非创伤性预处理对大鼠缺血心肌保护效应机制的探讨
作者：卢彦珍 董传仁 刘永明 张友云 马春艳
单位：卢彦珍(长治医学院病理生理学教研室， 山西 长治 046000)；董传仁 刘永明 张友云 马春艳(湖北医科大学病理生理学教研室， 湖北 武汉 430071)
关键词：大鼠；局部缺血；再灌注
中国病理生理杂志000917 [摘 要] 目的：探讨非创伤性下肢缺血预处理对大鼠心肌保护效应的机制。方法：用雄性SD大鼠36只，分对照、缺血再灌注、经典缺血预处理及非创伤性下肢缺血预处理4组。分别观察以下指标：血浆一氧化氮(NO)水平；心肌热休克蛋白70(HSP70)mRNA表达；心肌5'-核苷酸酶(5'-NT)及过氧化氢酶(CAT)活性。结果：经典及非创伤性下肢缺血预处理后，血浆NO水平显著高于缺血再灌注组和对照组(P<0.01)，心肌HSP 70 mRNA表达明显增强，心肌5'-NT、CAT活性升高(P<0.05， vs I/R)，而经典及非创伤性下肢缺血预处理两组间上述指标无显著差异(P>0.05)。结论：非创伤性下肢缺血预处理保护心肌的机制可能与经典缺血预处理相似，均是通过提高心肌内源性保护物质NO、HSP70 mRNA、CAT及5'-NT显示预处理效应。
, 百拇医药
[中图分类号] Q463 [文献标识码] A
[文章编号] 1000-4718(2000)09-0835-04
Study on protective mechanism of non-wounded ischemic
preconditioning on rat ischemia/reperfusion myocardium
LU Yan-zhen
(Department of Pathophysiology, Changzhi Medical College, Changzhi 046000， China)
DONG Chuan-ren, LIU Yong-ming, ZHANG You-yun, MA Chun-yan
, 百拇医药
(Department of Pathophysiology,Hubei Medical University, Wuhan 430071, China)
[Abstract] AIM:To investigate probable protective mechanism of non-wounded legs ischemic preconditioning on ischemia/reperfusion(I/R) myocardium. METHODS: 36 male SD rats, weighting (250±30) g,were divided into 4 groups.They are normal control(NC);I/R; classical ischemic preconditioning(C-IPC)and non-wounded legs ischemic preconditioning(N-WIPC). NO in plasm,expression of myocardial HSP 70 mRNA, the activities of 5'-NT and CAT of myocardium were observed in all groups. RESULTS:The level of NO in plasm significantly enhanced in groups C-IPC and N-WIPC compared with that in groups I/R and NC (P<0.01),expression of myocardial HSP 70 mRNA was greatly increased in both C-IPC and N-WIPC groups, the activities of 5'-NT, CAT of myocardium were also raised in groups C-IPC and N-WIPC (P<0.05 vs I/R),but there was no difference between C-IPC and N-WIPC(P>0.05). CONCLUSION:The possible protective mechanism involved in N-WIPC is similar to that in C-IPC, which is due to increase of endogenous myocardial protective substances.
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[MeSH] Rats; Ischemia; Reperfusion
本室已证实，无论是非创伤性下肢缺血预处理或是经典心脏缺血预处理，均可获得明显缩小心肌梗塞范围，改善心脏功能，减轻心肌脂质过氧化反应及心肌酶漏出等预处理效应。本实验通过监测大鼠血浆一氧化氮(nitric oxide)含量，心肌5'-核苷酸酶(5'-nucleotidase)及过氧化氢酶(catalase)活性和热休克蛋白70(HSP70)mRNA表达的变化，旨在为探讨这两种预处理方式的机制提供实验资料。
材 料 和 方 法
一、 动物模型复制与分组
雄性SD大鼠，体重(250±30)g，用20%乌拉坦(1 g*kg-1 ip)麻醉。气管插管人工机械通气。胸骨左缘第四肋间开胸，剪开心包，3～0丝线环左冠脉前降支距左心耳下缘2 mm处穿过。稳定后，取心电图正常者随机分4组：(1)正常对照(NC)组,n=9,留线不结扎冠脉旷置50及120 min;(2)缺血再灌(I/R)组,n=9,结扎左冠脉前降支阻断血流30 min, 再灌注20及90 min;(3)经典缺血预处理(C-IPC)组,n=9,按经典Murry法复制，即结扎冠脉前降支5 min,再灌注5 min,反复4次。以后处理同I/R组;(4)非创伤性下肢缺血预处理(N-WIPC)组,n=9,麻醉后，以止血带捆绑双下肢至股动脉搏动不能触及，阻断血流5 min后松开5 min，反复4次。以后处理同I/R组。
, 百拇医药
二、主要试剂
NO试剂盒为南京聚力生物医学工程所产品；质粒DNA由上海第二军医大学宋亮年教授惠赠；Random标记盒购自Promega公司；DAB及5'-NT分别为sigma和中科院上海生物化学研究所产品。
三、观测指标
(一) 血浆NO含量测定 各组于再灌注20 min(NC组持续观察50 min)，左颈总动脉取抗凝血液2 mL，以2 000×g 离心10 min，分离血浆，以NO测试盒测定，按说明操作。
(二) 心肌组织HSP 70 mRNA表达 各组于再灌注90 min(NC组持续120 min)，速取左心室组织约100 mg按酸性盐酸胍-酚-氯仿一步法[1] 提取心肌总RNA。取30 μg RNA经1%琼脂糖凝胶电泳后，转移到硝酸纤维素膜上。80℃烘干。质粒DNA经BamHI、EcoRI双酶切后，低溶点琼脂糖凝胶回收2.3 kb片段。用Random标记盒进行放射性标记。按《分子克隆》第2版方法进行Northern blot分析。
, 百拇医药
(三) 心肌5'-NT、CAT活性测定 实验结束后速取左心室结扎线下小块组织，2%多聚甲醛固定10 min左右，切片。按《酶组织细胞化学技术》[2]介绍的Unisitalo-Karnovsky法和DAB法测5'-NT、CAT活性。以Unisitalo-Karnovsky法反应显示5'-NT活性部位在细胞膜外侧，为黑褐色细小颗粒。以DAB法测定显示，在作为电子供体的过氧化氢(DAB)存在下，CAT使DAB氧化形成不溶性褐色聚合体。镜下所见暗褐色染色一致的小体即为CAT小体。每种酶每组随机取2张玻片，用Olympus镜按规定顺序测每张玻片8～9个视野。酶反应强度参照Niles分级法分A、B、C、D 4级，A级为强阳性，D级为阴性，B、C级介于A、D级间。
四、 统计学分析
所有数据均以均数±标准差(
±s)表示，组间差异用方差分析，并作样本均数两两比较的q检验。酶组化指标按Ridit法进行显著检验。
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结 果
一、 心肌5'-NT活性变化
结果如表1示，I/R组酶活性最低(P<0.05 vs NC组)，C-IPC、N-WIPC组酶活性明显高于I/R组(P<0.05)。
表1 心肌5'-NT活性的变化
Tab 1 Changes of the activities of 5'-NT
in myocardium (±s. n＝6) Group
Grades of reaction
Total
, 百拇医药
A
B
C
D
NC
84
11
5
0
100
0.5000±0.0577
I/R
24
, 百拇医药 33
38
5
100
0.8200±0.0577△
C-IPC
55
33
9
2
100
0.6300±0.0577*
N-WIPC
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71
23
6
0
100
0.5600±0.0577*
△P<0.05 vs NC group；*P<0.05 vs I/R group.
二、心肌CAT活性变化
结果见表2，C-IPC、N-WIPC组酶活性明显高于I/R组,I/R组酶活性低于NC组(P<0.05)。表2 心肌CAT活性的变化
Tab 2 Changes of the activities of CAT
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in myocardium (±s. n=6)
Group
Grades of reaction
Total
A
B
C
D
NC
101
, http://www.100md.com
16
3
0
120
0.5000±0.0577
I/R
35
30
28
7
100
0.7700±0.0577△
C-IPC
, 百拇医药
75
12
9
4
100
0.5500±0.0577*
N-WIPC
77
13
7
3
100
0.5400±0.0577*
, 百拇医药
△P<0.05 vs NC；P<0.05 vs I/R.
三、血浆NO变化
如表3示，I/R组血浆NO含量显著低于NC组(P<0.01)，提示I/R组血管内皮严重受损；而C-IPC、N-WIPC组含量显著高于I/R组(P<0.01)，甚至高于NC组(P<0.01)，说明这两种方法处理都使NO释放增加，两组比较无显著差异(P>0.05)。表3 血浆NO2-/NO3-含量的变化
Tab 3 Changes of the content of NO2-/NO3-
in plasma (±s. n＝8) Group
, 百拇医药
NO-2/NO-3(μmol/L)
NC
23.38±3.33
I/R
11.59±3.16△
C-IPC
42.80±15.00**△△
N-WIPC
43.40±10.25**△△
△P<0.05,△△P<0.01 vs NC； ** P<0.01 vs I/R.
, 百拇医药
四、心肌HSP 70 mRNA表达的变化
Northorn杂交结果见图1，C-IPC组、N-WIPC组HSP 70 mRNA表达明显高于I/R组；I/R组轻度表达，而NC组无HSP 70 mRNA表达。
Fig 1 Northern blot analysis of HSP 70 mRNA.
NC group, no expression; I/R group, low-grade expression;
C-IPC and N-WIPC groups; distinct expression.
图1 心肌HSP 70 mRNA表达的Northern blot分析
, 百拇医药
讨 论
自发现IPC对心肌有保护作用以来，关于其机制已成为研究热点。目前已提出不少假说如应激蛋白合成，NO、腺苷释放，K+-ATP通道开放和PKC、5'-NT激活等，本实验着重观测了NO、HSP 70 mRNA表达及心肌酶学改变与IPC的关系。结果发现C-IPC组与N-WIPC组动物心肌5'-NT、CAT活性明显增加(P<0.05， vs I/R组),HSP 70 mRNA显著表达，同时血浆NO水平也显著增高(P<0.01， vs I/R、NC组)。
文献报道,内源性NO释放,5'-NT、CAT活性增高是IPC机制的重要方面，HSP70是IPC重要的心肌内源性保护物质。在犬的IPC实验中发现[3]，IPC效应是通过L-精氨酸:一氧化氮通路所致。用NO合成抑制剂L-NAME可以取消IPC效应。若分别用L-arg和SIN-1预处理可以明显改善心肌的I/R损伤[4]。许多实验证实HSP 70 mRNA表达在IPC时明显增加，用actinomycin-D及cycloheximide分别阻断了HSP70基因转录及翻译，阻止HSP70合成，完全阻断了对大鼠心肌的保护作用[5]。直接将HSP70基因转录入大鼠心肌细胞能显著地增加其抗I/R损伤的能力[6]。Kitakaze等[7]报道PC能使犬5'-NT活性增加，当加入5'-NT抑制物AOPCP后，该保护效应消失。用polymyxin B和prazosin阻断细胞外5'-NT的激活，则IPC的保护作用也消失，说明5'-NT是IPC的机制之一。Currie等[8]指出，热休克的保护作用可能是由于热休克过程中CAT的直接释放和增加，当用3-氨基-1.2.4三吡咯灭活CAT时热休克所具有的保护作用消失。大鼠内毒素处理也增加心肌CAT活性，随后发现离体IPC动物CAT活性也增加。
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本实验结果表明，在C-IPC组，血浆NO含量，心肌CAT、5'-NT活性及心肌HSP 70 mRNA表达均增加，不仅进一步证实了上述观点，同时也表明非创伤性下肢IPC也使动物体内NO、HSP 70 mRNA、CAT、5'-NT等心肌内源性保护物质与C-IPC组向同一方向变化，尽管变化的程度有所不同。提示非创伤性下肢IPC与经典IPC激发的IPC效应机制可能是相类似的。非创伤性下肢IPC出现上述变化的原因尚待进一步研究，可能由于捆绑双下肢，使之缺血，继之恢复血流，血液短暂淤滞在扩张的双下肢血管床，使回心血量减少，刺激交感-肾上腺髓质系统轻度兴奋，儿茶酚胺释放增加。有研究表明，儿茶酚胺类交感神经递质的释放和肾上腺素受体的兴奋，可诱导出预处理效应[9]。同时，双下肢缺血-再灌注过程中可以产生少量的氧自由基。少量氧自由基在预处理效应中起着一定的作用[10]。通过儿茶酚胺类和/或氧自由基介导，调动心肌内源性保护物质的释放而显示IPC效应。
[参 考 文 献]
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[1] Chomzynski P,Sacchi N.Single-step method of RNA isolation by acid guanidinuium thiocynate-phend-chloroform extraction[J]. Anal Biochem,1987,162:156-159.
[2] 小川和郎，中根一穗，主编. 酶组织细胞化学技术[M]. 钟慈声主译.上海：上海医科大学出版社，1989. 132-135.
[3] Vegh A,Szekers L, Parratt J. Preconditioning of the ischemic myocardium,involvement of the L-arginine nitric oxide pathway[J]. Br J Pharmacol,1992,107:648-652.
[4] Richard V, Blanc T, Kaeffer N,et al. Myocardial and coronary endothelial protective effects of acetylcholine after myocardial ischemia and reperfusion in rats: role of nitric oxide[J]. Br J Pharmacol,1995,115:1532-1538.
, 百拇医药
[5] 肖献忠，王燕如，黄生宁，等.从热休克基因表达探讨心肌细胞对损伤的内源性保护作用及机制[J]. 中国病理生理杂志,1995,11:741-742.
[6] Mestril R,Chi S,Sayen R,et al.Expression of inducible stress protein 70 in rat heart myogenic cells confers protection against simulated ischemia-induced injury[J]. J Clin Invest,1994,93:759-767.
[7] Kitakaze M,Hori M,Takashima S,et al.Ischemic preconditioning increases adenosine and 5'-nucleotidase activity during myocardial ischemia and reperfusion in dogs: Implication for myocardiol salvage[J]. Circulation,1993,87:H208-215.
, 百拇医药
[8] Currie RW, Karmazyn M, Kloc M, et al. Heat shock response is associated with enhanced postischemic ventricular recovery[J]. Circ Res,1988,63:543-549.
[9] Hale SL,Kloner RA.Protection of myocardium by transient preischemic administration of phenylephin in the rabbit[J]. Coron Artery Dis,1994,5:605-611.
[10] Ambrosio G, Tritto I, Chaiariello M.The role of oxygen free radical in preconditioning[J]. J Mol Cell Cardiol, 1995, 27:1035-1039.
[收稿日期] 1999-06-03 [修回日期] 1999-12-14, 百拇医药
单位：卢彦珍(长治医学院病理生理学教研室， 山西 长治 046000)；董传仁 刘永明 张友云 马春艳(湖北医科大学病理生理学教研室， 湖北 武汉 430071)
关键词：大鼠；局部缺血；再灌注
中国病理生理杂志000917 [摘 要] 目的：探讨非创伤性下肢缺血预处理对大鼠心肌保护效应的机制。方法：用雄性SD大鼠36只，分对照、缺血再灌注、经典缺血预处理及非创伤性下肢缺血预处理4组。分别观察以下指标：血浆一氧化氮(NO)水平；心肌热休克蛋白70(HSP70)mRNA表达；心肌5'-核苷酸酶(5'-NT)及过氧化氢酶(CAT)活性。结果：经典及非创伤性下肢缺血预处理后，血浆NO水平显著高于缺血再灌注组和对照组(P<0.01)，心肌HSP 70 mRNA表达明显增强，心肌5'-NT、CAT活性升高(P<0.05， vs I/R)，而经典及非创伤性下肢缺血预处理两组间上述指标无显著差异(P>0.05)。结论：非创伤性下肢缺血预处理保护心肌的机制可能与经典缺血预处理相似，均是通过提高心肌内源性保护物质NO、HSP70 mRNA、CAT及5'-NT显示预处理效应。
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[中图分类号] Q463 [文献标识码] A
[文章编号] 1000-4718(2000)09-0835-04
Study on protective mechanism of non-wounded ischemic
preconditioning on rat ischemia/reperfusion myocardium
LU Yan-zhen
(Department of Pathophysiology, Changzhi Medical College, Changzhi 046000， China)
DONG Chuan-ren, LIU Yong-ming, ZHANG You-yun, MA Chun-yan
, 百拇医药
(Department of Pathophysiology,Hubei Medical University, Wuhan 430071, China)
[Abstract] AIM:To investigate probable protective mechanism of non-wounded legs ischemic preconditioning on ischemia/reperfusion(I/R) myocardium. METHODS: 36 male SD rats, weighting (250±30) g,were divided into 4 groups.They are normal control(NC);I/R; classical ischemic preconditioning(C-IPC)and non-wounded legs ischemic preconditioning(N-WIPC). NO in plasm,expression of myocardial HSP 70 mRNA, the activities of 5'-NT and CAT of myocardium were observed in all groups. RESULTS:The level of NO in plasm significantly enhanced in groups C-IPC and N-WIPC compared with that in groups I/R and NC (P<0.01),expression of myocardial HSP 70 mRNA was greatly increased in both C-IPC and N-WIPC groups, the activities of 5'-NT, CAT of myocardium were also raised in groups C-IPC and N-WIPC (P<0.05 vs I/R),but there was no difference between C-IPC and N-WIPC(P>0.05). CONCLUSION:The possible protective mechanism involved in N-WIPC is similar to that in C-IPC, which is due to increase of endogenous myocardial protective substances.
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[MeSH] Rats; Ischemia; Reperfusion
本室已证实，无论是非创伤性下肢缺血预处理或是经典心脏缺血预处理，均可获得明显缩小心肌梗塞范围，改善心脏功能，减轻心肌脂质过氧化反应及心肌酶漏出等预处理效应。本实验通过监测大鼠血浆一氧化氮(nitric oxide)含量，心肌5'-核苷酸酶(5'-nucleotidase)及过氧化氢酶(catalase)活性和热休克蛋白70(HSP70)mRNA表达的变化，旨在为探讨这两种预处理方式的机制提供实验资料。
材 料 和 方 法
一、 动物模型复制与分组
雄性SD大鼠，体重(250±30)g，用20%乌拉坦(1 g*kg-1 ip)麻醉。气管插管人工机械通气。胸骨左缘第四肋间开胸，剪开心包，3～0丝线环左冠脉前降支距左心耳下缘2 mm处穿过。稳定后，取心电图正常者随机分4组：(1)正常对照(NC)组,n=9,留线不结扎冠脉旷置50及120 min;(2)缺血再灌(I/R)组,n=9,结扎左冠脉前降支阻断血流30 min, 再灌注20及90 min;(3)经典缺血预处理(C-IPC)组,n=9,按经典Murry法复制，即结扎冠脉前降支5 min,再灌注5 min,反复4次。以后处理同I/R组;(4)非创伤性下肢缺血预处理(N-WIPC)组,n=9,麻醉后，以止血带捆绑双下肢至股动脉搏动不能触及，阻断血流5 min后松开5 min，反复4次。以后处理同I/R组。
, 百拇医药
二、主要试剂
NO试剂盒为南京聚力生物医学工程所产品；质粒DNA由上海第二军医大学宋亮年教授惠赠；Random标记盒购自Promega公司；DAB及5'-NT分别为sigma和中科院上海生物化学研究所产品。
三、观测指标
(一) 血浆NO含量测定 各组于再灌注20 min(NC组持续观察50 min)，左颈总动脉取抗凝血液2 mL，以2 000×g 离心10 min，分离血浆，以NO测试盒测定，按说明操作。
(二) 心肌组织HSP 70 mRNA表达 各组于再灌注90 min(NC组持续120 min)，速取左心室组织约100 mg按酸性盐酸胍-酚-氯仿一步法[1] 提取心肌总RNA。取30 μg RNA经1%琼脂糖凝胶电泳后，转移到硝酸纤维素膜上。80℃烘干。质粒DNA经BamHI、EcoRI双酶切后，低溶点琼脂糖凝胶回收2.3 kb片段。用Random标记盒进行放射性标记。按《分子克隆》第2版方法进行Northern blot分析。
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(三) 心肌5'-NT、CAT活性测定 实验结束后速取左心室结扎线下小块组织，2%多聚甲醛固定10 min左右，切片。按《酶组织细胞化学技术》[2]介绍的Unisitalo-Karnovsky法和DAB法测5'-NT、CAT活性。以Unisitalo-Karnovsky法反应显示5'-NT活性部位在细胞膜外侧，为黑褐色细小颗粒。以DAB法测定显示，在作为电子供体的过氧化氢(DAB)存在下，CAT使DAB氧化形成不溶性褐色聚合体。镜下所见暗褐色染色一致的小体即为CAT小体。每种酶每组随机取2张玻片，用Olympus镜按规定顺序测每张玻片8～9个视野。酶反应强度参照Niles分级法分A、B、C、D 4级，A级为强阳性，D级为阴性，B、C级介于A、D级间。
四、 统计学分析
所有数据均以均数±标准差(
±s)表示，组间差异用方差分析，并作样本均数两两比较的q检验。酶组化指标按Ridit法进行显著检验。, http://www.100md.com
结 果
一、 心肌5'-NT活性变化
结果如表1示，I/R组酶活性最低(P<0.05 vs NC组)，C-IPC、N-WIPC组酶活性明显高于I/R组(P<0.05)。
表1 心肌5'-NT活性的变化
Tab 1 Changes of the activities of 5'-NT
in myocardium (
±s. n＝6) GroupGrades of reaction
Total
, 百拇医药
A
B
C
D
NC
84
11
5
0
100
0.5000±0.0577
I/R
24
, 百拇医药 33
38
5
100
0.8200±0.0577△
C-IPC
55
33
9
2
100
0.6300±0.0577*
N-WIPC
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71
23
6
0
100
0.5600±0.0577*
△P<0.05 vs NC group；*P<0.05 vs I/R group.
二、心肌CAT活性变化
结果见表2，C-IPC、N-WIPC组酶活性明显高于I/R组,I/R组酶活性低于NC组(P<0.05)。表2 心肌CAT活性的变化
Tab 2 Changes of the activities of CAT
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in myocardium (
±s. n=6)Group
Grades of reaction
Total
A
B
C
D
NC
101
, http://www.100md.com
16
3
0
120
0.5000±0.0577
I/R
35
30
28
7
100
0.7700±0.0577△
C-IPC
, 百拇医药
75
12
9
4
100
0.5500±0.0577*
N-WIPC
77
13
7
3
100
0.5400±0.0577*
, 百拇医药
△P<0.05 vs NC；P<0.05 vs I/R.
三、血浆NO变化
如表3示，I/R组血浆NO含量显著低于NC组(P<0.01)，提示I/R组血管内皮严重受损；而C-IPC、N-WIPC组含量显著高于I/R组(P<0.01)，甚至高于NC组(P<0.01)，说明这两种方法处理都使NO释放增加，两组比较无显著差异(P>0.05)。表3 血浆NO2-/NO3-含量的变化
Tab 3 Changes of the content of NO2-/NO3-
in plasma (
±s. n＝8) Group, 百拇医药
NO-2/NO-3(μmol/L)
NC
23.38±3.33
I/R
11.59±3.16△
C-IPC
42.80±15.00**△△
N-WIPC
43.40±10.25**△△
△P<0.05,△△P<0.01 vs NC； ** P<0.01 vs I/R.
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四、心肌HSP 70 mRNA表达的变化
Northorn杂交结果见图1，C-IPC组、N-WIPC组HSP 70 mRNA表达明显高于I/R组；I/R组轻度表达，而NC组无HSP 70 mRNA表达。
Fig 1 Northern blot analysis of HSP 70 mRNA.
NC group, no expression; I/R group, low-grade expression;
C-IPC and N-WIPC groups; distinct expression.
图1 心肌HSP 70 mRNA表达的Northern blot分析
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讨 论
自发现IPC对心肌有保护作用以来，关于其机制已成为研究热点。目前已提出不少假说如应激蛋白合成，NO、腺苷释放，K+-ATP通道开放和PKC、5'-NT激活等，本实验着重观测了NO、HSP 70 mRNA表达及心肌酶学改变与IPC的关系。结果发现C-IPC组与N-WIPC组动物心肌5'-NT、CAT活性明显增加(P<0.05， vs I/R组),HSP 70 mRNA显著表达，同时血浆NO水平也显著增高(P<0.01， vs I/R、NC组)。
文献报道,内源性NO释放,5'-NT、CAT活性增高是IPC机制的重要方面，HSP70是IPC重要的心肌内源性保护物质。在犬的IPC实验中发现[3]，IPC效应是通过L-精氨酸:一氧化氮通路所致。用NO合成抑制剂L-NAME可以取消IPC效应。若分别用L-arg和SIN-1预处理可以明显改善心肌的I/R损伤[4]。许多实验证实HSP 70 mRNA表达在IPC时明显增加，用actinomycin-D及cycloheximide分别阻断了HSP70基因转录及翻译，阻止HSP70合成，完全阻断了对大鼠心肌的保护作用[5]。直接将HSP70基因转录入大鼠心肌细胞能显著地增加其抗I/R损伤的能力[6]。Kitakaze等[7]报道PC能使犬5'-NT活性增加，当加入5'-NT抑制物AOPCP后，该保护效应消失。用polymyxin B和prazosin阻断细胞外5'-NT的激活，则IPC的保护作用也消失，说明5'-NT是IPC的机制之一。Currie等[8]指出，热休克的保护作用可能是由于热休克过程中CAT的直接释放和增加，当用3-氨基-1.2.4三吡咯灭活CAT时热休克所具有的保护作用消失。大鼠内毒素处理也增加心肌CAT活性，随后发现离体IPC动物CAT活性也增加。
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本实验结果表明，在C-IPC组，血浆NO含量，心肌CAT、5'-NT活性及心肌HSP 70 mRNA表达均增加，不仅进一步证实了上述观点，同时也表明非创伤性下肢IPC也使动物体内NO、HSP 70 mRNA、CAT、5'-NT等心肌内源性保护物质与C-IPC组向同一方向变化，尽管变化的程度有所不同。提示非创伤性下肢IPC与经典IPC激发的IPC效应机制可能是相类似的。非创伤性下肢IPC出现上述变化的原因尚待进一步研究，可能由于捆绑双下肢，使之缺血，继之恢复血流，血液短暂淤滞在扩张的双下肢血管床，使回心血量减少，刺激交感-肾上腺髓质系统轻度兴奋，儿茶酚胺释放增加。有研究表明，儿茶酚胺类交感神经递质的释放和肾上腺素受体的兴奋，可诱导出预处理效应[9]。同时，双下肢缺血-再灌注过程中可以产生少量的氧自由基。少量氧自由基在预处理效应中起着一定的作用[10]。通过儿茶酚胺类和/或氧自由基介导，调动心肌内源性保护物质的释放而显示IPC效应。
[参 考 文 献]
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[1] Chomzynski P,Sacchi N.Single-step method of RNA isolation by acid guanidinuium thiocynate-phend-chloroform extraction[J]. Anal Biochem,1987,162:156-159.
[2] 小川和郎，中根一穗，主编. 酶组织细胞化学技术[M]. 钟慈声主译.上海：上海医科大学出版社，1989. 132-135.
[3] Vegh A,Szekers L, Parratt J. Preconditioning of the ischemic myocardium,involvement of the L-arginine nitric oxide pathway[J]. Br J Pharmacol,1992,107:648-652.
[4] Richard V, Blanc T, Kaeffer N,et al. Myocardial and coronary endothelial protective effects of acetylcholine after myocardial ischemia and reperfusion in rats: role of nitric oxide[J]. Br J Pharmacol,1995,115:1532-1538.
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[5] 肖献忠，王燕如，黄生宁，等.从热休克基因表达探讨心肌细胞对损伤的内源性保护作用及机制[J]. 中国病理生理杂志,1995,11:741-742.
[6] Mestril R,Chi S,Sayen R,et al.Expression of inducible stress protein 70 in rat heart myogenic cells confers protection against simulated ischemia-induced injury[J]. J Clin Invest,1994,93:759-767.
[7] Kitakaze M,Hori M,Takashima S,et al.Ischemic preconditioning increases adenosine and 5'-nucleotidase activity during myocardial ischemia and reperfusion in dogs: Implication for myocardiol salvage[J]. Circulation,1993,87:H208-215.
, 百拇医药
[8] Currie RW, Karmazyn M, Kloc M, et al. Heat shock response is associated with enhanced postischemic ventricular recovery[J]. Circ Res,1988,63:543-549.
[9] Hale SL,Kloner RA.Protection of myocardium by transient preischemic administration of phenylephin in the rabbit[J]. Coron Artery Dis,1994,5:605-611.
[10] Ambrosio G, Tritto I, Chaiariello M.The role of oxygen free radical in preconditioning[J]. J Mol Cell Cardiol, 1995, 27:1035-1039.
[收稿日期] 1999-06-03 [修回日期] 1999-12-14, 百拇医药