离体灌流大鼠胸主动脉环Na＋／H＋交换的意义
作者：贾月霞 吴克谦 时安云
单位：贾月霞 吴克谦(宁夏医学院病理生理教研室，宁夏 银川 750004)；时安云(北京医科大学病理生理教研室， 北京 100083)
关键词：
中国病理生理杂志0010141
目的：NH4Cl负荷是一经典的酸化细胞内环境的手段，这种方法广泛地用于各种组织细胞pH值的研究。已证实Na+/H+交换体存在于哺乳类动物的心肌细胞、平滑肌细胞等的细胞膜，此转运系统对细胞外Na+和细胞内H+进行1∶1交换，当细胞内酸负荷增加即细胞内pH(pHi)降低时，Na+/H+交换体被激活，其主要生理作用是调节pHi和细胞内Na+([Na+]i)。方法：应用离体血管环灌流方法，采用Na+/H+交换抑制剂Amiloride证实大鼠离体胸主动脉环Na+/H+交换的存在，以及其对血管环平衡30 min，换用20 mmol/L 的NH4Cl的Kreb′s液灌流15 min后，随机分为两组：(1)对照组(n=5)：恢复常规Kreb's液15 min；(2)给药组(n=9)：在常规Kreb's液中冲洗时加入10-4 mmol/L Amiloride以抑制Na+/H+交换。结果：给药组与预灌时比较大鼠胸主动脉环对苯肾上腺素(Phenylephrine， PE)引起的收缩反应明显降低(P<0.001)，与对照组比较也明显降低(P<0.001)；给药组乙酰胆碱(acetylcholine， Ach)引起的内皮依赖性舒张反应与预灌时比较明显增强，与对照组比较也明显增强(P<0.05～0.001)；去内皮环在NH+4负荷阶段出现自发性收缩波，与完整内皮比较有显著差异(P<0.001)；对照组血管环Na+、Ca2+、K+含量均高于给药组(P<0.05， P<0.001)。组织细胞用含有NH4Cl的液体孵育10至15 min后，NH+4依电化学梯度顺着钾通道进入细胞，引起细胞内pH值上升，此时换用不含NH+4Cl的液体冲洗时，细胞内NH+4解离为NH3及H+，NH+3逸出细胞而将NH+3滞留于细胞内等致pHi下降；经常规缓冲液冲洗后，酸化的pHi在数分钟内又可恢复，这主要依赖于细胞膜上存在有Na+/H+交换，将细胞内H+排出细胞外，而相同数量的Na+进入细胞，这一调节机制可被Amiloride抑制，因而阻滞酸化血管平滑肌、内皮细胞pHi的恢复，处于严重的酸中毒。从而出现一系列功能改变。结论：(1)Amiloride敏感的Na+/H+交换存在于灌流的离体血管环；(2)酸化条件下，Na+/H+交换对血管环pHi值的恢复起重要作用；(3)稳定的pHi条件对维持血管的正常生理活动起重要作用；(4)血管内皮细胞的完整对血管平滑肌舒宿起调节作用。, 百拇医药
单位：贾月霞 吴克谦(宁夏医学院病理生理教研室，宁夏 银川 750004)；时安云(北京医科大学病理生理教研室， 北京 100083)
关键词：
中国病理生理杂志0010141
目的：NH4Cl负荷是一经典的酸化细胞内环境的手段，这种方法广泛地用于各种组织细胞pH值的研究。已证实Na+/H+交换体存在于哺乳类动物的心肌细胞、平滑肌细胞等的细胞膜，此转运系统对细胞外Na+和细胞内H+进行1∶1交换，当细胞内酸负荷增加即细胞内pH(pHi)降低时，Na+/H+交换体被激活，其主要生理作用是调节pHi和细胞内Na+([Na+]i)。方法：应用离体血管环灌流方法，采用Na+/H+交换抑制剂Amiloride证实大鼠离体胸主动脉环Na+/H+交换的存在，以及其对血管环平衡30 min，换用20 mmol/L 的NH4Cl的Kreb′s液灌流15 min后，随机分为两组：(1)对照组(n=5)：恢复常规Kreb's液15 min；(2)给药组(n=9)：在常规Kreb's液中冲洗时加入10-4 mmol/L Amiloride以抑制Na+/H+交换。结果：给药组与预灌时比较大鼠胸主动脉环对苯肾上腺素(Phenylephrine， PE)引起的收缩反应明显降低(P<0.001)，与对照组比较也明显降低(P<0.001)；给药组乙酰胆碱(acetylcholine， Ach)引起的内皮依赖性舒张反应与预灌时比较明显增强，与对照组比较也明显增强(P<0.05～0.001)；去内皮环在NH+4负荷阶段出现自发性收缩波，与完整内皮比较有显著差异(P<0.001)；对照组血管环Na+、Ca2+、K+含量均高于给药组(P<0.05， P<0.001)。组织细胞用含有NH4Cl的液体孵育10至15 min后，NH+4依电化学梯度顺着钾通道进入细胞，引起细胞内pH值上升，此时换用不含NH+4Cl的液体冲洗时，细胞内NH+4解离为NH3及H+，NH+3逸出细胞而将NH+3滞留于细胞内等致pHi下降；经常规缓冲液冲洗后，酸化的pHi在数分钟内又可恢复，这主要依赖于细胞膜上存在有Na+/H+交换，将细胞内H+排出细胞外，而相同数量的Na+进入细胞，这一调节机制可被Amiloride抑制，因而阻滞酸化血管平滑肌、内皮细胞pHi的恢复，处于严重的酸中毒。从而出现一系列功能改变。结论：(1)Amiloride敏感的Na+/H+交换存在于灌流的离体血管环；(2)酸化条件下，Na+/H+交换对血管环pHi值的恢复起重要作用；(3)稳定的pHi条件对维持血管的正常生理活动起重要作用；(4)血管内皮细胞的完整对血管平滑肌舒宿起调节作用。, 百拇医药