泼尼松对肾病综合征患儿成骨细胞功能的影响
作者：戎赞华 张会丰 田秀巧 安秀书 刘岩平
单位：戎赞华(河北医科大学第二医院儿科 050000)；张会丰(河北医科大学第二医院儿科 050000)；田秀巧(河北医科大学第二医院儿科 050000)；安秀书(河北医科大学第二医院儿科 050000)；刘岩平(河北医科大学第二医院儿科 050000)
关键词：
中华儿科杂志000517 糖皮质激素是肾病综合征治疗的首选药物。众所周知，糖皮质激素对骨代谢有负性影响，可导致骨质疏松。近年来的研究认为,血清骨钙蛋白是敏感、特异、准确反映机体成骨细胞功能的指标。我们选择了反映成骨细胞活性的血清骨钙蛋白作为研究指标，辅以传统的反映成骨细胞活性的血清碱性磷酸酶(AKP)，研究药理剂量的泼尼松对肾病综合征患儿成骨细胞功能的影响。
对象
, http://www.100md.com
1997年8月～1998年12月，在我院儿科住院及门诊随访的肾病综合征患儿58例，男36例，女22例；年龄2～14岁，平均7.5岁。激素治疗前组：26例。 24 h尿蛋白定量为1.2～ 6.8 g/24h，平均3.0 g/24h。激素足量治疗组：32例。泼尼松2 mg/(kg。d)，治疗4～6周，尿蛋白转阴，尿量恢复正常。肾病综合征的诊断标准符合1981年全国小儿肾脏病协作组制定的标准。以上患儿肾功能均正常，肌酐清除率在正常范围。对照组：34例，男20例，女14例；年龄3～14岁，平均8.3岁。为住院的心肌炎、病毒性脑炎患儿及门诊健康体检的儿童，无肝、肾功能异常及内分泌、钙、磷代谢紊乱性疾病，近半年未使用钙剂、维生素D制剂，无应用糖皮质激素史。
方法
1.标本采集：由专门医护人员采集受检儿童清晨空腹静脉血6 ml，分为3管。其中两管分别测定血清钙、磷和AKP。拟测血清骨钙蛋白的标本，室温放置3 h，待血液充分凝固后，以3 500 r/min 的速度离心10 min，分离血清，-20℃冰箱冰冻保存待测。
, http://www.100md.com
2.标本测定：(1)血清骨钙蛋白浓度测定：采用竞争放射免疫分析法，由中国原子能科学研究院同位素研究所提供试剂盒，仪器为中国北京核仪器厂生产的FT-630G放免分析仪。 (2)血清AKP测定：采用金氏法，用上海第三分析仪器厂生产的721分光光度计测定。
3.统计学分析：所有结果用均值±标准误表示，采用双侧 t检验。如方差不齐，则采用秩和检验，同时采用直线相关分析。 以上结果均采用STATA统计软件包进行统计分析。
结果
1.肾病综合征患儿激素治疗前血清骨钙蛋白含量为(13.9 ±1.6) μg/L，与对照组[(23.4 ±2.4 ) μg/L]相比差异有显著意义(P<0.05)；而血清AKP 在治疗前为(0.28±0.03) μmol/(s。L)，对照组为(0.30±0.03) μmol/(s。L)，两组差异无显著意义(P>0.05)。
, http://www.100md.com
2.肾病综合征患儿激素足量治疗组血清骨钙蛋白为 (3.7 ±0.6 ) μg/L，AKP为(0.13±0.02) μmol/(s。L)，与治疗前组相比差异均有显著意义(P<0.05)。血清骨钙蛋白水平与血清AKP水平相关系数为0.34，P<0.05，呈显著正相关。
讨论
随着基础医学研究的进展，发现了反映成骨细胞功能的新的生化标志物——血清骨钙蛋白[1，2]，使我们了解体内成骨细胞的功能状况成为可能。骨钙蛋白仅由成骨细胞合成和分泌，是成骨细胞特异性产物，除骨组织外，其他组织中未发现骨钙蛋白。成骨细胞合成的骨钙蛋白大约有20%释放入血，血清中的骨钙蛋白水平与成骨细胞合成的骨钙蛋白总量成正相关。血清AKP是传统的反映成骨细胞功能的生化指标。本研究比较了肾病综合征患儿激素治疗前和激素足量治疗4～6周时成骨细胞的功能状况。
分子生物学研究认为，糖皮质激素直接抑制原始骨细胞增生，抑制成骨细胞的活性，使骨再建单位减少[3]。有研究显示糖皮质激素在mRNA水平抑制了成骨细胞中骨钙蛋白的转录[4]。我们观察到肾病综合征患儿应用泼尼松足量治疗4～6周后，血清骨钙蛋白和血清碱性磷酸酶同时降低，二者呈正相关。作为反映成骨细胞功能活性的指标，血清骨钙蛋白和碱性磷酸酶同时降低，表明成骨细胞的功能活性受到显著抑制，我们的研究符合分子生物学的研究结论。通过对血清骨钙蛋白水平检测，结合离体的细胞生物学和分子生物学的研究结论，使我们对肾病综合征患儿糖皮质激素所致的骨代谢异常有了深入了解。生理情况下，成骨细胞合成一定量的胶原蛋白和非胶原蛋白，非胶原蛋白中的主要成份骨钙蛋白能与钙离子结合，使骨基质发生矿化。骨胶原维持骨的强度，与钙离子结合的骨钙蛋白维持骨的硬度，保持骨组织结构、功能的正常。当应用大剂量的糖皮质激素后，成骨细胞合成的胶原和骨钙蛋白减少，骨的矿化下降，骨的强度和硬度均下降，出现为骨质疏松。
, http://www.100md.com
检测结果表明，血清骨钙蛋白较碱性磷酸酶更敏感、特异。因此，血清骨钙蛋白应作为常规指标引入儿科肾病综合征的治疗观察中，通过对骨钙蛋白的动态监测，可早期了解患儿的骨代谢状况，合理用药，预防骨质疏松的发生。
参考文献
1，Lian JB, Gundberg CM. Osteocalcin biochemical considerations and clinical applications. Clin Orthop，1988，1:267-291.
2，Dohi Y, Ohgushi H, Tabata S, et al. Osteogenesis associated with bone gla protein gene expression in diffusion chambres by bone marrow cells with demineralized bone matrix.J Bone Mineral Res，1992，7:1173-1180.
, 百拇医药
3，Reid IR. Pathogenesis and treatment of steroid osteoporosis. Clin Endocrinol，1989，30:83-103.
4，Neilsen HK, Thomsen K, Eriksen EF, et al. The effects of high-dose glucocorticoid administration on serum bone gamma-carboxyglutamic acid-containing protein, serum alkaline phosphatase and vitamin D metabolites in normal subjects. Bone Mineral， 1988，4:105-113.
(收稿日期：1999-08-23), http://www.100md.com
单位：戎赞华(河北医科大学第二医院儿科 050000)；张会丰(河北医科大学第二医院儿科 050000)；田秀巧(河北医科大学第二医院儿科 050000)；安秀书(河北医科大学第二医院儿科 050000)；刘岩平(河北医科大学第二医院儿科 050000)
关键词：
中华儿科杂志000517 糖皮质激素是肾病综合征治疗的首选药物。众所周知，糖皮质激素对骨代谢有负性影响，可导致骨质疏松。近年来的研究认为,血清骨钙蛋白是敏感、特异、准确反映机体成骨细胞功能的指标。我们选择了反映成骨细胞活性的血清骨钙蛋白作为研究指标，辅以传统的反映成骨细胞活性的血清碱性磷酸酶(AKP)，研究药理剂量的泼尼松对肾病综合征患儿成骨细胞功能的影响。
对象
, http://www.100md.com
1997年8月～1998年12月，在我院儿科住院及门诊随访的肾病综合征患儿58例，男36例，女22例；年龄2～14岁，平均7.5岁。激素治疗前组：26例。 24 h尿蛋白定量为1.2～ 6.8 g/24h，平均3.0 g/24h。激素足量治疗组：32例。泼尼松2 mg/(kg。d)，治疗4～6周，尿蛋白转阴，尿量恢复正常。肾病综合征的诊断标准符合1981年全国小儿肾脏病协作组制定的标准。以上患儿肾功能均正常，肌酐清除率在正常范围。对照组：34例，男20例，女14例；年龄3～14岁，平均8.3岁。为住院的心肌炎、病毒性脑炎患儿及门诊健康体检的儿童，无肝、肾功能异常及内分泌、钙、磷代谢紊乱性疾病，近半年未使用钙剂、维生素D制剂，无应用糖皮质激素史。
方法
1.标本采集：由专门医护人员采集受检儿童清晨空腹静脉血6 ml，分为3管。其中两管分别测定血清钙、磷和AKP。拟测血清骨钙蛋白的标本，室温放置3 h，待血液充分凝固后，以3 500 r/min 的速度离心10 min，分离血清，-20℃冰箱冰冻保存待测。
, http://www.100md.com
2.标本测定：(1)血清骨钙蛋白浓度测定：采用竞争放射免疫分析法，由中国原子能科学研究院同位素研究所提供试剂盒，仪器为中国北京核仪器厂生产的FT-630G放免分析仪。 (2)血清AKP测定：采用金氏法，用上海第三分析仪器厂生产的721分光光度计测定。
3.统计学分析：所有结果用均值±标准误表示，采用双侧 t检验。如方差不齐，则采用秩和检验，同时采用直线相关分析。 以上结果均采用STATA统计软件包进行统计分析。
结果
1.肾病综合征患儿激素治疗前血清骨钙蛋白含量为(13.9 ±1.6) μg/L，与对照组[(23.4 ±2.4 ) μg/L]相比差异有显著意义(P<0.05)；而血清AKP 在治疗前为(0.28±0.03) μmol/(s。L)，对照组为(0.30±0.03) μmol/(s。L)，两组差异无显著意义(P>0.05)。
, http://www.100md.com
2.肾病综合征患儿激素足量治疗组血清骨钙蛋白为 (3.7 ±0.6 ) μg/L，AKP为(0.13±0.02) μmol/(s。L)，与治疗前组相比差异均有显著意义(P<0.05)。血清骨钙蛋白水平与血清AKP水平相关系数为0.34，P<0.05，呈显著正相关。
讨论
随着基础医学研究的进展，发现了反映成骨细胞功能的新的生化标志物——血清骨钙蛋白[1，2]，使我们了解体内成骨细胞的功能状况成为可能。骨钙蛋白仅由成骨细胞合成和分泌，是成骨细胞特异性产物，除骨组织外，其他组织中未发现骨钙蛋白。成骨细胞合成的骨钙蛋白大约有20%释放入血，血清中的骨钙蛋白水平与成骨细胞合成的骨钙蛋白总量成正相关。血清AKP是传统的反映成骨细胞功能的生化指标。本研究比较了肾病综合征患儿激素治疗前和激素足量治疗4～6周时成骨细胞的功能状况。
分子生物学研究认为，糖皮质激素直接抑制原始骨细胞增生，抑制成骨细胞的活性，使骨再建单位减少[3]。有研究显示糖皮质激素在mRNA水平抑制了成骨细胞中骨钙蛋白的转录[4]。我们观察到肾病综合征患儿应用泼尼松足量治疗4～6周后，血清骨钙蛋白和血清碱性磷酸酶同时降低，二者呈正相关。作为反映成骨细胞功能活性的指标，血清骨钙蛋白和碱性磷酸酶同时降低，表明成骨细胞的功能活性受到显著抑制，我们的研究符合分子生物学的研究结论。通过对血清骨钙蛋白水平检测，结合离体的细胞生物学和分子生物学的研究结论，使我们对肾病综合征患儿糖皮质激素所致的骨代谢异常有了深入了解。生理情况下，成骨细胞合成一定量的胶原蛋白和非胶原蛋白，非胶原蛋白中的主要成份骨钙蛋白能与钙离子结合，使骨基质发生矿化。骨胶原维持骨的强度，与钙离子结合的骨钙蛋白维持骨的硬度，保持骨组织结构、功能的正常。当应用大剂量的糖皮质激素后，成骨细胞合成的胶原和骨钙蛋白减少，骨的矿化下降，骨的强度和硬度均下降，出现为骨质疏松。
, http://www.100md.com
检测结果表明，血清骨钙蛋白较碱性磷酸酶更敏感、特异。因此，血清骨钙蛋白应作为常规指标引入儿科肾病综合征的治疗观察中，通过对骨钙蛋白的动态监测，可早期了解患儿的骨代谢状况，合理用药，预防骨质疏松的发生。
参考文献
1，Lian JB, Gundberg CM. Osteocalcin biochemical considerations and clinical applications. Clin Orthop，1988，1:267-291.
2，Dohi Y, Ohgushi H, Tabata S, et al. Osteogenesis associated with bone gla protein gene expression in diffusion chambres by bone marrow cells with demineralized bone matrix.J Bone Mineral Res，1992，7:1173-1180.
, 百拇医药
3，Reid IR. Pathogenesis and treatment of steroid osteoporosis. Clin Endocrinol，1989，30:83-103.
4，Neilsen HK, Thomsen K, Eriksen EF, et al. The effects of high-dose glucocorticoid administration on serum bone gamma-carboxyglutamic acid-containing protein, serum alkaline phosphatase and vitamin D metabolites in normal subjects. Bone Mineral， 1988，4:105-113.
(收稿日期：1999-08-23), http://www.100md.com