α-MSH对EGTA发热的作用*
作者：胡巢凤 王彦平 王华东 李楚杰
单位：暨南大学医学院 病理生理教研室 发热研究室(广州 510632)
关键词：黑素细胞刺激素；发热；促皮质激素释放激素
中国病理生理杂志990404 摘要 目的：观察α-MSH对EGTA发热反应的作用及其可能机制。方法：建立EGTA发热模型；在离体条件下，应用Fura-2荧光指示剂测定细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i);体外培养下丘脑神经细胞。结果：α-MSH能明显抑制EGTA性发热反应(P<0.01)；EGTA可以降低下丘脑神经细胞[Ca2+]i 水平(P<0.01)，但α-MSH不影响正常下丘脑神经细胞[Ca2+]i及EGTA对下丘脑神经细胞[Ca2+]i 的作用(P>0.05)；EGTA可刺激体外培养的下丘脑神经细胞释放CRH (P<0.05)，而α-MSH能抑制EGTA的这种作用 (P<0.05)。结论：α-MSH抑制中枢发热介质CRH的产生可能是降低EGTA发热反应的主要机制之一；中枢CRH的产生和释放增加可能是EGTA性发热的一个重要因素。
, 百拇医药
The effect of α-MSH on EGTA-induced fever
HU Chao-Feng, WANG Yan-Ping, WANG Hua-Dong, LI Chu-Jie
Department of Pathophysiology, Research Institute of Fever, Medical
College of Jinan University, Guangzhou (510632)
Abstract AIM: To investigate the effect of α-MSH on fever induced by EGTA and its possible mechanism.METHODS:EGTA evoked a rise in colonic temperature. The intracellular free calcium([Ca2+]i) in isolated cells from hypothalamus was examined using spectrofluormetry with fura-2 and hypothalamic cells were cultured in vitro.RESULTS:α-MSH could markedly suppressed febrile response (P<0.01). The level of [Ca2+]i decreased while cells were exposed to medium containing EGTA (P<0.01),but α-MSH had no effect on this decrease action (P>0.05). The corticotropin releasing hormone (CRH) content of culture supernatant significantly elevated when hyperthermic cells were incubated in the presence of EGTA (P<0.05).CONCLUSION:The effect of α-MSH preventing CRH production in the hypothalamus may play a main role in α-MSH antipyretic action and CRH may be an important factor in the mechanism of EGTA-induced fever.
, 百拇医药
MeSH Melanocyte-stimulating hormone; Fever; Corticotrophin releasing hormone
本实验室早先的研究发现，家兔侧脑室灌注EGTA络合中枢神经细胞外Ca2+，降低下丘脑细胞内Ca2+含量引起体温升高，若灌注CaCl2则抑制EGTA性发热[1]。已知α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte-stimulating hormone, α-MSH)是一种具有显著解热作用的神经肽，能降低内毒素、IL-1、肿瘤坏死因子等多种致热原引起的体温升高[2，3，6]。然而, α-MSH对EGTA性发热反应的作用尚待探讨。本研究旨在观察α-MSH对家兔EGTA性发热反应的影响及其可能机制，这对于进一步揭示α-MSH的解热机制有重要理论意义。
材料和方法
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一、实验动物及侧脑室插管：
健康封闭群新西兰家兔20只，体重2.1～3.0 kg，雌雄不拘。侧脑室插管方法见前文[4]。
二、实验分组及步骤：
侧脑室灌注物及分组见表1：试剂均用人工脑脊液(ACSF)稀释。观察体温变化1 h。
表1 各组灌注物
Tab 1 Perfusate of each group Group
Perfusate (mL)
ACSF
ACSF 0.25
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EGTA
4 mmol/L EGTA 0.2+ACSF 0.05
α-MSH+EGTA
200 ng α-MSH 0.05+4 mmol/L EGTA 0.2
α-MSH
200 ng α-MSH 0.05+ACSF 0.2
三、下丘脑神经细胞[Ca2+]i测定[5]:
1.神经细胞悬液制备：家兔迅速断头,取下丘脑组织置冰冷的Hanks液中除去血管和残留血液，转入含0.5 mL冰冷Hanks液的烧杯中剪碎，再移入试管，加适量0.125%胰酶，37℃水浴振荡20 min。用0.5 mL含小牛血清的DMEM培养液终止消化，经200目过筛后，1500 r/min离心5 min，弃上清液，沉淀用DMEM培养液悬浮。取少量细胞悬液，用台盼蓝排斥反应检测细胞存活率在90%以上，调整细胞密度至1×109/L。
, 百拇医药
2.Fura-2/AM负载：在上述制备的细胞悬液中加入Fura-2/AM (终浓度为5 μg, 37℃水浴振荡温育50 min，1500 r/min离心5 min，弃上清液，沉淀用Hanks液冲洗2次。实验分4组：Ⅰ组用Hanks液悬浮细胞；Ⅱ组用0.4 mmol/L EGTA的Hanks液；Ⅲ组为含0.4 mmol/L EGTA和125 μg/L α-MSH的Hanks液；Ⅳ组为含125 μg/L α-MSH的Hanks液悬浮细胞。置37℃温育10 min后，用荧光分光光度计检测。
四、下丘脑神经细胞培养：
下丘脑神经细胞悬液制备法与上面相同。沉淀细胞用含10%小牛血清的DMEM培养液培养，调整细胞密度至1×1010/L。实验分4组：对照组：用DMEM培养液培养；EGTA组：加2 mmol/L EGTA的DMEM培养液；α-MSH+EGTA组：含有10-4 mmol/Lα-MSH和2 mmol/L EGTA的DMEM培养液；α-MSH组：加10-4 mmol/L α-MSH的DMEM培养液细胞。置体积分数为37℃、5%CO2培养箱中培养1 h。离心、收集上清，置-20℃冰箱保存待测。用放射免疫方法测定上清CRH含量。
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五、体温反应指标及数据处理：
体温反应指标用平均体温反应曲线，1 h体温反应指数(TRI1)及最大体温反应高度ΔT(℃)表示。所有数据用
±s表示；用t检验判断均数差异显著性。结果
一、α-MSH对EGTA发热效应的影响：
侧脑室灌注EGTA引起家兔明显的发热，ΔT及TRI1显著高于ACSF对照组(P<0.01);事先给予α-MSH，再灌注EGTA，体温明显低于EGTA组(P<0.01)；而α-MSH组与ACSF对照组之间ΔT及TRI1均无显著差异(P>0.05)(见表2、图1)。
表2 α-MSH对EGTA发热反应的影响
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Tab 2 Effect of α-MSH on febrile response to EGTA (
±s, n=5) Group
ΔT (℃)
TRI1
ACSF
0.20±0.07
0.08±0.06
EGTA
1.16±0.18Δ
0.78±0.05Δ
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α-MSH+EGTA
0.80±0.14Δ*
0.51±0.11Δ*
α-MSH
0.12±0.08
0.03±0.02
* P<0.01， vs EGTA group；ΔP<0.01， vs ACSF group
Fig 1 Mean changes of colonic temperature among various groups
, 百拇医药
图1 各组平均体温反应曲线变化
表3 α-MSH对下丘脑神经细胞[Ca2+]i含量的影响
Tab 3 Effect of α-MSH on intracellular Ca2+ content in isolated hypothalamic cells (x±s) Group
n
Medium
[Ca2+]i (nmol/L)
Control
5
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Hanks
175.15±14.23
EGTA
4
Hanks
+EGTA
64.15±6.20* *
α-MSH+EGTA
4
Hanks
+EGTA+α-MSH
64.40±6.31#
, 百拇医药
α-MSH
5
Hanks
+α-MSH
178.47±10.99
# P>0.05, vs EGTA group; * *P<0.01, vs control group
二、α-MSH对下丘脑神经细胞[Ca2+]i含量的影响：
从表3可以看出，向Hanks液悬浮的细胞液中加入0.4 mmol/L EGTA(终浓度)，则[Ca2+]i含量明显下降(P<0.01); 在含有0.4 mmol/L EGTA的Hanks液悬浮的细胞液中，加入125 μg/L α-MSH，其细胞[Ca2+]i浓度与EGTA组比较无显著差异(P>0.05); 向Hanks液悬浮的细胞液中加入125 μg/L α-MSH也不影响细胞[Ca2+]i含量(P>0.05)。
, 百拇医药
三、α-MSH对下丘脑神经细胞释放CRH的影响：
从表4可见，EGTA可刺激下丘脑细胞释放CRH，其含量明显高于对照组(P<0.05)；在含有EGTA的细胞培养液中，加入α-MSH，培养上清液中CRH含量明显低于EGTA组(P<0.05)；单加入α-MSH，其上清中CRH含量与对照组无显著差异(P>0.05)。
表4 α-MSH对下丘脑细胞释放CRH的影响
Tab 4 Effect of α-MSH on CRH release from hypothalamic cells in vitro (
±s) Group
n
CRH (μg/L)
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Control
9
0.21±0.03
EGTA
10
0.28±0.08
α-MSH+EGTA
8
0.19± 0.05*
α-MSH
9
0.27±0.21
, 百拇医药
*P<0.05, vs EGTA group；CRH=corticotropin releasing hormne讨论
α-MSH具有很强的解热作用，静脉内、侧脑室、腹中隔注入α-MSH均能显著抑制内毒素或内生致热原性发热[2，6]，但α-MSH对EGTA发热的作用至今未见报道。本实验观察到α-MSH对EGTA引起的体温升高有明显的解热作用，而α-MSH对正常体温无影响。本实验室先前的研究发现，EGTA由于络合了中枢Ca2+，从而降低下丘脑神经细胞[Ca2+]i，导致下丘脑中枢发热介质cAMP含量增加，引起体温升高。提出“下丘脑细胞内Ca2+↓…>cAMP↑”可能是EGTA性发热的重要机制[1]。那么，α-MSH是否通过改变下丘脑细胞内Ca2+ 而抑制EGTA发热的？实验结果表明，α-MSH既不影响正常下丘脑细胞[Ca2+]i ，也不影响EGTA对下丘脑细胞[Ca2+]i的作用。说明α-MSH的解热作用不是通过改变中枢细胞[Ca2+]i而实现的。
, 百拇医药
近年来，学者发现促皮质激素释放激素(corticotrophin releasing hormone, CRH)介导发热反应。白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)与离体下丘脑组织培养能诱生CRH；CRH抗体或CRH受体拮抗剂均能阻断IL-1β引起的发热[7]。给动物注射内毒素可致室旁核CRH mRNA表达增加[8]。CRH被认为是重要的中枢发热介质之一。因此我们设想，α-MSH可能通过影响下丘脑细胞释放CRH而抑制EGTA发热。实验发现，EGTA与下丘脑神经细胞体外培养，可使培养上清液中CRH含量明显升高，而预先加入α-MSH，则培养上清中CRH含量又回降至对照组水平。说明α-MSH抑制中枢CRH的释放可能是EGTA发热的主要机制之一；也证实了中枢CRH的产生和释放增加可能是EGTA性发热的重要因素之一。
* 国家自然科学基金资助 (39500059)
, 百拇医药
参考文献
1 王华东，李楚杰，屈洋. 下丘脑[Ca2+]i、cAMP在家兔EGTA性发热机制中的作用. 中国病理生理杂志，1996，12(4):402.
2 Davidson J, Milton AS, Rotondo D. α-melanocyte stimulating hormone suppresses fever and increase in plasma levels of prostaglandin E2 in the rabbit. J Physiol, 1992, 451:591.
3 Hhang QH, Hruby VJ, Tatro JB. Systemic alpha-MSH suppresses LPS fever via central melanocortin receptors independently of its suppression of corticosterone and IL-6 release. Am J Physiolol, 1998,275(2 Pt 2): R524.
, http://www.100md.com
4 胡巢凤，王华东，王彦平.α-MSH对内毒素性发热效应及下丘脑cAMP含量的影响. 中国病理生理杂志，1998，14(6):576.
5 张均田，李锡明，石成璋，等.用Fura-2/AM测定细胞内游离钙浓度的方法. 中国药学杂志，1991，26(17):655.
6 Clark WG, Holdeman M, Lipton JM. Analysis of the antipyretic action of α-melanocyte-stimulating hormone in rabbits. J Physiol, 1985, 359:459.
7 李楚杰.发热.见：杨惠玲，潘景轩，吴伟康主编：高级病理生理学.第1版. 北京：科学出版社，1998.86～112.
8 Vellucci SV, Parrott RF. Bacterial endotoxin-induced gene expression in the choroid plexus and paraventricular and supraopatic hypothamic nuclei of the sheep. Brain Res Mol Res, 1996, 43(1-2):41.
1998年9月19日收稿，1999年1月20日修回, 百拇医药
单位：暨南大学医学院 病理生理教研室 发热研究室(广州 510632)
关键词：黑素细胞刺激素；发热；促皮质激素释放激素
中国病理生理杂志990404 摘要 目的：观察α-MSH对EGTA发热反应的作用及其可能机制。方法：建立EGTA发热模型；在离体条件下，应用Fura-2荧光指示剂测定细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i);体外培养下丘脑神经细胞。结果：α-MSH能明显抑制EGTA性发热反应(P<0.01)；EGTA可以降低下丘脑神经细胞[Ca2+]i 水平(P<0.01)，但α-MSH不影响正常下丘脑神经细胞[Ca2+]i及EGTA对下丘脑神经细胞[Ca2+]i 的作用(P>0.05)；EGTA可刺激体外培养的下丘脑神经细胞释放CRH (P<0.05)，而α-MSH能抑制EGTA的这种作用 (P<0.05)。结论：α-MSH抑制中枢发热介质CRH的产生可能是降低EGTA发热反应的主要机制之一；中枢CRH的产生和释放增加可能是EGTA性发热的一个重要因素。
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The effect of α-MSH on EGTA-induced fever
HU Chao-Feng, WANG Yan-Ping, WANG Hua-Dong, LI Chu-Jie
Department of Pathophysiology, Research Institute of Fever, Medical
College of Jinan University, Guangzhou (510632)
Abstract AIM: To investigate the effect of α-MSH on fever induced by EGTA and its possible mechanism.METHODS:EGTA evoked a rise in colonic temperature. The intracellular free calcium([Ca2+]i) in isolated cells from hypothalamus was examined using spectrofluormetry with fura-2 and hypothalamic cells were cultured in vitro.RESULTS:α-MSH could markedly suppressed febrile response (P<0.01). The level of [Ca2+]i decreased while cells were exposed to medium containing EGTA (P<0.01),but α-MSH had no effect on this decrease action (P>0.05). The corticotropin releasing hormone (CRH) content of culture supernatant significantly elevated when hyperthermic cells were incubated in the presence of EGTA (P<0.05).CONCLUSION:The effect of α-MSH preventing CRH production in the hypothalamus may play a main role in α-MSH antipyretic action and CRH may be an important factor in the mechanism of EGTA-induced fever.
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MeSH Melanocyte-stimulating hormone; Fever; Corticotrophin releasing hormone
本实验室早先的研究发现，家兔侧脑室灌注EGTA络合中枢神经细胞外Ca2+，降低下丘脑细胞内Ca2+含量引起体温升高，若灌注CaCl2则抑制EGTA性发热[1]。已知α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte-stimulating hormone, α-MSH)是一种具有显著解热作用的神经肽，能降低内毒素、IL-1、肿瘤坏死因子等多种致热原引起的体温升高[2，3，6]。然而, α-MSH对EGTA性发热反应的作用尚待探讨。本研究旨在观察α-MSH对家兔EGTA性发热反应的影响及其可能机制，这对于进一步揭示α-MSH的解热机制有重要理论意义。
材料和方法
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一、实验动物及侧脑室插管：
健康封闭群新西兰家兔20只，体重2.1～3.0 kg，雌雄不拘。侧脑室插管方法见前文[4]。
二、实验分组及步骤：
侧脑室灌注物及分组见表1：试剂均用人工脑脊液(ACSF)稀释。观察体温变化1 h。
表1 各组灌注物
Tab 1 Perfusate of each group Group
Perfusate (mL)
ACSF
ACSF 0.25
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EGTA
4 mmol/L EGTA 0.2+ACSF 0.05
α-MSH+EGTA
200 ng α-MSH 0.05+4 mmol/L EGTA 0.2
α-MSH
200 ng α-MSH 0.05+ACSF 0.2
三、下丘脑神经细胞[Ca2+]i测定[5]:
1.神经细胞悬液制备：家兔迅速断头,取下丘脑组织置冰冷的Hanks液中除去血管和残留血液，转入含0.5 mL冰冷Hanks液的烧杯中剪碎，再移入试管，加适量0.125%胰酶，37℃水浴振荡20 min。用0.5 mL含小牛血清的DMEM培养液终止消化，经200目过筛后，1500 r/min离心5 min，弃上清液，沉淀用DMEM培养液悬浮。取少量细胞悬液，用台盼蓝排斥反应检测细胞存活率在90%以上，调整细胞密度至1×109/L。
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2.Fura-2/AM负载：在上述制备的细胞悬液中加入Fura-2/AM (终浓度为5 μg, 37℃水浴振荡温育50 min，1500 r/min离心5 min，弃上清液，沉淀用Hanks液冲洗2次。实验分4组：Ⅰ组用Hanks液悬浮细胞；Ⅱ组用0.4 mmol/L EGTA的Hanks液；Ⅲ组为含0.4 mmol/L EGTA和125 μg/L α-MSH的Hanks液；Ⅳ组为含125 μg/L α-MSH的Hanks液悬浮细胞。置37℃温育10 min后，用荧光分光光度计检测。
四、下丘脑神经细胞培养：
下丘脑神经细胞悬液制备法与上面相同。沉淀细胞用含10%小牛血清的DMEM培养液培养，调整细胞密度至1×1010/L。实验分4组：对照组：用DMEM培养液培养；EGTA组：加2 mmol/L EGTA的DMEM培养液；α-MSH+EGTA组：含有10-4 mmol/Lα-MSH和2 mmol/L EGTA的DMEM培养液；α-MSH组：加10-4 mmol/L α-MSH的DMEM培养液细胞。置体积分数为37℃、5%CO2培养箱中培养1 h。离心、收集上清，置-20℃冰箱保存待测。用放射免疫方法测定上清CRH含量。
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五、体温反应指标及数据处理：
体温反应指标用平均体温反应曲线，1 h体温反应指数(TRI1)及最大体温反应高度ΔT(℃)表示。所有数据用
±s表示；用t检验判断均数差异显著性。结果一、α-MSH对EGTA发热效应的影响：
侧脑室灌注EGTA引起家兔明显的发热，ΔT及TRI1显著高于ACSF对照组(P<0.01);事先给予α-MSH，再灌注EGTA，体温明显低于EGTA组(P<0.01)；而α-MSH组与ACSF对照组之间ΔT及TRI1均无显著差异(P>0.05)(见表2、图1)。
表2 α-MSH对EGTA发热反应的影响
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Tab 2 Effect of α-MSH on febrile response to EGTA (
±s, n=5) GroupΔT (℃)
TRI1
ACSF
0.20±0.07
0.08±0.06
EGTA
1.16±0.18Δ
0.78±0.05Δ
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α-MSH+EGTA
0.80±0.14Δ*
0.51±0.11Δ*
α-MSH
0.12±0.08
0.03±0.02
* P<0.01， vs EGTA group；ΔP<0.01， vs ACSF group
Fig 1 Mean changes of colonic temperature among various groups
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图1 各组平均体温反应曲线变化
表3 α-MSH对下丘脑神经细胞[Ca2+]i含量的影响
Tab 3 Effect of α-MSH on intracellular Ca2+ content in isolated hypothalamic cells (x±s) Group
n
Medium
[Ca2+]i (nmol/L)
Control
5
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Hanks
175.15±14.23
EGTA
4
Hanks
+EGTA
64.15±6.20* *
α-MSH+EGTA
4
Hanks
+EGTA+α-MSH
64.40±6.31#
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α-MSH
5
Hanks
+α-MSH
178.47±10.99
# P>0.05, vs EGTA group; * *P<0.01, vs control group
二、α-MSH对下丘脑神经细胞[Ca2+]i含量的影响：
从表3可以看出，向Hanks液悬浮的细胞液中加入0.4 mmol/L EGTA(终浓度)，则[Ca2+]i含量明显下降(P<0.01); 在含有0.4 mmol/L EGTA的Hanks液悬浮的细胞液中，加入125 μg/L α-MSH，其细胞[Ca2+]i浓度与EGTA组比较无显著差异(P>0.05); 向Hanks液悬浮的细胞液中加入125 μg/L α-MSH也不影响细胞[Ca2+]i含量(P>0.05)。
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三、α-MSH对下丘脑神经细胞释放CRH的影响：
从表4可见，EGTA可刺激下丘脑细胞释放CRH，其含量明显高于对照组(P<0.05)；在含有EGTA的细胞培养液中，加入α-MSH，培养上清液中CRH含量明显低于EGTA组(P<0.05)；单加入α-MSH，其上清中CRH含量与对照组无显著差异(P>0.05)。
表4 α-MSH对下丘脑细胞释放CRH的影响
Tab 4 Effect of α-MSH on CRH release from hypothalamic cells in vitro (
±s) Groupn
CRH (μg/L)
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Control
9
0.21±0.03
EGTA
10
0.28±0.08
α-MSH+EGTA
8
0.19± 0.05*
α-MSH
9
0.27±0.21
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*P<0.05, vs EGTA group；CRH=corticotropin releasing hormne讨论
α-MSH具有很强的解热作用，静脉内、侧脑室、腹中隔注入α-MSH均能显著抑制内毒素或内生致热原性发热[2，6]，但α-MSH对EGTA发热的作用至今未见报道。本实验观察到α-MSH对EGTA引起的体温升高有明显的解热作用，而α-MSH对正常体温无影响。本实验室先前的研究发现，EGTA由于络合了中枢Ca2+，从而降低下丘脑神经细胞[Ca2+]i，导致下丘脑中枢发热介质cAMP含量增加，引起体温升高。提出“下丘脑细胞内Ca2+↓…>cAMP↑”可能是EGTA性发热的重要机制[1]。那么，α-MSH是否通过改变下丘脑细胞内Ca2+ 而抑制EGTA发热的？实验结果表明，α-MSH既不影响正常下丘脑细胞[Ca2+]i ，也不影响EGTA对下丘脑细胞[Ca2+]i的作用。说明α-MSH的解热作用不是通过改变中枢细胞[Ca2+]i而实现的。
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近年来，学者发现促皮质激素释放激素(corticotrophin releasing hormone, CRH)介导发热反应。白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)与离体下丘脑组织培养能诱生CRH；CRH抗体或CRH受体拮抗剂均能阻断IL-1β引起的发热[7]。给动物注射内毒素可致室旁核CRH mRNA表达增加[8]。CRH被认为是重要的中枢发热介质之一。因此我们设想，α-MSH可能通过影响下丘脑细胞释放CRH而抑制EGTA发热。实验发现，EGTA与下丘脑神经细胞体外培养，可使培养上清液中CRH含量明显升高，而预先加入α-MSH，则培养上清中CRH含量又回降至对照组水平。说明α-MSH抑制中枢CRH的释放可能是EGTA发热的主要机制之一；也证实了中枢CRH的产生和释放增加可能是EGTA性发热的重要因素之一。
* 国家自然科学基金资助 (39500059)
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参考文献
1 王华东，李楚杰，屈洋. 下丘脑[Ca2+]i、cAMP在家兔EGTA性发热机制中的作用. 中国病理生理杂志，1996，12(4):402.
2 Davidson J, Milton AS, Rotondo D. α-melanocyte stimulating hormone suppresses fever and increase in plasma levels of prostaglandin E2 in the rabbit. J Physiol, 1992, 451:591.
3 Hhang QH, Hruby VJ, Tatro JB. Systemic alpha-MSH suppresses LPS fever via central melanocortin receptors independently of its suppression of corticosterone and IL-6 release. Am J Physiolol, 1998,275(2 Pt 2): R524.
, http://www.100md.com
4 胡巢凤，王华东，王彦平.α-MSH对内毒素性发热效应及下丘脑cAMP含量的影响. 中国病理生理杂志，1998，14(6):576.
5 张均田，李锡明，石成璋，等.用Fura-2/AM测定细胞内游离钙浓度的方法. 中国药学杂志，1991，26(17):655.
6 Clark WG, Holdeman M, Lipton JM. Analysis of the antipyretic action of α-melanocyte-stimulating hormone in rabbits. J Physiol, 1985, 359:459.
7 李楚杰.发热.见：杨惠玲，潘景轩，吴伟康主编：高级病理生理学.第1版. 北京：科学出版社，1998.86～112.
8 Vellucci SV, Parrott RF. Bacterial endotoxin-induced gene expression in the choroid plexus and paraventricular and supraopatic hypothamic nuclei of the sheep. Brain Res Mol Res, 1996, 43(1-2):41.
1998年9月19日收稿，1999年1月20日修回, 百拇医药