原发性开角型青光眼血液流变学指标及脂质过氧化的测定
作者：陈丽娜 原慧萍 马波 高佩琦 朱翔 许艳 关励男
单位：陈丽娜 马波 高佩琦 朱翔 许艳(哈尔滨医科大学生物物理教研室黑龙江150086)；原慧萍(哈尔滨医科大学附属二院眼科)；关励男(哈尔滨市传染病院检验科)
关键词：原发性开角型青光眼；血液流变学；脂质过氧化；超氧歧化酶
中国血液变学杂志000210 摘 要 测定了21例原发性开角型青光眼患者的血液流变学指标，并选用21例健康人作为对照。测定结果：青光眼组的血液流变学各项指标均较正常对照组有显著性升高(p<0.05～p<0.001)；脂质过氧化、超氧化物歧化酶指标以及红细胞膜流动性均较正常了青光眼的发病机理，是青光眼发病的潜在性因素。
中图分类号 R775.2
DETERMINATION OF BLOOD RHEOLOGY AND LOPID PEROXIDATION
, http://www.100md.com
IN PRIMARY OPEN-ANGLE GLAUCOMA
Chen Lina, et al
(Department of Biophysics, Harbin Medical Unversity,150086)
Abstract The indexes of blood rheolgy were determined in 19 primary open-angle glaucoma patients, and 16 normal persons were selected as control group. The results of determination showed that the indexes of blood rheology in glaucoma group were significantly higher than those in the normal control gropu (P<0.05～P<0.001). And the indexes of lopid peroxidation, superoxide dismutase and the fluid of red blood cell membrane in glaucoma group were significantly different from those in the normal control group. It is indicated that the factors of blood rheology and LPO participated in the processes of the diseases coming on and became a potential pathogenesis of glaucoma.
, 百拇医药
Keywords POAG blood rheology LPO pathogenesis
近年来，血液流变学改变在原发性开角型青光眼(Primary Open-Angle Glaucoma, POAG)发病机理中的作用受到了国内外学者的关注[1～4]，认为血浆粘度、红细胞压积等血液流变学指标在这类患者中均显异常。本文应用血液流变学理论和实验方法，对POAG患者的液粘度及其影响因素进行了测定分析，并对脂质过氧化(Lipid Peroxidation, LPO)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、红细胞膜流动性等指标进行了一系列测定，旨在进一步揭示POAG的发病机理，并为其预防和治疗提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 检测对象 1999年4～6月，来自我校附属第二医院眼科病房，经确诊为POAG，共21例，男9例，女12例，年龄27～60岁，平均年龄45.2岁为POAF组。
, 百拇医药
1999年4～6月，来自我校附属第二医院眼科病房，经确诊为眼外伤者，以及本科教师等健康者，共21例，男9例，女12你，年龄：23～57岁，平均年龄41.1岁，为对照组。
1.2 试剂与仪器 DPH(1,6-Diphenyl-1,3,5-Hexatriene)，美国Sigma公司出品；SOD和LPO试剂盒，南京建成生物工程研究所出品；其他试剂为国产分析纯。
计算机控制的毛细管式血液粘度计(我室自行研制，该机获得90年黑龙江省教委科技进步三等奖)；RF-540型荧光分光光度计，日本岛津公司生产；国产722分光光度计。
1.3 实验方法 受试者于晨起空腹采血5ml，置于肝素抗凝管中。
1.3.1 血液流变学指标的测定 全血粘度用0.8mm管径水平毛细管测定，高切变率为203s-1，低切变率为5s-1；血浆粘度用0.38mm管径垂直式毛细管测定；血细胞压积用温氏(Wintrobe)血沉管离心3000r/min 20分钟后测定。
, 百拇医药
1.3.2 红细胞膜流动性的检测 用一步低渗溶血法提取红细胞膜，用DPH荧光标记，于λex=362nm,λem=432nm时测量荧光偏振度P，求得平均微粘度
，各向异性γ。
1.3.3 过氧化脂质的测定 用丙二醛(MDA)试剂盒测定。原理：过氧化脂质降解产物中的MDA+硫代巴比妥酸
，在532nm处有最大吸收峰，由722分光光计测出。
1.3.4 超氧化物歧化酶的测定 用SOD试剂盒测定。原理：黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应
2 结果
, 百拇医药
2.1 血液流变学指标变化
与对照组(C)相比较，POAG组全血高、低切粘度(ηH、ηL)，血浆粘度(ηP)均显著增高，红细胞聚集程度增加。
表1 POAG血液流变学指标变化(
±s) 组别
n
ηH(mPa.s)
ηL(mPa.s)
ηP(mPa.s)
, 百拇医药
HCT(%)
对照组(男)
9
4.83±0.67
5.92±1.01
1.61±0.10
48.00±3.78
POAG组(男)
9
5.17±0.72*
6.19±0.85*
1.69±0.07*
, 百拇医药
52.69±10.16*
对照组(女)
11
4.38±0.45
5.12±0.95
1.60±0.15
40.93±4.29
POAG组(女)
11
5.16±1.42**
5.89±1.41**
, 百拇医药
1.66±0.07*
47.59±6.61*
*P<0.05 **P<0.012.2 红细胞膜流动性的变化
与对照组相比较，POAG组荧光偏振度P，平均微粘度η，各向异性γ均显著升高。
表2 POAG红细胞膜流动性的变化(±s) 组别
n
P
η(mPa.s)
γ
, http://www.100md.com
对照组
21
0.26±0.04
2.83±0.89
0.19±0.03
POAG组
21
0.29±0.02**
3.54±0.58*
0.22±0.02**
*p<0.05 **p<0.01表3 POAG的MDA检测(±s) 组别
, http://www.100md.com
N
MDA含量(nmol/ml)
对照组
21
493.21±194.77
POAG组
21
744.54±214.39**
**p<0.01表4 POAG的SOD检测(±s) 组别
N
, 百拇医药 SOD活性(NU/ml)
对照组
21
78.35±20.94
POAG组
21
58.63±26.80**
**P<0.01
2.3 过氧化脂质的变化
与对照组相比较，POAG组过氧化脂质水平显著升高。
2.4 SOD水平的变化
, 百拇医药
与对照组相比较，POAG组SOD水平显著下降。
3 讨论
3.1 血液粘度与POAG
POAG的视功能损害及致盲的主要原因之一是视盘和视网膜血液供应障碍，导致视神经、视网膜神经节细胞及视网膜神经纤维层等组织的变性坏死[5]。本文测得19例POAG，全血粘度、血浆粘度及血细胞压积均处于高水平状态，与对照组相比均有显著性差异。在血粘度升高的情况下，若外部压力(眼压)增加，使血管不能扩张或致血管收缩，则血流率下降，视盘、视网膜血流灌注减少，局部缺血而产生青光眼的视神经损害[6]。由此可见，高血粘稠度在POAG视神经损害的病因学中的作用是明显的，说明血液流变学的因素参与了POAG的发病过程。而高粘滞血症的原因尚不清楚。但红细胞压积的改变对血小板粘附功能有明显影响[7]，是影响血粘粘度即血液流变性的重要因素之一[8]，本文对POAG患者的HCT进行测定，与对照值相比较有显著性差异，故推测血细胞压积和血浆粘度的增高是造成POAG患者的高粘滞血症的原因，而血浆粘度的增高则可能是纤维蛋白原含量增高所致[9]。
, 百拇医药
3.2 脂质过氧化与POAG
在机体内过氧化的靶分子是构成细胞膜系统的磷脂中的不饱和脂肪酸，而活性氧是这种反应的引发物，它使膜磷脂的亚油酸、亚麻酰、花生四烯酸产生过氧化物(脂质过氧化物)[10]。
过氧化作用使得膜中不饱和脂肪酸减少，饱和脂肪酸增多，而增多的饱和脂肪酸又可使膜变为坚硬状态，故可推测膜处于流动性低下的状态，膜系统构造发生变化，膜功能异常[10]。
SOD是一种广泛存在于自然界一切生物体内的金属酶，是一种重要的超氧自由基O2清除剂，通过一种连锁反应使O2歧化为H2O2，而后在过氧化氢酶作用下生成无毒的H2O[11]。
正常情况下，机体自由基的产生、利用、清除三者之间处于一种动态的生理平衡[11]，而本实验显示，在POAG患者中，脂质过氧化的一种产物MDA的含量较正常人明显增高，即脂质过氧化作用增强，这可能是由于自由基的产生增多，患者的SOD水平下降，即清除自由基的能力下降。二者分别或共同作用，导致红细胞膜流动性降低，影响红细胞膜正常功能，造成眼的损伤。
, http://www.100md.com
综上所述，POAG患者的血液粘度产加、SOD水平下降、脂质过氧化水平增高、红细胞膜流动性降低，鉴于此，可考虑通过调整POAG患者的红细胞数量、降低血液粘度来改善视盘和视网膜的血液供应，保护和恢复部分视功能，亦可适当调节SOD、CAT(过氧化氢酶)、VC、VE这类抗氧化物质的浓度或增多外源性补给而使眼的损伤降低到最小程度。以上实验结果表明，血液流变性及脂质过氧水平的检测对POAG发病的潜在因素、早期诊断与追踪观察均有价值，并且对治疗研究提供了参考。
黑龙江省教孝课题
参考文献
[1]Klaver JHJ, et al. Br J Ophthalmol,1985;69:765
[2]吕世荣.哈尔滨医科大学学报.1992；(4)：286
, 百拇医药
[3]葛 坚，等.中华眼科杂志，1992，28：298
[4]Hoyng PEJ, et al. Ophthalmic Res, 1984,16:198
[5]刘 杏，等.原发性开角型青关眼眼底荧光血管造影与血液粘度及其它因素的关系.Chin J Ophthalmol,1997;(1):22
[6]吴小影，等.开角型与闭角型青光眼血液流学检测的对比观察.中国实用眼科杂志，1996；14(10)：591
[7]王 鲸，等.高眼压症血浆粘度和红细胞压积检测.中国实用眼科杂志，1995；13(10：612
[8]史传衣，等.眼科领域内血液流变学的研究进展(一).眼科新进展，1992；12(3)：59
[9]武志坚，等.原发性开角型青光眼的血液粘度及其影响因素.中华眼科杂志，1993；29(6)：353
[10]野尺羲则.脂质过氧化与衰老.生物膜与疾病，1985：159
[11]丁克祥，等.SOD复合酶美容霜的研制及其临床应用的评价.SOD应用研究集，1993：17
(1999年12月27日收稿), 百拇医药
单位：陈丽娜 马波 高佩琦 朱翔 许艳(哈尔滨医科大学生物物理教研室黑龙江150086)；原慧萍(哈尔滨医科大学附属二院眼科)；关励男(哈尔滨市传染病院检验科)
关键词：原发性开角型青光眼；血液流变学；脂质过氧化；超氧歧化酶
中国血液变学杂志000210 摘 要 测定了21例原发性开角型青光眼患者的血液流变学指标，并选用21例健康人作为对照。测定结果：青光眼组的血液流变学各项指标均较正常对照组有显著性升高(p<0.05～p<0.001)；脂质过氧化、超氧化物歧化酶指标以及红细胞膜流动性均较正常了青光眼的发病机理，是青光眼发病的潜在性因素。
中图分类号 R775.2
DETERMINATION OF BLOOD RHEOLOGY AND LOPID PEROXIDATION
, http://www.100md.com
IN PRIMARY OPEN-ANGLE GLAUCOMA
Chen Lina, et al
(Department of Biophysics, Harbin Medical Unversity,150086)
Abstract The indexes of blood rheolgy were determined in 19 primary open-angle glaucoma patients, and 16 normal persons were selected as control group. The results of determination showed that the indexes of blood rheology in glaucoma group were significantly higher than those in the normal control gropu (P<0.05～P<0.001). And the indexes of lopid peroxidation, superoxide dismutase and the fluid of red blood cell membrane in glaucoma group were significantly different from those in the normal control group. It is indicated that the factors of blood rheology and LPO participated in the processes of the diseases coming on and became a potential pathogenesis of glaucoma.
, 百拇医药
Keywords POAG blood rheology LPO pathogenesis
近年来，血液流变学改变在原发性开角型青光眼(Primary Open-Angle Glaucoma, POAG)发病机理中的作用受到了国内外学者的关注[1～4]，认为血浆粘度、红细胞压积等血液流变学指标在这类患者中均显异常。本文应用血液流变学理论和实验方法，对POAG患者的液粘度及其影响因素进行了测定分析，并对脂质过氧化(Lipid Peroxidation, LPO)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、红细胞膜流动性等指标进行了一系列测定，旨在进一步揭示POAG的发病机理，并为其预防和治疗提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 检测对象 1999年4～6月，来自我校附属第二医院眼科病房，经确诊为POAG，共21例，男9例，女12例，年龄27～60岁，平均年龄45.2岁为POAF组。
, 百拇医药
1999年4～6月，来自我校附属第二医院眼科病房，经确诊为眼外伤者，以及本科教师等健康者，共21例，男9例，女12你，年龄：23～57岁，平均年龄41.1岁，为对照组。
1.2 试剂与仪器 DPH(1,6-Diphenyl-1,3,5-Hexatriene)，美国Sigma公司出品；SOD和LPO试剂盒，南京建成生物工程研究所出品；其他试剂为国产分析纯。
计算机控制的毛细管式血液粘度计(我室自行研制，该机获得90年黑龙江省教委科技进步三等奖)；RF-540型荧光分光光度计，日本岛津公司生产；国产722分光光度计。
1.3 实验方法 受试者于晨起空腹采血5ml，置于肝素抗凝管中。
1.3.1 血液流变学指标的测定 全血粘度用0.8mm管径水平毛细管测定，高切变率为203s-1，低切变率为5s-1；血浆粘度用0.38mm管径垂直式毛细管测定；血细胞压积用温氏(Wintrobe)血沉管离心3000r/min 20分钟后测定。
, 百拇医药
1.3.2 红细胞膜流动性的检测 用一步低渗溶血法提取红细胞膜，用DPH荧光标记，于λex=362nm,λem=432nm时测量荧光偏振度P，求得平均微粘度
，各向异性γ。1.3.3 过氧化脂质的测定 用丙二醛(MDA)试剂盒测定。原理：过氧化脂质降解产物中的MDA+硫代巴比妥酸
，在532nm处有最大吸收峰，由722分光光计测出。1.3.4 超氧化物歧化酶的测定 用SOD试剂盒测定。原理：黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应
2 结果
, 百拇医药
2.1 血液流变学指标变化
与对照组(C)相比较，POAG组全血高、低切粘度(ηH、ηL)，血浆粘度(ηP)均显著增高，红细胞聚集程度增加。
表1 POAG血液流变学指标变化(
±s) 组别n
ηH(mPa.s)
ηL(mPa.s)
ηP(mPa.s)
, 百拇医药
HCT(%)
对照组(男)
9
4.83±0.67
5.92±1.01
1.61±0.10
48.00±3.78
POAG组(男)
9
5.17±0.72*
6.19±0.85*
1.69±0.07*
, 百拇医药
52.69±10.16*
对照组(女)
11
4.38±0.45
5.12±0.95
1.60±0.15
40.93±4.29
POAG组(女)
11
5.16±1.42**
5.89±1.41**
, 百拇医药
1.66±0.07*
47.59±6.61*
*P<0.05 **P<0.012.2 红细胞膜流动性的变化
与对照组相比较，POAG组荧光偏振度P，平均微粘度η，各向异性γ均显著升高。
表2 POAG红细胞膜流动性的变化(
±s) 组别n
P
η(mPa.s)
γ
, http://www.100md.com
对照组
21
0.26±0.04
2.83±0.89
0.19±0.03
POAG组
21
0.29±0.02**
3.54±0.58*
0.22±0.02**
*p<0.05 **p<0.01表3 POAG的MDA检测(
±s) 组别, http://www.100md.com
N
MDA含量(nmol/ml)
对照组
21
493.21±194.77
POAG组
21
744.54±214.39**
**p<0.01表4 POAG的SOD检测(
±s) 组别N
, 百拇医药 SOD活性(NU/ml)
对照组
21
78.35±20.94
POAG组
21
58.63±26.80**
**P<0.01
2.3 过氧化脂质的变化
与对照组相比较，POAG组过氧化脂质水平显著升高。
2.4 SOD水平的变化
, 百拇医药
与对照组相比较，POAG组SOD水平显著下降。
3 讨论
3.1 血液粘度与POAG
POAG的视功能损害及致盲的主要原因之一是视盘和视网膜血液供应障碍，导致视神经、视网膜神经节细胞及视网膜神经纤维层等组织的变性坏死[5]。本文测得19例POAG，全血粘度、血浆粘度及血细胞压积均处于高水平状态，与对照组相比均有显著性差异。在血粘度升高的情况下，若外部压力(眼压)增加，使血管不能扩张或致血管收缩，则血流率下降，视盘、视网膜血流灌注减少，局部缺血而产生青光眼的视神经损害[6]。由此可见，高血粘稠度在POAG视神经损害的病因学中的作用是明显的，说明血液流变学的因素参与了POAG的发病过程。而高粘滞血症的原因尚不清楚。但红细胞压积的改变对血小板粘附功能有明显影响[7]，是影响血粘粘度即血液流变性的重要因素之一[8]，本文对POAG患者的HCT进行测定，与对照值相比较有显著性差异，故推测血细胞压积和血浆粘度的增高是造成POAG患者的高粘滞血症的原因，而血浆粘度的增高则可能是纤维蛋白原含量增高所致[9]。
, 百拇医药
3.2 脂质过氧化与POAG
在机体内过氧化的靶分子是构成细胞膜系统的磷脂中的不饱和脂肪酸，而活性氧是这种反应的引发物，它使膜磷脂的亚油酸、亚麻酰、花生四烯酸产生过氧化物(脂质过氧化物)[10]。
过氧化作用使得膜中不饱和脂肪酸减少，饱和脂肪酸增多，而增多的饱和脂肪酸又可使膜变为坚硬状态，故可推测膜处于流动性低下的状态，膜系统构造发生变化，膜功能异常[10]。
SOD是一种广泛存在于自然界一切生物体内的金属酶，是一种重要的超氧自由基O2清除剂，通过一种连锁反应使O2歧化为H2O2，而后在过氧化氢酶作用下生成无毒的H2O[11]。
正常情况下，机体自由基的产生、利用、清除三者之间处于一种动态的生理平衡[11]，而本实验显示，在POAG患者中，脂质过氧化的一种产物MDA的含量较正常人明显增高，即脂质过氧化作用增强，这可能是由于自由基的产生增多，患者的SOD水平下降，即清除自由基的能力下降。二者分别或共同作用，导致红细胞膜流动性降低，影响红细胞膜正常功能，造成眼的损伤。
, http://www.100md.com
综上所述，POAG患者的血液粘度产加、SOD水平下降、脂质过氧化水平增高、红细胞膜流动性降低，鉴于此，可考虑通过调整POAG患者的红细胞数量、降低血液粘度来改善视盘和视网膜的血液供应，保护和恢复部分视功能，亦可适当调节SOD、CAT(过氧化氢酶)、VC、VE这类抗氧化物质的浓度或增多外源性补给而使眼的损伤降低到最小程度。以上实验结果表明，血液流变性及脂质过氧水平的检测对POAG发病的潜在因素、早期诊断与追踪观察均有价值，并且对治疗研究提供了参考。
黑龙江省教孝课题
参考文献
[1]Klaver JHJ, et al. Br J Ophthalmol,1985;69:765
[2]吕世荣.哈尔滨医科大学学报.1992；(4)：286
, 百拇医药
[3]葛 坚，等.中华眼科杂志，1992，28：298
[4]Hoyng PEJ, et al. Ophthalmic Res, 1984,16:198
[5]刘 杏，等.原发性开角型青关眼眼底荧光血管造影与血液粘度及其它因素的关系.Chin J Ophthalmol,1997;(1):22
[6]吴小影，等.开角型与闭角型青光眼血液流学检测的对比观察.中国实用眼科杂志，1996；14(10)：591
[7]王 鲸，等.高眼压症血浆粘度和红细胞压积检测.中国实用眼科杂志，1995；13(10：612
[8]史传衣，等.眼科领域内血液流变学的研究进展(一).眼科新进展，1992；12(3)：59
[9]武志坚，等.原发性开角型青光眼的血液粘度及其影响因素.中华眼科杂志，1993；29(6)：353
[10]野尺羲则.脂质过氧化与衰老.生物膜与疾病，1985：159
[11]丁克祥，等.SOD复合酶美容霜的研制及其临床应用的评价.SOD应用研究集，1993：17
(1999年12月27日收稿), 百拇医药