支气管哮喘病人外周血单核/巨噬细胞IL-15的分泌水平
作者：吕冬梅 黄瑾 吕春平
单位：吕冬梅 黄瑾 白求恩医科大学附属第二临床医学院；吕春平 预防医学院(长春 130041)
关键词：白细胞介素15；单核细胞；巨噬细胞；哮喘
中国病理生理杂志/990716 摘 要 目的和方法：利用改良的MTT比色法测定CTLL2细 胞增殖程度而确定IL-15水平的方法，测定了27例支气管哮喘急性发作期病人和40例健康人 外周血单核/巨噬细胞培养上清中IL-15的分泌水平。结果：无论刺激与否 ，哮喘病人IL-15水平均高于健康对照组，两组差异显著(P<0.05)。结论：哮喘病人外周血单核/巨噬细胞IL-15的分泌水平异常可能参与了哮喘的发病。
Levels of IL-15 in supernatant of monocytes/macrophages in
, 百拇医药
pat ients with bronchial asthma
LU Dong-Mei, HUANG Jin,LU Chun-Ping
The Second Teaching Hospital of Norman Bethune University of Medical Sc iences, Changchun (130041)
Abstract AIM and METHODS:：Interleukin (IL-15) is a newly descri bed cytokine with an action similar to that of IL-2. In this study, the levels o f IL-15 in the supernatants of LPS-stimulated (or not) monocytes/macrophages wer e examined in 27 patients with bronchial ashma at acute phase, and were compared with healthy controls. RESULTS：Signifcant elevation of IL-15 was observed in supernatants of monocytes/macrophages from patients with asthma as compared with that in normal individuals, whether LPS existed or not.CONCL USION：IL-15 plays a role in asthma.
, 百拇医药
MeSH Interleukin-15; Monocytes; Macrophages; Asthma
支气管哮喘(哮喘)是以病变局部众多免疫炎症细胞渗出为主要病理改 变的变态反应性疾病。但是导致哮喘发生的确切机制尚未明了。IL-15是参与机体发生免疫 变化的最主要细胞之一。IL-15是新近 发现的由单核/巨噬细胞分泌的一种重要淋巴因子。目前国外有研究证实，IL-15参与单核/ 巨噬细胞与T、B淋巴细胞之间的调控。本文探讨哮喘病人单核/巨噬细胞分泌IL-15的水平， 旨在从IL-15分泌的情况中，进一步了解单核/巨噬细胞在该病发病中的参与作用，为揭示其 发病机制提供依据。
材料与方法
1.研究对象：根据1992年全国哮喘会议修订的哮喘诊断标准[1]确诊的支气管哮喘 病人27例，其中男13例，女14例，平均年龄(37.4±11.9)岁，患者均为哮喘急性发作期； 对照组40例，男31例，女9例，平均年龄(29.9±6.6)岁，为体检健康者。
, http://www.100md.com
2.血标本的收集及IL-15的分泌：取静脉血加肝素抗凝，分离单个核细胞(PBMC)，用含10% 小牛血清的IMDM全培养基(Sigma产品)调整细胞数至1×109/L，在24孔培养板中，每孔加 入1 mL PBMC悬液，孵育2 h，吸去非贴壁细胞，并用Hanks液轻轻吹打洗涤，孔内贴壁细胞 即为单核/巨噬细胞。加入全培养基，并在刺激孔内加入大肠杆菌内毒素(LPS)8 μg/mL(上 海生物制品所)，在-30℃冻存，待测IL-15水平。
3.IL-15的测定[2]：将CTLL2细胞(长春生物制品所提供，本实验室长期传代培 养)用Hanks液洗涤2次，调整细胞数至1×109/L，在40孔细胞培养板中，实验孔加入50 μL CTLL2细胞及IMDM全培养基，在37℃、5%CO2条件下孵育20 h，以MTT试验测定CTLL 2增殖程度而确定IL-15的水平。
, http://www.100md.com
4.统计处理：数据以
±s表示，显著性检验用t检验及t'检验。
结 果
本研究结果表明，23例急性发作期哮喘病人外周血单核/巨噬细胞在体外培养后其上清中IL- 15水平显著高于健康对照组，P<0.01；经LPS刺激后，两组分泌IL-15的水平均有提高 ，但仍以哮喘组为著，P<0.05，见表1。
表1 外周血单核/巨噬细胞在不同状态下IL-15分泌水平
Tab 1 The level of IL-15 derived from monocyte/macrophage in
deferent station (U/L,±s)
, http://www.100md.com
Without LPS
With LPS
Control
6.95±4.27(n=40)
8.60± 4.22(n=37)
Asthma
11.07±5.15*(n=23)
20.60±2.70*(n=27)
The level of IL-15 was expressed by the reference unit of our laboratory
, 百拇医药
*P<0.01, vs control group
讨 论
IL-15是单核/巨噬细胞活化过程中发现的一种可溶性因子，与IL-2有许多相似的生物学活性 ，参与对免疫效应细胞的调节作用，并可维持IL-2依赖细胞株CTLL2的增殖。支气管哮喘 是以病变局部变态反应性炎症改变为特点的过敏性疾病。若究其发病机制，必然要观察其过 敏原的提呈、应答细胞的活化及效应细胞的作用等各环节的情况。单核/巨噬细胞是抗原提 呈的主要细胞，即变态反应反生的最早启动部分。因此，探讨其功能状态是揭示哮喘发病机 制的重要环节之一。我们利用外周血单核/巨噬细胞体外培养，检测上清液中IL-15的产生水 平。结果发现， 自然状态下的哮喘组IL-15水平明显高于健康对照组(P<0.01)；经 LPS刺激后，结果亦然。Grabstein等[2]证实，重组猴IL-15可刺激PHA活化的外周 血T细胞的增殖，且刺激效应与IL-2相似(包括CD4+和CD8+亚群)。另外，Armitage等 [3]发现，IL-15同IL-2、IL-4及IL-10一样，可与CD40配体协同诱导由抗IgM或佛波酯 活化的B细胞发生增殖和分泌IgM、IgG1、IgA以及低水平的IgG2。因此，我们认为，哮 喘病 人T、B淋巴细胞活化并产生特异性抗体，与单核/巨噬细胞分泌IL-15增高可能相关。IL-15 增高促进了T、B淋巴细胞活化，在哮喘发病中是否发挥其作用及作用的确切机制，有待进一 步探讨。
, 百拇医药
参考文献
1 中华结核和呼吸杂志编辑委员会.支气管哮喘的定义、诊断、分期 和疗效的评定标准(试行草案).中华结核和呼吸杂志，1993，16(哮喘增刊)：5.
2 Grabstein KH, Eisenman J, Shanebeck K, et al. Cloning of a T cell grow th factor that interacts with the beta chain of the interleukin-2 recepor. Scien ce, 1994, 264:965.
3 Armitage RJ, Maceuff BM, Eisenman J, et al. IL-15 has stimulatory acti vity for the induction of B cell proliferation and differentiation. J Immunol, 1 995, 154:483.
(1997年11月13日收稿，1998年11月2日修回), http://www.100md.com
单位：吕冬梅 黄瑾 白求恩医科大学附属第二临床医学院；吕春平 预防医学院(长春 130041)
关键词：白细胞介素15；单核细胞；巨噬细胞；哮喘
中国病理生理杂志/990716 摘 要 目的和方法：利用改良的MTT比色法测定CTLL2细 胞增殖程度而确定IL-15水平的方法，测定了27例支气管哮喘急性发作期病人和40例健康人 外周血单核/巨噬细胞培养上清中IL-15的分泌水平。结果：无论刺激与否 ，哮喘病人IL-15水平均高于健康对照组，两组差异显著(P<0.05)。结论：哮喘病人外周血单核/巨噬细胞IL-15的分泌水平异常可能参与了哮喘的发病。
Levels of IL-15 in supernatant of monocytes/macrophages in
, 百拇医药
pat ients with bronchial asthma
LU Dong-Mei, HUANG Jin,LU Chun-Ping
The Second Teaching Hospital of Norman Bethune University of Medical Sc iences, Changchun (130041)
Abstract AIM and METHODS:：Interleukin (IL-15) is a newly descri bed cytokine with an action similar to that of IL-2. In this study, the levels o f IL-15 in the supernatants of LPS-stimulated (or not) monocytes/macrophages wer e examined in 27 patients with bronchial ashma at acute phase, and were compared with healthy controls. RESULTS：Signifcant elevation of IL-15 was observed in supernatants of monocytes/macrophages from patients with asthma as compared with that in normal individuals, whether LPS existed or not.CONCL USION：IL-15 plays a role in asthma.
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MeSH Interleukin-15; Monocytes; Macrophages; Asthma
支气管哮喘(哮喘)是以病变局部众多免疫炎症细胞渗出为主要病理改 变的变态反应性疾病。但是导致哮喘发生的确切机制尚未明了。IL-15是参与机体发生免疫 变化的最主要细胞之一。IL-15是新近 发现的由单核/巨噬细胞分泌的一种重要淋巴因子。目前国外有研究证实，IL-15参与单核/ 巨噬细胞与T、B淋巴细胞之间的调控。本文探讨哮喘病人单核/巨噬细胞分泌IL-15的水平， 旨在从IL-15分泌的情况中，进一步了解单核/巨噬细胞在该病发病中的参与作用，为揭示其 发病机制提供依据。
材料与方法
1.研究对象：根据1992年全国哮喘会议修订的哮喘诊断标准[1]确诊的支气管哮喘 病人27例，其中男13例，女14例，平均年龄(37.4±11.9)岁，患者均为哮喘急性发作期； 对照组40例，男31例，女9例，平均年龄(29.9±6.6)岁，为体检健康者。
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2.血标本的收集及IL-15的分泌：取静脉血加肝素抗凝，分离单个核细胞(PBMC)，用含10% 小牛血清的IMDM全培养基(Sigma产品)调整细胞数至1×109/L，在24孔培养板中，每孔加 入1 mL PBMC悬液，孵育2 h，吸去非贴壁细胞，并用Hanks液轻轻吹打洗涤，孔内贴壁细胞 即为单核/巨噬细胞。加入全培养基，并在刺激孔内加入大肠杆菌内毒素(LPS)8 μg/mL(上 海生物制品所)，在-30℃冻存，待测IL-15水平。
3.IL-15的测定[2]：将CTLL2细胞(长春生物制品所提供，本实验室长期传代培 养)用Hanks液洗涤2次，调整细胞数至1×109/L，在40孔细胞培养板中，实验孔加入50 μL CTLL2细胞及IMDM全培养基，在37℃、5%CO2条件下孵育20 h，以MTT试验测定CTLL 2增殖程度而确定IL-15的水平。
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4.统计处理：数据以
±s表示，显著性检验用t检验及t'检验。结 果
本研究结果表明，23例急性发作期哮喘病人外周血单核/巨噬细胞在体外培养后其上清中IL- 15水平显著高于健康对照组，P<0.01；经LPS刺激后，两组分泌IL-15的水平均有提高 ，但仍以哮喘组为著，P<0.05，见表1。
表1 外周血单核/巨噬细胞在不同状态下IL-15分泌水平
Tab 1 The level of IL-15 derived from monocyte/macrophage in
deferent station (U/L,
±s), http://www.100md.com
Without LPS
With LPS
Control
6.95±4.27(n=40)
8.60± 4.22(n=37)
Asthma
11.07±5.15*(n=23)
20.60±2.70*(n=27)
The level of IL-15 was expressed by the reference unit of our laboratory
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*P<0.01, vs control group
讨 论
IL-15是单核/巨噬细胞活化过程中发现的一种可溶性因子，与IL-2有许多相似的生物学活性 ，参与对免疫效应细胞的调节作用，并可维持IL-2依赖细胞株CTLL2的增殖。支气管哮喘 是以病变局部变态反应性炎症改变为特点的过敏性疾病。若究其发病机制，必然要观察其过 敏原的提呈、应答细胞的活化及效应细胞的作用等各环节的情况。单核/巨噬细胞是抗原提 呈的主要细胞，即变态反应反生的最早启动部分。因此，探讨其功能状态是揭示哮喘发病机 制的重要环节之一。我们利用外周血单核/巨噬细胞体外培养，检测上清液中IL-15的产生水 平。结果发现， 自然状态下的哮喘组IL-15水平明显高于健康对照组(P<0.01)；经 LPS刺激后，结果亦然。Grabstein等[2]证实，重组猴IL-15可刺激PHA活化的外周 血T细胞的增殖，且刺激效应与IL-2相似(包括CD4+和CD8+亚群)。另外，Armitage等 [3]发现，IL-15同IL-2、IL-4及IL-10一样，可与CD40配体协同诱导由抗IgM或佛波酯 活化的B细胞发生增殖和分泌IgM、IgG1、IgA以及低水平的IgG2。因此，我们认为，哮 喘病 人T、B淋巴细胞活化并产生特异性抗体，与单核/巨噬细胞分泌IL-15增高可能相关。IL-15 增高促进了T、B淋巴细胞活化，在哮喘发病中是否发挥其作用及作用的确切机制，有待进一 步探讨。
, 百拇医药
参考文献
1 中华结核和呼吸杂志编辑委员会.支气管哮喘的定义、诊断、分期 和疗效的评定标准(试行草案).中华结核和呼吸杂志，1993，16(哮喘增刊)：5.
2 Grabstein KH, Eisenman J, Shanebeck K, et al. Cloning of a T cell grow th factor that interacts with the beta chain of the interleukin-2 recepor. Scien ce, 1994, 264:965.
3 Armitage RJ, Maceuff BM, Eisenman J, et al. IL-15 has stimulatory acti vity for the induction of B cell proliferation and differentiation. J Immunol, 1 995, 154:483.
(1997年11月13日收稿，1998年11月2日修回), http://www.100md.com