脐血IL-2、 mIL-2R及sIL-2R的检测和意义
作者：熊玉宁 杨科 刘抗援 贾志凌
单位：熊玉宁 杨 科 刘抗援 贾志凌 北京军区总医院血液科(北京 100700)
关键词：
中国病理生理杂志/990733 脐血(cord blood,CB)富含造血干/祖细胞，近年来 脐血移植已 成为治疗恶性肿瘤的有力手段。脐血移植时，移植物抗宿主病(graft-versus-host-disease ,GVHD)发生率较同种异基因骨髓移植明显降低，且程度较轻，其机理不明。近年来的研究提 示，白细胞介素2(IL-2)及受体(IL-2R)在GVHD的发生中发挥重要作用。为探讨IL-2及IL-2R 与脐血移植反应的关系，本文检测了30例脐血IL-2、IL-2膜受体(mIL-2R)及可溶性IL-2受体 (sIL-2R)活性，旨在进一步阐明脐血的免疫特性。
材料和方法
, 百拇医药
(一)研究对象：30例脐血均采自正常分娩的足月儿，30例成人外周血(peripheral bloo d,PB)采自健康献血者，年龄21～38岁，男19例，女11例。
(二)主要试剂：sIL-2R ELISA试剂盒(华美生物医学公司)，植物血凝素(PHA，广州医药工业 研究所)，刀豆蛋白A(ConA,Sigma)，重组人白细胞介素-2(rIL-2)、噻唑蓝(MTT)、鼠抗人CD 25单抗(均购自中山公司)。
(三)实验方法：
1.IL-2的诱生：常规分离细胞，用5%FCS-RPMI-1640洗两次，调细胞浓度为1×106/mL， 37℃孵箱培养48h，收集上清，-20℃保存待测。
2.IL-2活性测定：C57BL小鼠无菌取脾，制成2×106/mL细胞悬液，加ConA，终浓度为3 μ g/mL，CO2孵箱培养4 d，调细胞浓度为1×106/mL，每孔加100 μL。将上述培养的细 胞上清100 μL加入培养板，每份样品作复孔，同时设标准品及阴性对照。培养24 h，每孔 加10 μL MTT溶液(5 mg/mL)，继续培养24 h，每孔加酸化异丙醇100 μL，充分震荡后 酶标仪检测，IL-2活性按如下公式计算：
, 百拇医药
3. mIL-2R的检测：按IL-2诱生法活化T淋巴细胞，48 h后收集细胞，采用常规活细胞间 接免疫荧光法，每份标本计200个细胞，计算阳性百分率。
4.sIL-2R的检测：采用双抗体夹心ELISA法，操作按试剂盒说明进行。
(四)统计处理：数据用
±s表示，两均数比较用t检验。
结 果
(一)脐血IL-2活性： 脐血单个核细胞产生IL-2的能力显著低于成人外周血(P<0.01) ，见表1。表1 脐血IL-2、mIL-2R及sIL-2R的水平
Tab 1 Levels of IL-2,mIL-2R and sIL-2R in CB(±s) Group
, 百拇医药
n
IL-2(U/mL)
sIL-2R(U/mL)
mIL-2R(%)
Before PHA
mIL-2R(%)
After PHA
CB
30
5.66±0.78*
343.8±78.1*
, 百拇医药 1.25±0.68
37.35±4.03*
PB
30
11.73±1.84
242.5±56.7
1.55±0.85
49.68±4 .26
*P<0.01,vs PB；CB=Cord blood; PB=peripheral blood
(二)脐血mIL-2R的表达： 脐血未受PHA刺激时mIL-2R的表达与外周血无明显差别，经PHA刺 激后mIL-2R的表达明显低于成人外周血(P<0.01)，见表1。
, http://www.100md.com
(三)脐血sIL-2R的水平：脐血sIL-2R的水平显著高于成人外周血(P<0.01)，见表1。
讨 论
IL-2具有促进T细胞增殖和活化的作用，是免疫应答调节过程中的关键性细胞因子。若淋 巴细胞产生IL-2能力降低，则由其 介导的T细胞活化效应下降，依赖T细胞的免疫排斥反应也随之 减轻。本实验的结果表明，脐血产生IL-2的能力显著低于成人外周血。 这种现象可能与脐血移植时GVHD的发生率低、且程度较轻有关。 动物实验表明，在小鼠的骨髓移植中使用外源性IL-2可以诱发 GVHD；人类骨髓移植后使用IL-2可诱发或加重GVHD。
IL-2发挥生物学功能必须与靶细胞膜上的IL-2R发生特异性结 合。mIL-2R的表达是T淋巴细胞活化的标志，静止期T细胞极少有mIL-2R表达。 因此mIL-2R的表达在一定程度上可反映机体的免疫应答能力。脐血淋巴细胞 受PHA刺激后mIL-2R表达较成人淋巴细胞明显低下，其意义也可能与 脐血移植时的排斥反应低下有关。
IL-2R还可以可溶性形式存在于血清，可溶性IL-2R(sIL-2R)分子虽较膜分子小 ，但仍具有结合IL-2的能力，因此sIL-2R与mIL-2R竞争结合IL-2，从而抑制T淋 巴细胞克隆的增殖活化，使淋巴细胞的免疫功能降低。因此，脐血中 高水平的sIL-2R进一步降低了脐血的免疫活性。
(1998年11月3日收稿，1999年4月13日修回), 百拇医药
单位：熊玉宁 杨 科 刘抗援 贾志凌 北京军区总医院血液科(北京 100700)
关键词：
中国病理生理杂志/990733 脐血(cord blood,CB)富含造血干/祖细胞，近年来 脐血移植已 成为治疗恶性肿瘤的有力手段。脐血移植时，移植物抗宿主病(graft-versus-host-disease ,GVHD)发生率较同种异基因骨髓移植明显降低，且程度较轻，其机理不明。近年来的研究提 示，白细胞介素2(IL-2)及受体(IL-2R)在GVHD的发生中发挥重要作用。为探讨IL-2及IL-2R 与脐血移植反应的关系，本文检测了30例脐血IL-2、IL-2膜受体(mIL-2R)及可溶性IL-2受体 (sIL-2R)活性，旨在进一步阐明脐血的免疫特性。
材料和方法
, 百拇医药
(一)研究对象：30例脐血均采自正常分娩的足月儿，30例成人外周血(peripheral bloo d,PB)采自健康献血者，年龄21～38岁，男19例，女11例。
(二)主要试剂：sIL-2R ELISA试剂盒(华美生物医学公司)，植物血凝素(PHA，广州医药工业 研究所)，刀豆蛋白A(ConA,Sigma)，重组人白细胞介素-2(rIL-2)、噻唑蓝(MTT)、鼠抗人CD 25单抗(均购自中山公司)。
(三)实验方法：
1.IL-2的诱生：常规分离细胞，用5%FCS-RPMI-1640洗两次，调细胞浓度为1×106/mL， 37℃孵箱培养48h，收集上清，-20℃保存待测。
2.IL-2活性测定：C57BL小鼠无菌取脾，制成2×106/mL细胞悬液，加ConA，终浓度为3 μ g/mL，CO2孵箱培养4 d，调细胞浓度为1×106/mL，每孔加100 μL。将上述培养的细 胞上清100 μL加入培养板，每份样品作复孔，同时设标准品及阴性对照。培养24 h，每孔 加10 μL MTT溶液(5 mg/mL)，继续培养24 h，每孔加酸化异丙醇100 μL，充分震荡后 酶标仪检测，IL-2活性按如下公式计算：
, 百拇医药
3. mIL-2R的检测：按IL-2诱生法活化T淋巴细胞，48 h后收集细胞，采用常规活细胞间 接免疫荧光法，每份标本计200个细胞，计算阳性百分率。
4.sIL-2R的检测：采用双抗体夹心ELISA法，操作按试剂盒说明进行。
(四)统计处理：数据用
±s表示，两均数比较用t检验。结 果
(一)脐血IL-2活性： 脐血单个核细胞产生IL-2的能力显著低于成人外周血(P<0.01) ，见表1。表1 脐血IL-2、mIL-2R及sIL-2R的水平
Tab 1 Levels of IL-2,mIL-2R and sIL-2R in CB(
±s) Group, 百拇医药
n
IL-2(U/mL)
sIL-2R(U/mL)
mIL-2R(%)
Before PHA
mIL-2R(%)
After PHA
CB
30
5.66±0.78*
343.8±78.1*
, 百拇医药 1.25±0.68
37.35±4.03*
PB
30
11.73±1.84
242.5±56.7
1.55±0.85
49.68±4 .26
*P<0.01,vs PB；CB=Cord blood; PB=peripheral blood
(二)脐血mIL-2R的表达： 脐血未受PHA刺激时mIL-2R的表达与外周血无明显差别，经PHA刺 激后mIL-2R的表达明显低于成人外周血(P<0.01)，见表1。
, http://www.100md.com
(三)脐血sIL-2R的水平：脐血sIL-2R的水平显著高于成人外周血(P<0.01)，见表1。
讨 论
IL-2具有促进T细胞增殖和活化的作用，是免疫应答调节过程中的关键性细胞因子。若淋 巴细胞产生IL-2能力降低，则由其 介导的T细胞活化效应下降，依赖T细胞的免疫排斥反应也随之 减轻。本实验的结果表明，脐血产生IL-2的能力显著低于成人外周血。 这种现象可能与脐血移植时GVHD的发生率低、且程度较轻有关。 动物实验表明，在小鼠的骨髓移植中使用外源性IL-2可以诱发 GVHD；人类骨髓移植后使用IL-2可诱发或加重GVHD。
IL-2发挥生物学功能必须与靶细胞膜上的IL-2R发生特异性结 合。mIL-2R的表达是T淋巴细胞活化的标志，静止期T细胞极少有mIL-2R表达。 因此mIL-2R的表达在一定程度上可反映机体的免疫应答能力。脐血淋巴细胞 受PHA刺激后mIL-2R表达较成人淋巴细胞明显低下，其意义也可能与 脐血移植时的排斥反应低下有关。
IL-2R还可以可溶性形式存在于血清，可溶性IL-2R(sIL-2R)分子虽较膜分子小 ，但仍具有结合IL-2的能力，因此sIL-2R与mIL-2R竞争结合IL-2，从而抑制T淋 巴细胞克隆的增殖活化，使淋巴细胞的免疫功能降低。因此，脐血中 高水平的sIL-2R进一步降低了脐血的免疫活性。
(1998年11月3日收稿，1999年4月13日修回), 百拇医药