能的角度来研究。考虑本病有免疫异常的因素，其根据有：T4细胞减少，血清IgG、IgM异常；CD4/CD8细胞比例降低等[4]。另外也应考虑遗传因子的影响，因为曾发现在一个家族中2例男婴患本病夭折而3例女婴无恙的事实[4]。这提示有遗传因素在某种不明的环境因子的促进下启动了本病。另外，近年来国外也已注意到组织相容性抗原与本病的关系，在英国曾报道与HLA-B7相关[5]。
我们发现HLA-B40和HLA-DR3的抗原(基因)频率在患儿组中呈显著增高，疾病组达18.8%，具有发病的风险，而对照组仅占3.0%。其中值得注意的是HLA-DR3偏离正常甚大，这不可能是偶然的，且DR3是中国人少见抗原。另外，DR3为一种与自身免疫病有关联的抗原(基因)，Ⅰ型糖尿病、红斑狼疮等多种自身免疫疾病有关。本病与DR3有关，说明和免疫异常的关系密切。我们认为HLA-B40与本病相关的意义比较次要。首先因为B40是中国人一个很常见的抗原，约占正常人的16.0%～20.0%，并未发现它是一个重要的与疾病相关的抗原。虽然B40在本研究的疾病组和对照组分别为39.6%和16.0%，RR=3.44，差异有显著意义，但我们认为它应较DR3为次，风险相对较小，故其意义需要有更多的病例进一步肯定。同时，我们认为B40即使有作用也与DR3无关，而是相对独立的。因为对中国人的大量群体研究证明，B40和DR3并不存在连锁不平衡现象。A11与本病也显示出一定程度的相关，经P值校正后处于临界，故其确切意义不明确。
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HLA-B35的抗原频率显著性减低。曾有报道B35使获得性免疫缺陷综合征(爱滋病，AIDS)的进程加快[6]，故此抗原可能涉及与病毒有关的疾病。另一个下降的抗原是DR9(RR=0.28，Pc<0.04)。DR9是中国人一个常见的抗原，曾有报道与胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)有一定的关系，可能涉及免疫反应异常，是中国和日本人所特有的现象[7]。
我们认为，在HLA分子在免疫反应中起提呈作用的机制日益明确的情况下，对某些原因不明的疾病做传统的HLA关联研究仍是有意义的。这能显示疾病存在免疫的异常性，从而提示免疫的失衡可能是一个病因。在表1中可以看到用相关系数r表示时，HLA抗原(基因)和疾病的相关是低的。而是受环境因素影响的。HLA是否与疾病类型及临床症状有关，值得进一步研究。
参考文献
1 邓家栋，主编.临床血液学.上海：上海科学技术出版社，1985.820-828.
, 百拇医药
2 赵桐茂，主编.HLA分型原理和应用.上海：上海科学技术出版社，1984.208-222.
3 Tiwari JI, Terasaki PI. HLA and disease associations. New York: Springer-Verlage, 1985. 445-446.
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7 Ju L Y, Sun Y P, Semana G, et al. Aspartic acid at position 57 of the HLA-DQ beta chain in insulin-dependent diabetes mellitus: an association with one DRw9-DQw9 subtype in the Chinese population. Tissue Antigens, 1991, 37: 218-223.
(收稿：1998-02-26 修回：1998-07-30), 百拇医药