病毒性心肌炎与外周血淋巴细胞凋亡的关系
作者：韩波 马沛然 韩秀珍 汪翼 王玉林 庄建新
单位：韩波(250021 济南，山东省立医院儿科)；马沛然(250021 济南，山东省立医院儿科)；韩秀珍(250021 济南，山东省立医院儿科)；汪翼(250021 济南，山东省立医院儿科)；王玉林(250021 济南，山东省立医院儿科)；庄建新(250021 济南，山东省立医院儿科)
关键词：
中华儿科杂志001014
近年来体外实验研究表明，许多病毒感染可诱发T细胞凋亡，且Fas/ FasL径路为T细胞凋亡的主要方式之一[1]。为了探索病毒性心肌炎(VM)与Fas/FasL介导的外周血淋巴细胞凋亡的关系,我们检测了VM患儿外周血淋巴细胞凋亡百分率和CD+3细胞Fas表达及CD+8细胞FasL的表达情况，以探讨VM继发性免疫功能低下的原因。
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对象
心肌炎组患儿15例均为1997年10月～1998年6月在我院住院的患儿，其中男9例，女6例；年龄1～12岁(平均8.2岁)。小儿VM的诊断标准按照1994年5月威海会议修订的小儿VM诊断标准[2]。14例为急性期，1例为慢性期急性发作。正常对照组15例为近期无感染史，体检正常的健康儿童，其中男8例，女7例；年龄2～12岁(平均8.5岁)。
方法
试剂与仪器：碘化丙啶〔PI〕染色液、荧光素藻红蛋白标记的CD3、CD8 (PE-CD3、PE-CD8)、荧光素异硫氰酸标记的FaS、Fasl (FITC-Fas、FITC-FasL)均为法国国际免疫公司产品。流式细胞仪(FACScan,cell Quest plot 软件程序，美国BD公司提供)。标本采集均为入院第2天(用肾上腺皮质激素前)空腹抽取静脉血。 外周血单个核细胞提取(聚蔗糖-泛影葡胺分层液密度梯度离心法)。 流式细胞仪定量检测细胞凋亡百分率。 双色流式细胞仪检测CD+3 Fas表达与CD+8 FasL表达。
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统计学处理：用均数±标准差表示，两样本均数比较，用不配对t检验，部分指标间作直线相关分析，P<0.05表明差异有显著性。
结果
心肌炎组患儿外周血淋巴细胞凋亡百分率[(0.60±0.48)%]较正常对照组[(0.07±0.03)%]明显升高(t=2.28,P<0.05)。由于染色体浓聚及碎裂，使凋亡细胞位于直方图的亚二倍体区。心肌炎患儿CD+3细胞Fas表达 [(2.97±1.72)%]较正常对照组[(1.16±0.56)%]明显增加(t=2.14,P<0.05)；心肌炎组患儿CD+8细胞FasL表达[(4.29±2.71)%]较正常对照组[(0.13±0.05)%]明显增加(t=3.37,P<0.01)；心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡百分率与CD+3Fas及CD+8FasL表达均呈显著正相关(分别为r=0.66，P<0.01; r=0.61,P<0.01)。
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讨论
VM患儿外周血CD+3、CD+4、CD+8T淋巴细胞降低，特别是急性期的早期7～14 d时。以往认为可能是病毒感染对免疫系统损伤、免疫细胞过度消耗或免疫细胞转移至感染器官所致。本研究结果表明，VM患儿外周血淋巴细胞凋亡百分率明显高于正常对照组(P<0.05)。表明病毒感染后，导致淋巴细胞凋亡增加，可能为VM继发性免疫功能低下的原因之一[3]。
Fas 基因是具代表性的凋亡相关基因，Fas(CD95)分子是细胞膜表面受体蛋白，属于肿瘤坏死因子(TNF)及神经生长因子受体(NGFR)超家族成员，它主要表达于成熟的淋巴细胞、心脏、肝脏等。FasL是Fas的配体，为肿瘤环死因子(TNF)同源的Ⅱ型穿膜蛋白，主要表达于活化的T淋巴细胞。FasL与靶细胞表面的Fas受体结合，向细胞内传导死亡信号，使靶细胞在数小时内发生凋亡。Fas /FasL系统对免疫系统功能的调节起着至关重要的作用。近年来的研究表明，多种病毒感染可诱导T细胞Fas表达增加，且淋巴细胞对该受体介导的凋亡最敏感[4]。本研究结果表明，VM患儿CD+3细胞Fas表达显著增强，且与外周血淋巴细胞凋亡百分率成正相关(r=0.66,P<0.01),表明病毒感染后可能经Fas介导，使淋巴细胞凋亡，下调免疫功能。
, 百拇医药
机体遭受病毒感染后，主要通过免疫介导的细胞毒作用清除病毒，而效应细胞主要为CD+8细胞毒T淋巴细胞，Fas/ FasL介导的细胞凋亡是其作用途径之一，细胞膜表面的FasL能杀伤外周血T淋巴胞[5]。本组VM患儿CD+8 细胞FasL表达显著增强(P<0.01)，且与外周血淋巴细胞凋亡百分率成显著正相关(r=0.61,P<0.01)。表明病毒感染后，CD+8T细胞被激活，表达FasL的CD+8 细胞可通过旁分泌形式杀死相邻表达Fas的淋巴细胞，也可通过自分泌形式自杀，下调免疫功能。
本组VM患儿外周血淋巴细胞凋亡增加，可能为VM继发性免疫功能低下的原因之一，Fas/ FasL系统参与了VM患儿外周免疫功能的调节。
参考文献
, 百拇医药
1，Sieg S, Huang Y, Kaplan D. Viral regulation of CD95 expression and apoptosis in T lymphocytes. J Immunol, 1997,159:1192-1199.
2，李家宜,整理.小儿VM诊断标准(1994年5月威海会议修订).中国实用儿科杂志,1996,11:316.
3，Kiyoshi M,Katsumi ,Yojiro K,et al.Apoptosis induction in human peripheral blood T lymphocytes by high-dose steroid therapy.Transplantation ,1997,63:583-587.
4，Oehm A, Behrmann I, Falk W. Purification and molecular cloning of the APO-1 cell surface antigen, a member of the Tumor necrosis factor/nerve growth factor receptor superfamily. J Bil Chemi, 1972,267:10709.
5，Suda T, Hashimoto H, Tanaka M. Membrane Fas ligand kills human peripherol blood T lymphocytes, and soluble Fas ligand block the killing.J Exp Med，1997,186:2045-2050.
收稿日期：1999-07-08, 百拇医药
单位：韩波(250021 济南，山东省立医院儿科)；马沛然(250021 济南，山东省立医院儿科)；韩秀珍(250021 济南，山东省立医院儿科)；汪翼(250021 济南，山东省立医院儿科)；王玉林(250021 济南，山东省立医院儿科)；庄建新(250021 济南，山东省立医院儿科)
关键词：
中华儿科杂志001014
近年来体外实验研究表明，许多病毒感染可诱发T细胞凋亡，且Fas/ FasL径路为T细胞凋亡的主要方式之一[1]。为了探索病毒性心肌炎(VM)与Fas/FasL介导的外周血淋巴细胞凋亡的关系,我们检测了VM患儿外周血淋巴细胞凋亡百分率和CD+3细胞Fas表达及CD+8细胞FasL的表达情况，以探讨VM继发性免疫功能低下的原因。
, http://www.100md.com
对象
心肌炎组患儿15例均为1997年10月～1998年6月在我院住院的患儿，其中男9例，女6例；年龄1～12岁(平均8.2岁)。小儿VM的诊断标准按照1994年5月威海会议修订的小儿VM诊断标准[2]。14例为急性期，1例为慢性期急性发作。正常对照组15例为近期无感染史，体检正常的健康儿童，其中男8例，女7例；年龄2～12岁(平均8.5岁)。
方法
试剂与仪器：碘化丙啶〔PI〕染色液、荧光素藻红蛋白标记的CD3、CD8 (PE-CD3、PE-CD8)、荧光素异硫氰酸标记的FaS、Fasl (FITC-Fas、FITC-FasL)均为法国国际免疫公司产品。流式细胞仪(FACScan,cell Quest plot 软件程序，美国BD公司提供)。标本采集均为入院第2天(用肾上腺皮质激素前)空腹抽取静脉血。 外周血单个核细胞提取(聚蔗糖-泛影葡胺分层液密度梯度离心法)。 流式细胞仪定量检测细胞凋亡百分率。 双色流式细胞仪检测CD+3 Fas表达与CD+8 FasL表达。
, http://www.100md.com
统计学处理：用均数±标准差表示，两样本均数比较，用不配对t检验，部分指标间作直线相关分析，P<0.05表明差异有显著性。
结果
心肌炎组患儿外周血淋巴细胞凋亡百分率[(0.60±0.48)%]较正常对照组[(0.07±0.03)%]明显升高(t=2.28,P<0.05)。由于染色体浓聚及碎裂，使凋亡细胞位于直方图的亚二倍体区。心肌炎患儿CD+3细胞Fas表达 [(2.97±1.72)%]较正常对照组[(1.16±0.56)%]明显增加(t=2.14,P<0.05)；心肌炎组患儿CD+8细胞FasL表达[(4.29±2.71)%]较正常对照组[(0.13±0.05)%]明显增加(t=3.37,P<0.01)；心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡百分率与CD+3Fas及CD+8FasL表达均呈显著正相关(分别为r=0.66，P<0.01; r=0.61,P<0.01)。
, http://www.100md.com
讨论
VM患儿外周血CD+3、CD+4、CD+8T淋巴细胞降低，特别是急性期的早期7～14 d时。以往认为可能是病毒感染对免疫系统损伤、免疫细胞过度消耗或免疫细胞转移至感染器官所致。本研究结果表明，VM患儿外周血淋巴细胞凋亡百分率明显高于正常对照组(P<0.05)。表明病毒感染后，导致淋巴细胞凋亡增加，可能为VM继发性免疫功能低下的原因之一[3]。
Fas 基因是具代表性的凋亡相关基因，Fas(CD95)分子是细胞膜表面受体蛋白，属于肿瘤坏死因子(TNF)及神经生长因子受体(NGFR)超家族成员，它主要表达于成熟的淋巴细胞、心脏、肝脏等。FasL是Fas的配体，为肿瘤环死因子(TNF)同源的Ⅱ型穿膜蛋白，主要表达于活化的T淋巴细胞。FasL与靶细胞表面的Fas受体结合，向细胞内传导死亡信号，使靶细胞在数小时内发生凋亡。Fas /FasL系统对免疫系统功能的调节起着至关重要的作用。近年来的研究表明，多种病毒感染可诱导T细胞Fas表达增加，且淋巴细胞对该受体介导的凋亡最敏感[4]。本研究结果表明，VM患儿CD+3细胞Fas表达显著增强，且与外周血淋巴细胞凋亡百分率成正相关(r=0.66,P<0.01),表明病毒感染后可能经Fas介导，使淋巴细胞凋亡，下调免疫功能。
, 百拇医药
机体遭受病毒感染后，主要通过免疫介导的细胞毒作用清除病毒，而效应细胞主要为CD+8细胞毒T淋巴细胞，Fas/ FasL介导的细胞凋亡是其作用途径之一，细胞膜表面的FasL能杀伤外周血T淋巴胞[5]。本组VM患儿CD+8 细胞FasL表达显著增强(P<0.01)，且与外周血淋巴细胞凋亡百分率成显著正相关(r=0.61,P<0.01)。表明病毒感染后，CD+8T细胞被激活，表达FasL的CD+8 细胞可通过旁分泌形式杀死相邻表达Fas的淋巴细胞，也可通过自分泌形式自杀，下调免疫功能。
本组VM患儿外周血淋巴细胞凋亡增加，可能为VM继发性免疫功能低下的原因之一，Fas/ FasL系统参与了VM患儿外周免疫功能的调节。
参考文献
, 百拇医药
1，Sieg S, Huang Y, Kaplan D. Viral regulation of CD95 expression and apoptosis in T lymphocytes. J Immunol, 1997,159:1192-1199.
2，李家宜,整理.小儿VM诊断标准(1994年5月威海会议修订).中国实用儿科杂志,1996,11:316.
3，Kiyoshi M,Katsumi ,Yojiro K,et al.Apoptosis induction in human peripheral blood T lymphocytes by high-dose steroid therapy.Transplantation ,1997,63:583-587.
4，Oehm A, Behrmann I, Falk W. Purification and molecular cloning of the APO-1 cell surface antigen, a member of the Tumor necrosis factor/nerve growth factor receptor superfamily. J Bil Chemi, 1972,267:10709.
5，Suda T, Hashimoto H, Tanaka M. Membrane Fas ligand kills human peripherol blood T lymphocytes, and soluble Fas ligand block the killing.J Exp Med，1997,186:2045-2050.
收稿日期：1999-07-08, 百拇医药