肾病患儿细胞免疫功能和细胞因子关系的探讨
作者：于力 卓美瑛 杨小苏 翁志媛 钟志敏
单位：于力(510180 广州市第一人民医院儿科)；卓美瑛(510180 广州市第一人民医院儿科)；杨小苏(510180 广州市第一人民医院儿科)；翁志媛(510180 广州市第一人民医院儿科)；钟志敏(510180 广州市第一人民医院检验科)
关键词：
中华儿科杂志001012 我们对不同病期的18例原发性肾病综合征(NS)患儿的外周血进行T淋巴细胞亚群的检测及细胞因子变化的分析,旨在较全面地探讨NS患儿细胞因子(IL-6、IL-8、TNF-α)参与发病的作用、细胞免疫功能的相关性及临床意义。
对象
肾病组：选自 1998年1月～1999年4月的本院住院患儿18例,男11例，女7例，年龄2～13岁，平均7.5岁，全部符合小儿NS诊断标准[1],临床表现为单纯性肾病12例,肾炎性肾病6例,分为肾病活动期组与缓解期组。初发14例，复发4例。对照组：随机选择18例同龄健康儿童，其中男12例，女6例。年龄2～14岁，平均8岁。
, http://www.100md.com
方法
1.T淋巴细胞亚群的检测：活动期与缓解期分别采集清晨空腹抗凝静脉血,在8 h内染色上机检测。应用FACSVantage流式细胞仪(美国B-D公司)，采用IgG1/IgG、IgG1/ IgG2a、CD3/CD4、CD3/CD8、CD3/CD(16+56)双色直标抗体(美国B-D公司)，染色标本在Cellquest软件下获取数据并分析结果。
表1 NS患儿T淋巴细胞亚群的检测结果(
±s，%) 组别
例数
CD+3
CD+3CD+4
, 百拇医药
CD+3CD+8
CD+4/CD+8
CD-3CD(16+56)+
肾病组
活动期
18
41±9
23± 5
29± 26
, http://www.100md.com
1.00
19±3
缓解期
18
72±6
31±10
26±10
1.29
24±5
对照组
18
68±5
41± 3
, 百拇医药
29± 5
1.41
26±8
F值
83.35
31.60
1.04
6.19
10.65
P值
<0.01
<0.01
>0.05
, http://www.100md.com
<0.01
<0.01
2.细胞因子的检测：检测IL-6、IL-8、和TNF-α的样本立即分离血清后，-20℃保存,1周内检测。采用ELISA方法检测血清中IL-6、IL-8和TNF-α的含量。IL-6和IL-8试剂盒系英国Amersham公司提供，TNF-α试剂盒购于军事医学科学院。
3.统计学分析：采用方差分析和q检验(Newman-Keuls检验)或配对t检验，相关性采用直线相关分析法。
结果
1.肾病患儿T淋巴细胞亚群的变化(表1)：NS患儿活动期CD+3、CD+3CD+4细胞数、CD+4/CD+8细胞比值、CD-3 CD(16+56)+细胞数较缓解期和对照组明显降低，差异有显著意义。CD+3CD+8细胞数与缓解期和对照组比较，差异无显著意义。NS患儿缓解期除CD+3CD+4(P<0.01)外，与对照组比较差异均无显著意义。
, http://www.100md.com
2.肾病患儿细胞因子的变化(表2)：NS患儿活动期血清IL-6、IL-8和TNF-α的水平高于NS缓解期和对照组。NS缓解期与对照组比较，IL-6、IL-8的水平差异有显著意义，TNF-α的水平差异无显著意义。
3.细胞免疫功能与细胞因子的关系(表3)：经相关性分析说明，CD+3、CD+4、CD-3CD(16+56)+细胞与细胞因子IL-6、IL-8和TNF-α呈负相关，有其临床作用。
表2 NS患儿细胞因子的检测结果(±s，ng/L) 组别
例数
, http://www.100md.com IL-6
IL-8
TNF-α
肾病组
活动期
18
339±72
267±45
285±66
缓解组
18
210±23
205±32
, 百拇医药
170±80
对照组
18
160±13
137±12
140±11
F值
75.18
13.31
25.49
P值
<0.01
<0.01
, http://www.100md.com
<0.01
表3 NS患儿T淋巴细胞亚群与细胞因子相关性(r) T淋巴细胞亚群
IL-6
IL-8
TNFα
CD+3
-0.91
-0.81
-0.88
CD+3CD+4
, http://www.100md.com -0.89
-0.85
-0.78
CD-3CD(16+56)+
-0.90
-0.85
-0.87
P均<0.01
讨论
小儿原发性肾病综合征的发病及病情的进展与细胞免疫功能异常和细胞因子参与发病有着密切的关系，机体的免疫系统是由一系列免疫活性细胞、免疫球蛋白及其细胞因子所组成的复杂体系，机体的免疫反应必须被准确地调节，以保证其发挥最有效的免疫功能。T淋巴细胞根据功能的不同分成若干亚群，分为辅助性T细胞(CD+4)和抑制杀伤性T细胞(CD+8)。CD+4和CD+8细胞在功能上相互作用，保持着免疫功能协调平衡。细胞因子作为淋巴细胞分泌的、具有重要免疫活性的物质其功能也是多方面的，炎症细胞因子是肾脏疾病的重要介质，直接作用于组织细胞，也诱发其它炎症介质而间接发挥作用，细胞因子之间均有诱导、促进、刺激等作用[2]。由于免疫调节的紊乱，各种细胞因子间相互作用导致系膜细胞的增殖与肾小球硬化[3]。
, 百拇医药
本研究结果表明，NS患儿在活动期CD+4细胞明显下降，提示肾病患儿活动期存在T细胞免疫应答能力降低,细胞间相互作用调节紊乱，使细胞免疫功能减低。IL-6、IL-8和TNF-α的水平在NS活动期明显升高，参与NS的发病，IL-6尤为明显是其敏感指标。结果显示IL-6、IL-8和TNFα与CD+3、CD+4、CD(16+56)+细胞呈负相关，提示细胞因子与T淋巴细胞间存在一定的联系。我们认为NS患儿IL-6、IL-8和TNF-α升高与细胞免疫异常有关，NS活动期T细胞亚群和细胞因子的关系有待于进一步的研究。动态监测血清IL-6、IL-8和TNF-α水平可作为了解肾脏损害程度、治疗效果和预后评估的重要手段，将为肾病的免疫防治开拓新途径。
基金项目：广东省卫生厅科研基金项目(1997359)
, 百拇医药
参考文献
1，姜新猷，陈荣华，王宝琳，整理.《关于小儿肾小球疾病临床分类和治疗的建议》的修订意见.中华儿科杂志，1981,19:241-243.
2，Tesar V,Masek Z,Rychlik I,et al. Cytokines and adhesion molecules in renal vasculitis and lupus nephritis. Nephrol Dial Transplant,1998,13:1662-1667.
3，Konig B,Steinbch F,Janocha B,et al. The differential expression of proinflammatory cytokines IL-6,IL-8 and TNFα in renal cell carcinoma. Anticancer Res,1999,19:1519-1524.
收稿日期：1999-10-22, 百拇医药
单位：于力(510180 广州市第一人民医院儿科)；卓美瑛(510180 广州市第一人民医院儿科)；杨小苏(510180 广州市第一人民医院儿科)；翁志媛(510180 广州市第一人民医院儿科)；钟志敏(510180 广州市第一人民医院检验科)
关键词：
中华儿科杂志001012 我们对不同病期的18例原发性肾病综合征(NS)患儿的外周血进行T淋巴细胞亚群的检测及细胞因子变化的分析,旨在较全面地探讨NS患儿细胞因子(IL-6、IL-8、TNF-α)参与发病的作用、细胞免疫功能的相关性及临床意义。
对象
肾病组：选自 1998年1月～1999年4月的本院住院患儿18例,男11例，女7例，年龄2～13岁，平均7.5岁，全部符合小儿NS诊断标准[1],临床表现为单纯性肾病12例,肾炎性肾病6例,分为肾病活动期组与缓解期组。初发14例，复发4例。对照组：随机选择18例同龄健康儿童，其中男12例，女6例。年龄2～14岁，平均8岁。
, http://www.100md.com
方法
1.T淋巴细胞亚群的检测：活动期与缓解期分别采集清晨空腹抗凝静脉血,在8 h内染色上机检测。应用FACSVantage流式细胞仪(美国B-D公司)，采用IgG1/IgG、IgG1/ IgG2a、CD3/CD4、CD3/CD8、CD3/CD(16+56)双色直标抗体(美国B-D公司)，染色标本在Cellquest软件下获取数据并分析结果。
表1 NS患儿T淋巴细胞亚群的检测结果(
±s，%) 组别例数
CD+3
CD+3CD+4
, 百拇医药
CD+3CD+8
CD+4/CD+8
CD-3CD(16+56)+
肾病组
活动期
18
41±9
23± 5
29± 26
, http://www.100md.com
1.00
19±3
缓解期
18
72±6
31±10
26±10
1.29
24±5
对照组
18
68±5
41± 3
, 百拇医药
29± 5
1.41
26±8
F值
83.35
31.60
1.04
6.19
10.65
P值
<0.01
<0.01
>0.05
, http://www.100md.com
<0.01
<0.01
2.细胞因子的检测：检测IL-6、IL-8、和TNF-α的样本立即分离血清后，-20℃保存,1周内检测。采用ELISA方法检测血清中IL-6、IL-8和TNF-α的含量。IL-6和IL-8试剂盒系英国Amersham公司提供，TNF-α试剂盒购于军事医学科学院。
3.统计学分析：采用方差分析和q检验(Newman-Keuls检验)或配对t检验，相关性采用直线相关分析法。
结果
1.肾病患儿T淋巴细胞亚群的变化(表1)：NS患儿活动期CD+3、CD+3CD+4细胞数、CD+4/CD+8细胞比值、CD-3 CD(16+56)+细胞数较缓解期和对照组明显降低，差异有显著意义。CD+3CD+8细胞数与缓解期和对照组比较，差异无显著意义。NS患儿缓解期除CD+3CD+4(P<0.01)外，与对照组比较差异均无显著意义。
, http://www.100md.com
2.肾病患儿细胞因子的变化(表2)：NS患儿活动期血清IL-6、IL-8和TNF-α的水平高于NS缓解期和对照组。NS缓解期与对照组比较，IL-6、IL-8的水平差异有显著意义，TNF-α的水平差异无显著意义。
3.细胞免疫功能与细胞因子的关系(表3)：经相关性分析说明，CD+3、CD+4、CD-3CD(16+56)+细胞与细胞因子IL-6、IL-8和TNF-α呈负相关，有其临床作用。
表2 NS患儿细胞因子的检测结果(
±s，ng/L) 组别例数
, http://www.100md.com IL-6
IL-8
TNF-α
肾病组
活动期
18
339±72
267±45
285±66
缓解组
18
210±23
205±32
, 百拇医药
170±80
对照组
18
160±13
137±12
140±11
F值
75.18
13.31
25.49
P值
<0.01
<0.01
, http://www.100md.com
<0.01
表3 NS患儿T淋巴细胞亚群与细胞因子相关性(r) T淋巴细胞亚群
IL-6
IL-8
TNFα
CD+3
-0.91
-0.81
-0.88
CD+3CD+4
, http://www.100md.com -0.89
-0.85
-0.78
CD-3CD(16+56)+
-0.90
-0.85
-0.87
P均<0.01
讨论
小儿原发性肾病综合征的发病及病情的进展与细胞免疫功能异常和细胞因子参与发病有着密切的关系，机体的免疫系统是由一系列免疫活性细胞、免疫球蛋白及其细胞因子所组成的复杂体系，机体的免疫反应必须被准确地调节，以保证其发挥最有效的免疫功能。T淋巴细胞根据功能的不同分成若干亚群，分为辅助性T细胞(CD+4)和抑制杀伤性T细胞(CD+8)。CD+4和CD+8细胞在功能上相互作用，保持着免疫功能协调平衡。细胞因子作为淋巴细胞分泌的、具有重要免疫活性的物质其功能也是多方面的，炎症细胞因子是肾脏疾病的重要介质，直接作用于组织细胞，也诱发其它炎症介质而间接发挥作用，细胞因子之间均有诱导、促进、刺激等作用[2]。由于免疫调节的紊乱，各种细胞因子间相互作用导致系膜细胞的增殖与肾小球硬化[3]。
, 百拇医药
本研究结果表明，NS患儿在活动期CD+4细胞明显下降，提示肾病患儿活动期存在T细胞免疫应答能力降低,细胞间相互作用调节紊乱，使细胞免疫功能减低。IL-6、IL-8和TNF-α的水平在NS活动期明显升高，参与NS的发病，IL-6尤为明显是其敏感指标。结果显示IL-6、IL-8和TNFα与CD+3、CD+4、CD(16+56)+细胞呈负相关，提示细胞因子与T淋巴细胞间存在一定的联系。我们认为NS患儿IL-6、IL-8和TNF-α升高与细胞免疫异常有关，NS活动期T细胞亚群和细胞因子的关系有待于进一步的研究。动态监测血清IL-6、IL-8和TNF-α水平可作为了解肾脏损害程度、治疗效果和预后评估的重要手段，将为肾病的免疫防治开拓新途径。
基金项目：广东省卫生厅科研基金项目(1997359)
, 百拇医药
参考文献
1，姜新猷，陈荣华，王宝琳，整理.《关于小儿肾小球疾病临床分类和治疗的建议》的修订意见.中华儿科杂志，1981,19:241-243.
2，Tesar V,Masek Z,Rychlik I,et al. Cytokines and adhesion molecules in renal vasculitis and lupus nephritis. Nephrol Dial Transplant,1998,13:1662-1667.
3，Konig B,Steinbch F,Janocha B,et al. The differential expression of proinflammatory cytokines IL-6,IL-8 and TNFα in renal cell carcinoma. Anticancer Res,1999,19:1519-1524.
收稿日期：1999-10-22, 百拇医药