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编号:10271442
急性心肌梗塞患者外周血活性T淋巴细胞亚群的研究
http://www.100md.com 《中国病理生理杂志》 1999年第5期
     作者:王巍嵩 张志方吕 品 张春艳 李永勇

    单位:王巍嵩 吕 品 暨南大学医学院第一附属医院心内科(广州 510632);张志方 张春艳 李永勇中山医科大学基础医学院

    关键词:心肌梗塞;淋巴细胞转化;HLA-DR抗原

    中国病理生理杂志990516 摘 要 目的:研究15例急性心肌梗塞患者外周血淋巴细胞亚群和活性标志的变化。方法:流式细胞仪技术。结果:急性心肌梗塞患者外周血淋巴细胞DR+DR+百分率明显高于对照组,DR+无明显变化,DR+/DR+比值显著增高;DR+细胞占相应亚群的百分率显著增高。结论:急性心肌梗塞患者存在免疫功能紊乱,辅助性T淋巴细胞处于高活性状态。
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    Study of activated T-lymphocyte subsets of peripheral blood

    in patients with acute myocardial infarction

    WANG Wei-Song1,ZHANG Zhi-Fang2,LU Pin1,ZHANG Chun-Yan2,LI Yong-Yong2

    1Department of Cardiology, First Affiliated Hospital of Medical College of Jinan University, Guangzhou(510632)

    2School of Preclinical Medicine of Sun Yat-sen University of Medical Sciences
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    Abstract AIM: The peripheral blood T-lymphocytes subsets and its active markers in patients with acute myocardial infarction were studied.METHODS:Low cytometric analysis.RESULTS:The percentages of DR+ and DR+ T-lymphocytes and the ratio of DR+/DR+ were significantly increased in patients with acute myocardial infarction. WhereDR+ T-lymphocytes had no marked difference between normal controls and patients with acute myocardial infarction.CONCLUSION:The disturbance of activated T-lymphocyte subsets and the highly state of activated T-helper lymphocyte were found in patients with acute myocardial infarction.
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    MeSH Myocardial infarction; Lymphocyte transformation; HLA-DR antigens

    多年来人们对与冠心病有关的病理生理变化作了大量的研究,除了高血压、高血脂及高血糖等因素外,免疫损伤在冠心病中的作用已日益受到重视。实验表明,发生粥样硬化的冠状动脉内膜及斑块中有补体和免疫球蛋白沉积以及T细胞白细胞介素2受体(IL-2R)表达,急性心肌梗塞(acute myocardial infarction, AMI)多项细胞免疫指标有明显变化[1];机体免疫功能紊乱可能参与心肌梗塞的发生,间接或直接引起梗塞面积扩大或并发症的发生[2,3]。为进一步探讨AMI患者细胞免疫功能的变化,本研究利用双色免疫荧光标记流式细胞仪技术观察急性心肌梗塞患者外周血活性T淋巴细胞亚群的变化。

    材料与方法

    一、研究对象:
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    根据ISFC/WHO诊断标准,选择发病5 d内AMI病人15例,其中男性11例,女性4例,平均年龄(66.4±9.5)岁,所有患者均无免疫性疾病和近期感染。正常对照组12例,其中男性8例,女性4例,平均年龄(60.7±8.7)岁,全部来自于健康体检,体检和实验室检查确认无心脑血管及肝肾等疾病。

    二、试剂:

    小鼠抗人荧光标记单克隆抗体anti-CD3、anti-CD4、anti-CD8、anti-HLA-DR等均购自美国BDIS公司(Becton Dickinson Immunocytometry Systems, San Jose)

    三、淋巴细胞荧光抗体标记:

    新鲜的全血30 μL与抗体10 μL混合,室温孵育30 min。红细胞裂解液(0.155 mol/L NH4Cl,0.01 mol/L KHCO3,0.1 mol/L EDTA, pH 7.4)裂解红细胞,离心获取有核细胞,用PBS洗涤两次后,加入anti-IgG.FITC(异硫氰酸荧光素)10 μL,室温孵育30 min, PBS洗涤。第二次荧光标记方法同上,第二次标记荧光单抗为anti-IgG.PE。PBS洗涤后用1%多聚甲醛固定10 min后,用流式细胞仪分析。
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    四、流式细胞仪数据获取和分析:

    全部数据用流式细胞仪(FAC StarPlus,美国BD公司)和软件LYSYS Ⅱ进行双色荧光参数获取和分析,简述如下:在前散射(FSC)和侧散射(SSC)的二维Dot-plot图中,划出淋巴细胞区,然后对淋巴细胞作FITC和PE的荧光强度检测,荧光Ⅰ(FL1)为FITC,滤过片为(530±10) nm带通,荧光Ⅱ(FL2)为PE,滤光片为(575±10) nm带通。数据分析时,在确定每次检测阳性细胞百分率之前,根据isotype的非特异性荧光强度设定界限,以确定双阴性、双阳性和单阳性区。

    五、统计学处理:

    实验数据以表示,用GB-Stat数据统计软件分析实验数据,两组均数比较使用Student't检验。
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    结果

    (一)AMI患者外周血T细胞亚群和HLA-DR(简称DR)表达水平的变化:由表1可看出,AMI患者外周血无明显改变,显著低于对照组(P<0.05),和DR显著高于对照组(P<0.01),/比值明显低于对照组(P<0.01)。表明AMI患者细胞免疫功能可能受到抑制。

    表1 急性心肌梗塞患者外周血T细胞亚群和HLA-DR表达水平的改变
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    Tab 1 Changes in peripheral blood T-cell subsets and expressions of

    HLA-DR on T-cell in acute myocardial infarction (AMI)()

    n%%%

    DR+%/
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    Control

    12

    62.8±12.0

    40.8±9.4

    23.9±10.7

    17.8±9.6

    1.7±0.6

    AMI

    15

    68.4±8.0

    29.1±13.2*

    46.6±19.4**
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    36.2±12.7**

    0.7±0.3**

    *P<0.05,**P<0.01,vs control

    (二)AMI患者细胞免疫功能状态的改变:见表2结果,DR+DR+显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),DR+未见明显改变,DR+/DR+显著高于对照组(P<0.01)。说明AMI患者活性T淋巴细胞平衡失调。
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    表2 急性心肌梗塞患者细胞免疫状态的变化

    Tab 2 Changes of immune status in patients with AMI()

    nDR+(%)DR+(%)DR+(%)DR+/DR+
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    Control

    12

    8.6±7.7

    2.0±1.8

    7.0±5.4

    0.3±0.3

    AMI

    15

    21.3±9.2**

    14.4±8.5**

    7.2±4.2

    2.0±0.8**
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    *P<0.05,**P<0.01, vs control

    (三)活性T淋巴细胞占总T淋巴细胞或其相关亚群比例的改变:见表3,DR+DR+在总T淋巴细胞中所占比例均高于对照组(P<0.05或P<0.01),DR+比例也高于对照组(P<0.01),DR+中所占比例与正常对照组无显著差异。
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    表3 AMI患者活性淋巴细胞占T淋巴细胞或其相关亚群百分率的变化

    Tab 3 Changes of the percentage of activated lymphocytes to T-lymphocyte

    or relative T-lymphocyte subsets in patients with AMI ()

    nDR+/DR+/DR+/DR+/DR+/
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    Control

    12

    11.3±8.9

    3.0±11.0

    10.0±7.8

    4.8±17.8

    24.2±9.2

    AMI

    15

    31.1±17.5*

    21.2±17.5**

    10.7±7.0
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    47.9±33.4**

    16.9±12.7

    *P<0.05,**P<0.01,vs control

    讨论

    临床上,AMI患者合并严重的呼吸系统感染是导致病情加重的重要原因之一,但患者并非全部合并梗塞后心力衰竭,因而无法将AMI后的感染完全归因于肺淤血。近年来,免疫功能变化在AMI患者发病过程中的作用已日益受到重视。本研究结果表明,AMI患者外周血无明显改变,显著减少,显著增加,/比值减低,与有关报道一致[4,5];Syrjala[6]的报道还表明,AMI患者/比值持续低者,多提示预后严重。
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    T淋巴细胞亚群中发挥免疫调节作用的主要是辅助性T细胞(helper T lymphocytes, TH)和抑制性T细胞(suppressor T lymphocytes, TS),临床上一般通过检测/细胞的比值改变来反映TH/Ts细胞比值的改变,从而判断疾病的免疫异常特征。但是,由于细胞和细胞都不是功能一致的细胞群,如T细胞可分为TH、诱导性T细胞(inducer T lymphocytes, T1)和迟发型变态反应性T细胞(delayed type hypersensitivity T lymphocytes, TDTH)3种,其中TH细胞仅占15%~30%;而T细胞也分为TS、反抑制性T细胞(contra-suppressor T lymphocytes, TCS)和细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocytes, TC)三种,同时CD8抗原也存在于NK细胞、单核细胞和中性粒细胞上,即存在高度异质性。因此,单一抗原(CD抗原)检测出的T淋巴细胞亚群并不能准确的反映出机体的免疫功能状态。
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    各类淋巴细胞发挥功能与其活性有关,HLA-DR作为T淋巴细胞的表面活性标志,在免疫调节中起重要作用,如调节TH细胞辅助抗体(包括自身抗体)的产生、各种淋巴因子的生成、TS细胞功能的诱导及成为T。细胞的靶抗原引起靶细胞溶解等,有学者已开始检测该抗原在T细胞及其亚群中的分布以进一步确定机体的免疫功能状态及其与疾病的关系[7,8]。我们采用双色免疫荧光标记流式细胞仪技术进一步检测了AMI患者淋巴细胞亚群及其活性标志的变化。结果表明:DR+细胞无明显改变,DR+DR+细胞显著增加,DR+/DR+比值显著增高;DR+/DR+/DR+/比值显著增高,DR+/DR+/比值无显著变化。提示AMI患者活性T淋巴细胞亚群平衡失调,且主要是由于细胞增加所致。由于DR抗原在细胞中主要表达TH细胞上,在细胞亚群中主要表达在TS细胞上,从而进一步提示AMI患者外周血TH细胞处于高活性状态,而TS细胞的活性水平无明显改变。结合单色免疫荧光标记实验结果,说明T细胞的减少主要是T1和TDTH的减少,细胞增加则可能是TCS和TC增加,也可能与其异质性较高有关,因此一些非T非B细胞亦表达抗原。类似结果见于系统性红斑狼疮[7]和Graves[8]病等自身免疫性疾病,有学者认为外周血TH细胞涉及自身抗体的产生[9],因此AMI患者存在着免疫功能紊乱现象,并很可能有自身免疫发病机制的存在。
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    我们的实验结果表明,用/比值代表TH/TS细胞比值可能存在一定的局限性,用DR+/DR+比值代表是否更合理也有待进一步探讨;但总的来说,AMI患者不仅存在着T淋巴细胞亚群紊乱,同时也存在着活性T淋巴细胞功能紊乱,这些异常在AMI发病中的作用应引起重视。Serneri等[10]的报道也支持我们的观点:不稳定性心绞痛患者急性发作期,外周血表达DR显著增加,血浆可溶性IL-2R显著增加,而稳定性心绞痛患者则无此变化。
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    参考文献

    1 Blum A, Sclarovsky S, Rehavia E, et al. Levels of lymphocyte subpopulation, interleukin-1β and soluble interleukin-2 receptor in acute myocardial infarction. Am Heart J, 1994, 27(3):1226.

    2 Hansson GH. Immune and inflammatory mechanisms in the development of atherosclerosis. Br Heart J, 1993, 69(Suppl):38.

    3 Kaufman HS, Kvitash VI. Immunologic abnormalities associater with acute ischemic heart disease. Ann Allergy, 1989, 63:287.
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    4 Blum A, Sclarovxky, S, Rehavia E, et al. Levels of T-lymphocytes subpopulations, interleukin-1β, and soluble interleukin-2 receptor in acute myocardial infarction. Am Heart J, 1994, 127:1226.

    5 Che Jun, Zhu Liwei, Li Kemin, et al. Alterations of the percentage of lymphocytes in patients with acute myocardial infarction and clinical evaluation. Chin Med J, 1995, 108(10):784.

    6 Syrjala H. Low / T lymphocyte ratio in acute myocardial infarction. Clin Exp Immunol, 1991, 83:326.
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    7 Raziuddin S, Nur MA, Alwabel AA. Increased circulating HLA-DR+ cell in systemic lupuserythematosus. Scand J Immunol, 1990, 31:139.

    8 John YC, Paul G. ActivatedT lymphocytes and their subsets in autoimmune thyroid diseased. J Clin Endocrinol Metab, 1986, 62:403.

    9 Stuant FS, Ellis LR. Human T-cell subsets in health and disease. Sprimger Semin Immunopathol, 1984,7:9.

    10 Serneri GGN, Prisco D, Martini F, et al. Acute T-cell activation is detectable in unstable angina. Circulation, 1995, (7):1806.

    (1998年9月20日收稿,1999年1月29日修回), http://www.100md.com