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钟叔平 曹 亮 吴文翰
|基因|p53|基因表达|抗体|印迹法|蛋白质,人野生型p53cDNA的克隆、表达和意义*
作者：钟叔平 曹 亮 吴文翰
单位：钟叔平 汕头大学医学院生物化学教研室(汕头 515031)；曹 亮 吴文翰(香港大学微生物学系)
关键词：；基因；p53；基因表达；抗体；印迹法；蛋白质
人野生型p53 cDNA的克隆
摘 要 目的：为探讨肿瘤细胞wt p53蛋白功能失活机制的研究，检测肿瘤患者血清抗p53抗体辅助临床诊断提供人wt p53蛋白。方法：将人wt p53基因cDNA片段插入到大肠杆菌表达载体pQE-30中，得到重组表达质粒pQE30-p53；用pQE30-p53重组质粒转化大肠杆菌M15细胞，转化菌落经PCR扩增和BamHⅠ、Xba Ⅰ酶切证实p53基因插入。IPTG诱导大肠杆菌表达wt p53蛋白，通过Ni-NTA亲和层析柱纯化，SDS-PAGE分离。结果：IPTG诱导后的大肠杆菌出现明显的53 kD蛋白带，免疫印迹进一步证实：大肠杆菌可表达高水平的人wt p53蛋白。结论：这种原核细胞表达的人wt p53蛋白具有天然的p53蛋白的抗原性，可用于p53蛋白的体外分析。
Cloning, expression and signification of human
wild type p53 cDNA ......
单位：钟叔平 汕头大学医学院生物化学教研室(汕头 515031)；曹 亮 吴文翰(香港大学微生物学系)
关键词：；基因；p53；基因表达；抗体；印迹法；蛋白质
人野生型p53 cDNA的克隆
摘 要 目的：为探讨肿瘤细胞wt p53蛋白功能失活机制的研究，检测肿瘤患者血清抗p53抗体辅助临床诊断提供人wt p53蛋白。方法：将人wt p53基因cDNA片段插入到大肠杆菌表达载体pQE-30中，得到重组表达质粒pQE30-p53；用pQE30-p53重组质粒转化大肠杆菌M15细胞，转化菌落经PCR扩增和BamHⅠ、Xba Ⅰ酶切证实p53基因插入。IPTG诱导大肠杆菌表达wt p53蛋白，通过Ni-NTA亲和层析柱纯化，SDS-PAGE分离。结果：IPTG诱导后的大肠杆菌出现明显的53 kD蛋白带，免疫印迹进一步证实：大肠杆菌可表达高水平的人wt p53蛋白。结论：这种原核细胞表达的人wt p53蛋白具有天然的p53蛋白的抗原性，可用于p53蛋白的体外分析。
Cloning, expression and signification of human
wild type p53 cDNA ......