内毒素肺损伤时肺淋巴液中淋巴细胞化学发光的变化
作者：陈景开 孙滨 朱达奎
单位：陈景开 孙滨 朱达奎 无锡101医院(214044)
关键词：
中国病理生理杂志990731 中性粒细胞活化在急性肺损伤中的作用受到广泛重视，但淋巴 细胞 与肺损伤的关系则报道较少。本文应用内毒素肺损伤和化学发光技术，观察肺淋巴液中的淋 巴细胞的活性，以探讨淋巴细胞在肺损伤中的可能作用。
方 法
(一)绵羊肺淋巴瘘的制备和肺损伤模型复制：健康无孕雌性绵羊17只。按Staub法造瘘成功的13只分为内毒素组(endotoxin,ET)10只和对 照(VC)组3只。3～4 d后，ET组予以大肠杆菌内毒素(O55:B5,Sigma)1.5 μg/kg体重加生理 盐液0.1L，恒速静滴20 min；VC组以生理盐液0.1L静滴，速度同上。于给ET前和后0.5、 1 、 2、 4和6 h观测指标变化。
, 百拇医药
(二)生理指标的观测：用生理记录仪测肺动脉压；用ABL-3型血气分析仪行血气分析。每30 min收集淋 巴液1次 。离心后，淋巴细胞部分用作化学发光测定，上清部分用作蛋白含量测定。计算淋巴/血浆 蛋白比值和肺淋巴蛋白清除率。
(三)淋巴细胞化学发光测定：淋巴细胞调成细胞107个/mL。先取1 mL 37℃下温育20 min ，加入鲁米诺(10-3m ol/L) 50μL后再温育10 min。用生物化学发光仪(SHG-1型)测定6s×50次的基础值后，加 入Con A溶液(1 mg/mL)0.1 mL,再测6s×50次。计算诱发前(基础)和诱发后化学发光的峰值 及5 min的总强度，并以counts.min-1/104细胞表示。
(四)数据处理：数据以
±s表示。两均数差异显著性用t检验判定。给ET前 、后的差异 用F分析，方差不齐者用F ′分析。肺淋巴蛋白清除率与淋巴细胞化学发光的关系 用直线相关分析。
, 百拇医药
结 果
(一)呼吸频率、血氧分压、肺动脉压和肺淋巴蛋白清除率的变化：如表1，给ET 30 min后，ET组呼吸频率和肺动脉压达最高值，PaO2于1 h达最低点，而 肺淋巴蛋白清除率到4 h和6 h达最大值。
表1 呼吸频率、血氧分压、肺动脉压和肺淋巴蛋白清除率的变化
Tab 1 The changes of respiration rate,artery oxygen partial pressu re,pulmonary
artery pressureand the clearance of pulmonary lymph protein(±s) Group
, 百拇医药
ET(n=10)
VC(n= 3)
Pre-ET
Post-ET(h)
1
2
4
6
RR
ET
20.73±6.89
58.18±16.45**Δ
, 百拇医药
43.09±12.47**Δ
33.64±7.79*Δ
30.73 ±6.28Δ
VC
19.53±1.16
17.33±1.15
18.00±2.00
18.67±1.16
18.00±2.0 0
PaO2
, 百拇医药 ET
12.47±1.30
8.44±2.2**Δ
10.32±1.16 Δ
10.92±1.41
10.83±2.07
VC
12.51±1.29
12.11±0.80
12.06±0.67
12.31±0.84
, 百拇医药
12.10±0.5 2
Ppa
ET
18.00±0.89
31.82±5.62**Δ
27.27±4.76
23 .15±3.58
19.64±2.16
VC
18.33±0.58
18.00±2.00
, 百拇医药
17.67±1.53
18.33±0.58
18.33±0.5 8
CLp
ET
1.56±0.51
5.15±1.13*Δ
9.37±2.52**ΔΔ
10.97±2.6**ΔΔ
10.41±3.06**ΔΔ
, http://www.100md.com VC
1.46±0.47
1.26±0.20
1.47±0.47
1.48±0.36
1.52±0.44
ET=Endotoxin group;VC=Vehicle controlgroup;RR=Respiration rate;Ppa=Pulmonary art ery pressure; CLp=Clearance of lymph protein
*P<0.05, **P<0.01,vs pre-ET; ΔP<0.05, ΔΔP<0.01,vs VC
, 百拇医药
(二)淋巴细胞化学发光的变化及与肺淋巴蛋白清除率的关系：淋巴细胞基础发光峰值和发光总强度在给ET 4后2 h显著增强(P<0.01)，6 h达最高点 ， 见表2。在给ET和6 h，淋巴细胞发光总强度与肺淋巴蛋白清除率显著相关(r=0.7458和0 .8436,P<0.05)。
表2 肺淋巴液中淋巴细胞化学发光的变化
Tab 2 The changes of chemiluminescence of lymphocytes in the lun g lymph (×103counts*min-1/104 cells,±s) Group
ET(n=10)
, http://www.100md.com VC(n= 3)
Pre-ET
Post-ET(h)
1
2
4
6
Peak value of BC
ET
0.558±0.183
0.723±0.023
1.008 ±0.319*Δ
, 百拇医药
1.145±0.369**ΔΔ
1.290±0.401**ΔΔ
VC
0.565±0.069
0.573±0.129
0.588±0.127
0.613±0.141
0.633±0.143
Total value of BC
ET
11.648±3.468
, http://www.100md.com
14.629±5.084
20.41 5±7.580*
23.960±8.795**
24.856±8.005**
VC
12.181±1.309
12.329±0.821
12.401±0.411
12.543±0.617
12.501± 0.556
Peak value of ConA-IC
, 百拇医药
ET
2.273±0.938
3.432±0.939
4.641±1. 041*Δ
5.202±1.308 **ΔΔ
5.569±1.309 **ΔΔ
VC
2.221±0.312
2.316±0.329
2.350±0.319
, 百拇医药 2.432±0.322
2.495±0.323
Total value of ConA-IC
ET
26.919±10.284
51.326±24.427*Δ
69.530±20.196 **ΔΔ
69.748±14.588**ΔΔ
74.930±17.956 **ΔΔ
VC
, 百拇医药
26.335±6.445
26.558±6.934
27.489±6.970
27.834±6 .075
28.025±5.731
ET=Endotoxin group;VC=Vehicle control group;BC=Basic chemiluminescence;ConA-IC =ConA-induced chemiluminescence
*P<0.05;* *P<0.01,vs pre-ET;ΔP<0.05, ΔΔP<0. 01,vs VC
讨 论
, 百拇医药
淋巴细胞与肺损伤的关系，目前尚不清楚。Duke和Meyrick等发现内毒素肺损伤后肺 组织中淋巴细胞聚集增多并处于活化状态。本实验用化学发光技术检测淋巴细胞显示，给ET 后2 h开始，肺淋巴液中的淋巴细胞均处于活化状态，并在ConA的刺激下，这些细胞发生呼 吸爆发的能力也显著增强。
许多文献报道内毒素肺损伤分为两期。Ⅰ期(0～2 h)以肺动脉压升高为主要特征，Ⅱ期(2～ 6 h)以肺淋巴蛋白清除率增加为主要特征。本实验在给ET 2 h后才出现发光显著增强，说 明Ⅰ期的呼吸、肺动脉压和血氧变化与淋巴细胞无关，而在给ET后的4 h和6 h，不仅基础发 光和诱发发光均显著增强，且诱发发光总强度与肺淋巴蛋白清除率呈正相关，提示了淋巴 细胞呼吸爆发产生的活性氧可能参与了Ⅱ期肺微血管的损伤。
(1998年9月14日收稿，1999年3月1日修回), http://www.100md.com
单位：陈景开 孙滨 朱达奎 无锡101医院(214044)
关键词：
中国病理生理杂志990731 中性粒细胞活化在急性肺损伤中的作用受到广泛重视，但淋巴 细胞 与肺损伤的关系则报道较少。本文应用内毒素肺损伤和化学发光技术，观察肺淋巴液中的淋 巴细胞的活性，以探讨淋巴细胞在肺损伤中的可能作用。
方 法
(一)绵羊肺淋巴瘘的制备和肺损伤模型复制：健康无孕雌性绵羊17只。按Staub法造瘘成功的13只分为内毒素组(endotoxin,ET)10只和对 照(VC)组3只。3～4 d后，ET组予以大肠杆菌内毒素(O55:B5,Sigma)1.5 μg/kg体重加生理 盐液0.1L，恒速静滴20 min；VC组以生理盐液0.1L静滴，速度同上。于给ET前和后0.5、 1 、 2、 4和6 h观测指标变化。
, 百拇医药
(二)生理指标的观测：用生理记录仪测肺动脉压；用ABL-3型血气分析仪行血气分析。每30 min收集淋 巴液1次 。离心后，淋巴细胞部分用作化学发光测定，上清部分用作蛋白含量测定。计算淋巴/血浆 蛋白比值和肺淋巴蛋白清除率。
(三)淋巴细胞化学发光测定：淋巴细胞调成细胞107个/mL。先取1 mL 37℃下温育20 min ，加入鲁米诺(10-3m ol/L) 50μL后再温育10 min。用生物化学发光仪(SHG-1型)测定6s×50次的基础值后，加 入Con A溶液(1 mg/mL)0.1 mL,再测6s×50次。计算诱发前(基础)和诱发后化学发光的峰值 及5 min的总强度，并以counts.min-1/104细胞表示。
(四)数据处理：数据以
±s表示。两均数差异显著性用t检验判定。给ET前 、后的差异 用F分析，方差不齐者用F ′分析。肺淋巴蛋白清除率与淋巴细胞化学发光的关系 用直线相关分析。, 百拇医药
结 果
(一)呼吸频率、血氧分压、肺动脉压和肺淋巴蛋白清除率的变化：如表1，给ET 30 min后，ET组呼吸频率和肺动脉压达最高值，PaO2于1 h达最低点，而 肺淋巴蛋白清除率到4 h和6 h达最大值。
表1 呼吸频率、血氧分压、肺动脉压和肺淋巴蛋白清除率的变化
Tab 1 The changes of respiration rate,artery oxygen partial pressu re,pulmonary
artery pressureand the clearance of pulmonary lymph protein(
±s) Group, 百拇医药
ET(n=10)
VC(n= 3)
Pre-ET
Post-ET(h)
1
2
4
6
RR
ET
20.73±6.89
58.18±16.45**Δ
, 百拇医药
43.09±12.47**Δ
33.64±7.79*Δ
30.73 ±6.28Δ
VC
19.53±1.16
17.33±1.15
18.00±2.00
18.67±1.16
18.00±2.0 0
PaO2
, 百拇医药 ET
12.47±1.30
8.44±2.2**Δ
10.32±1.16 Δ
10.92±1.41
10.83±2.07
VC
12.51±1.29
12.11±0.80
12.06±0.67
12.31±0.84
, 百拇医药
12.10±0.5 2
Ppa
ET
18.00±0.89
31.82±5.62**Δ
27.27±4.76
23 .15±3.58
19.64±2.16
VC
18.33±0.58
18.00±2.00
, 百拇医药
17.67±1.53
18.33±0.58
18.33±0.5 8
CLp
ET
1.56±0.51
5.15±1.13*Δ
9.37±2.52**ΔΔ
10.97±2.6**ΔΔ
10.41±3.06**ΔΔ
, http://www.100md.com VC
1.46±0.47
1.26±0.20
1.47±0.47
1.48±0.36
1.52±0.44
ET=Endotoxin group;VC=Vehicle controlgroup;RR=Respiration rate;Ppa=Pulmonary art ery pressure; CLp=Clearance of lymph protein
*P<0.05, **P<0.01,vs pre-ET; ΔP<0.05, ΔΔP<0.01,vs VC
, 百拇医药
(二)淋巴细胞化学发光的变化及与肺淋巴蛋白清除率的关系：淋巴细胞基础发光峰值和发光总强度在给ET 4后2 h显著增强(P<0.01)，6 h达最高点 ， 见表2。在给ET和6 h，淋巴细胞发光总强度与肺淋巴蛋白清除率显著相关(r=0.7458和0 .8436,P<0.05)。
表2 肺淋巴液中淋巴细胞化学发光的变化
Tab 2 The changes of chemiluminescence of lymphocytes in the lun g lymph (×103counts*min-1/104 cells,
±s) GroupET(n=10)
, http://www.100md.com VC(n= 3)
Pre-ET
Post-ET(h)
1
2
4
6
Peak value of BC
ET
0.558±0.183
0.723±0.023
1.008 ±0.319*Δ
, 百拇医药
1.145±0.369**ΔΔ
1.290±0.401**ΔΔ
VC
0.565±0.069
0.573±0.129
0.588±0.127
0.613±0.141
0.633±0.143
Total value of BC
ET
11.648±3.468
, http://www.100md.com
14.629±5.084
20.41 5±7.580*
23.960±8.795**
24.856±8.005**
VC
12.181±1.309
12.329±0.821
12.401±0.411
12.543±0.617
12.501± 0.556
Peak value of ConA-IC
, 百拇医药
ET
2.273±0.938
3.432±0.939
4.641±1. 041*Δ
5.202±1.308 **ΔΔ
5.569±1.309 **ΔΔ
VC
2.221±0.312
2.316±0.329
2.350±0.319
, 百拇医药 2.432±0.322
2.495±0.323
Total value of ConA-IC
ET
26.919±10.284
51.326±24.427*Δ
69.530±20.196 **ΔΔ
69.748±14.588**ΔΔ
74.930±17.956 **ΔΔ
VC
, 百拇医药
26.335±6.445
26.558±6.934
27.489±6.970
27.834±6 .075
28.025±5.731
ET=Endotoxin group;VC=Vehicle control group;BC=Basic chemiluminescence;ConA-IC =ConA-induced chemiluminescence
*P<0.05;* *P<0.01,vs pre-ET;ΔP<0.05, ΔΔP<0. 01,vs VC
讨 论
, 百拇医药
淋巴细胞与肺损伤的关系，目前尚不清楚。Duke和Meyrick等发现内毒素肺损伤后肺 组织中淋巴细胞聚集增多并处于活化状态。本实验用化学发光技术检测淋巴细胞显示，给ET 后2 h开始，肺淋巴液中的淋巴细胞均处于活化状态，并在ConA的刺激下，这些细胞发生呼 吸爆发的能力也显著增强。
许多文献报道内毒素肺损伤分为两期。Ⅰ期(0～2 h)以肺动脉压升高为主要特征，Ⅱ期(2～ 6 h)以肺淋巴蛋白清除率增加为主要特征。本实验在给ET 2 h后才出现发光显著增强，说 明Ⅰ期的呼吸、肺动脉压和血氧变化与淋巴细胞无关，而在给ET后的4 h和6 h，不仅基础发 光和诱发发光均显著增强，且诱发发光总强度与肺淋巴蛋白清除率呈正相关，提示了淋巴 细胞呼吸爆发产生的活性氧可能参与了Ⅱ期肺微血管的损伤。
(1998年9月14日收稿，1999年3月1日修回), http://www.100md.com