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编号:10271338
一氧化氮对离体心脏功能的影响
http://www.100md.com 《中国病理生理杂志》 1999年第2期
     作者:王卫东陈宗荣 萧家思

    单位:陈宗荣 萧家思 第三军医大学 (重庆 400038);王卫东 重庆市新桥医院肿瘤科 (400037)

    关键词:心脏;心脏功能试验;一氧化氮

    一氧化氮对离体心脏功能的影响 摘 要 目的:初步探讨一氧化氮对心脏功能的作用及其可能机制。方法:本实验利用Langendorff离体工作心脏灌流装置及技术,观察了NO供体SIN-1、硝普钠灌流心脏后心功能及心肌某些生化指标的改变情况。结果:心脏功能多项指标明显下降,以LVSP,±dp/dtmax为甚。伴之心肌cGMP含量的升高及心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶活性的下降。结论:一氧化氮通过调控心肌cGMP的合成及肌膜Na+-K+-ATP酶活性而影响心肌功能。

, http://www.100md.com     Effects of nitric oxide on myocardial function in isolated working heart preparation

    WANG Wei-Dong, CHEN Zong-Rong, XIAO Jia-Si

    Third Military Medical College, Chongqing(400038)

    Abstract AIM:To investigate the role of nitric oxide(NO) in cardiac function. METHOD:Changes of myocardial function and cyclic GMP,membrane Na+-K+-ATPase activity in myocardium were observed in isolated working heart preparation perfused with NO donor SIN-1, or sodium nitroprusside. RESULTS:It was found that, parallel with marked decrease in cardiac function parameters (esp left ventricular systolic pressure, ±dp/dtmax), an obvious elevation in cyclic GMP level was demonstrated with a declination of membrane Na+-K+-ATPase activity in myocardium. CONCLUSION:Nitric oxide might be involved in cardiac dysfunction by modulating cyclic GMP formation and Na+-K+-ATPase activity in myocardium.
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    MeSH Heart; Cardiac function tests; Nitric oxide

    一氧化氮(nitric oxide,NO)是近年来发现的一种新的细胞信使,它广泛存在于生物体各组织器官,有多种功能,可参与机体诸多生理及病理过程,如宿主防御、神经传递及内毒素休克等[1]。研究发现,心衰患者体内NO合成增强,并且与心衰程度呈正相关[2]。为了明确NO对心功能的作用,本实验观察了NO供体SIN-1、硝普钠灌流心脏后心功能的改变情况,并对其机理作了初步探讨。

    材料与方法

    一、动物及分组:

    采用Wistar雄性大鼠(220±20g),由四川省中药研究所提供。分为五组:1.正常对照组(C);2.SIN-1组(1μmol/L,S1组;10μmol/L,S2组);3.硝普钠组(10mg/L,N1组;50mg/L,N2组);4.SIN-1(10μmol/L)+HbO2(10μmol/L),SH组;5.HbO2(10μmol/L),H组。
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    二、心脏灌流装置及技术:

    采用本校生理教研室改制的Langendorff心脏灌流装置,使用结果证实其装置和技术都是成熟的[3]。灌流液为Krebs-Henseleit缓冲液。心功能指标包括:HR、CF、CO、LVSP、±dp/dtmax等,待顺灌15min心功能稳定后,向灌流液中加入SIN-1及硝普钠,记录心脏功能。

    三、心肌cGMP含量的测定:

    采用放免法,双抗体分离技术。cGMP-RIA Kit由上海中医药大学提供。

    四、心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶活性的测定:

    参照Yazaki等[4]报道的方法稍加改动。Na+-K+-ATP酶为胞膜总ATP酶减去Mg2+-ATP酶的差值。
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    五、心肌NO-2含量的测定:

    按照Griess法[10],以亚硝酸钠作标准曲线。结果以均值±标准差(9902061.jpg (723 bytes)±s)表示。采用单因素方差分析进行数据处理。

    结 果

    一、NO供体对心脏功能的影响:

    SIN-1和硝普钠使HR、CO、LVSP、±dp/dtmax明显低于正常对照组,以LVSP、±dp/dtmax为甚。且大剂量SIN-1和硝普钠组的以上指标变化程度大于小剂量组。不同的是,1 μmol/L SIN-1和小剂量硝普钠分别使CF增大15%和11%,而10 μmol/L SIN-1和大剂量硝普钠则分别使CF下降10%和7%(表1)。SIN-1合用及单用HbO2时,各指标与对照组相比,无显著差异(表2)。
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    表1 NO供体对离体灌流心脏功能的作用

    Tab 1 Changes in cardiac function of isolated working heart perfused with NO donors SIN-1 or nitroprusside(9902061.jpg (723 bytes)±s)

    Parameters

    Control(n=7)

    S1 (n=11)

    S2 (n=10)

, http://www.100md.com     N1 (n=9)

    N2 (n=11)

    HR (beats/min)

    235±12

    216±16

    204±11**

    229±17

    212±10*

    CF (mL/min)

    35.0±3.7

    40.3±2.9*

    31.5±2.4*
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    38.9±1.2*

    32.5±2.2

    CO (mL/min)

    82.4±3.6

    73.1±2.1**

    47.2±3.2**

    75.4±2.5**

    52.3±3.7**

    LVSP (kPa)

    14.2±0.5

    9.9±0.6**

    8.4±0.8**
, 百拇医药
    11.5±0.6**

    8.8±1.0**

    ±dp/dtmax (kPa/s)

    135±10

    114±13**

    80±14**

    121±5*

    96±11**

    -dp/dtmax (kPa/s)

    98±7

    67±11**

    40±7**
, 百拇医药
    72±12**

    59±10**

    *P<0.05, **P<0.01, vs control;HR=heart rate;CF=coronary flow;CO=cardiac output;LVSP=left ventricular systolic pressure 表2 SIN-1合用HbO2及单用HbO2灌流心脏功能的变化

    Tab 2 Alterations in cardiac function of isolated ejecting heart perfused with oxyhemoglobin or SIN-1 plus oxyhemoglobin(9902061.jpg (723 bytes)±s)
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    Parameters

    Control(n=7)

    S2 (n=10)

    SH (n=9)

    H (n=9)

    HR(beats/min)

    235±12

    204±11**

    234±17##

    225±19

    CF(mL/min)

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    31.5±2.4*

    35.5±2.2

    37.1±3.2

    CO(mL/min)

    82.4±3.6

    47.2±3.2**

    81.4±2.5##

    83.3±3.7

    LVSP(kPa)

    14.2±0.5
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    8.4±0.8**

    13.5±0.6##

    14.8±1.1

    +dp/dtmax(kPa/s)

    135±10

    80±14**

    135±5##

    141±13

    -dp/dtmax(kPa/s)

    98±7

    40±7**
, 百拇医药
    100±12##

    99±10

    *P<0.05, **P<0.01, vs control;#P<0.05, ##P<0.01, vs S2

    二、心肌cGMP含量及细胞膜Na+-K+-ATP酶活性的变化:

    NO供体SIN-1和硝普钠致心肌cGMP含量显著高于正常对照组,心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶活性明显低于对照组。且随SIN-1,浓度的增大,以上变化程度增强。合用及单用HbO2(10μmol/L)可以取消以上变化(表3)

    表3 NO供体灌流心脏后心肌NO-2, cGMP含量及Na+-K+-ATP酶活性的变化
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    Tab 3 Changes in nitrite content\,cyclic GMP level and Na+-K+-ATPase activity

    in myocardium of isolated working heart perfused with NO donors(9902061.jpg (723 bytes)±s)

    Control (n=7)

    S1(n=11)

    S2(n=10)

    N2(n=11)
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    SH(n=9)

    H(n=9)

    NO-2

    2.65±0.33

    3.36±0.42*

    6.83±0.71**

    5.11±0.32**

    2.77±0.26**

    2.62±0.21

    (μmol/g Pro)

    cGMP
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    4.77±0.35

    6.29±0.48*

    9.75±0.64**

    6.58±0.41**

    5.03±0.52**

    4.89±0.49

    (pmol/mg Pro)

    Na+-K+-ATPase

    9.41±0.73

    7.22±0.33*

    4.58±0.29**
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    7.71±0.29**

    9.19±0.82**

    9.93±0.55

    (μmol·h·-1·g-1Pro)

    *P<0.05, **P<0.01, vs control;#P<0.05, ##P<0.01, vs S2 讨 论

    SIN-1和硝普钠作为NO供体,前者能自发氧化释放NO并产生超氧阴离子[5],后者则是通过心肌细胞的代谢过程产生NO。本实验以SIN-1和硝普钠灌注离体心脏,发现心功能多项指标明显下降,以LVSP,±dp/dtmax为甚。在本实验中,尽管SIN-1产生的超氧阴离子对心肌也有一定的损伤,但两种NO供体对心脏功能有类似的作用,证明NO在心肌收缩和舒张功能下降中起重要作用。这正与文献报道的NO对游离心肌负性肌力作用相一致[6]。当SIN-1合用氧合血红蛋白时,心功能各指标与正常对照组相比无明显差异(P>0.05)。氧合血红蛋白是NO的有效灭活剂[7]。实验所用氧合血红蛋白携氧量仅为0.08 mL,这与灌流液中的氧含量相比是微不足道的。说明合用氧合血红蛋白对心功能的改善并非通过对心肌氧供的影响,而是通过灭活NO而起作用。在本实验中,NO对CF的作用较为复杂,表现为一定量的NO可使CF明显增加,但随NO剂量的增大,这种作用反而减弱,其机理尚待研究。
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    cGMP是心肌细胞内的第二信使,Na+-K+-ATP酶在维持心肌正常代谢及兴奋活动中起重要作用。本实验中,NO供体灌注心脏致心肌cGMP含量升高和Na+-K+-ATP酶活性下降。前者将激活依赖cGMP的分解cAMP的磷酸二酯酶,促进cGMP的水解,进一步抑制心肌钙内流[8],影响心肌的舒缩功能。Na+-K+-ATP酶活性的下降,会使细胞膜两侧的离子失衡,导致心肌兴奋性增加,传导性及窦房结自律性下降等一系列电生理特性的改变[9],这正与本实验中的心率下降相一致。

    参考文献

    1 Kuo PC, Schroeder RA. The emerging multifaced roles of nitric oxide. Ann Surg, 1995, 221:220.
, http://www.100md.com
    2 Winlaw DS, Smyth GA, Keogh AM, et al. Nitric oxide production and heart failure. Lancet, 1995, 345:390.

    3 李靖,萧家恩.小哺乳动物心脏顺行性灌流技术.第三军医大学学报,1990,12:424.

    4 Yazaki Y, Jun F. Depressed Na+-K+ATPase activity in the failure rabbit heart. Jpn Heart J, 1992, 1:73.

    5 Bohn H, Schonafinger K. Oxygen and oxidation promote the release of nitric oxide from sydnoninimes. J Cardiovasc Pharmacol, 1989, 14( supll 11):S6.
, http://www.100md.com
    6 Brady AJB, Warren JB, Poole-Wilson PA, et al. Nitric oxide attenuates cardiac myocyte contraction. Am J Physiol, 1993, 265:h 176.

    7 Doyle MP, Hockstra JW. Oxidation of nitrogen oxides by bound dioxygen in hemoprotein. J Inorg Biochem, 1981, 14:351.

    8 林其谁.Ca2+与细胞代谢.生命的化学,1994,14:22.

    9 李少如.心脏细胞起搏电流研究的新进展.生理科学,1988,8:142.

    10 Ding AH, Nathan CF, Stuehr DJ. Release of reactive nitrogen intermediates and reactive oxygen intermediates from mouse peritoneal macrophages. J Immunol, 1988, 141:2407.

    收稿日期:1997年4月3日

    修稿日期:1997年7月7日, 百拇医药