AAV载体介导的人β2-AR、EGFP基因导入心肌细胞的研究
作者：高文谦 李小鹰 吴小兵 李梁 裴雪涛
单位：高文谦 李小鹰(解放军总医院老年心内科，北京 100853)；吴小兵 李梁(中国预防医学科学院病毒学研究所)；裴雪涛(军事医学学院国家生物学分析中心)
关键词：
中国病理生理杂志0010118
目的：观察腺相关病毒(adeno-assoiated virus,简称AAV)载体介导的人β2肾上腺素能受体(简称β2-AR)基因和增强型绿色荧光蛋白基因(简称EGFP)对心肌细胞的转染及其表达。 方法：构建以串联方式携带β2-AR、EGFP基因的AAV载体，转染大鼠的心肌细胞，检测心肌细胞β2-AR、 EGFP的表达及cAMP的含量。结果：Northern印迹杂交显示转染的心肌细胞表达人β2-AR mRNA;Western免疫印迹杂交分析表明转染的心肌细胞有人β2-AR；并在荧光显微镜下可观察到心肌细胞表达EGFP；放射性配基检测显示转基因心肌细胞的β2-AR密度(204.0±6.4 fmol/mg蛋白)明显高于未转染的心肌细胞(76.0±2.8 fmol/mg蛋白)(P<0.01);经10 μmol/L异丙肾上腺素作用，转基因的心肌细胞的cAMP量(116.2±5.8 pmol/106cells)明显高于对照组(58.4±4.6 pmol/106 cells)(P<0.01)。结论：人β2-AR、EGFP基因经AAV载体导入心肌细胞后能有效地表达，且表达人β2-AR具有激活肾上腺素信号的作用。, 百拇医药
单位：高文谦 李小鹰(解放军总医院老年心内科，北京 100853)；吴小兵 李梁(中国预防医学科学院病毒学研究所)；裴雪涛(军事医学学院国家生物学分析中心)
关键词：
中国病理生理杂志0010118
目的：观察腺相关病毒(adeno-assoiated virus,简称AAV)载体介导的人β2肾上腺素能受体(简称β2-AR)基因和增强型绿色荧光蛋白基因(简称EGFP)对心肌细胞的转染及其表达。 方法：构建以串联方式携带β2-AR、EGFP基因的AAV载体，转染大鼠的心肌细胞，检测心肌细胞β2-AR、 EGFP的表达及cAMP的含量。结果：Northern印迹杂交显示转染的心肌细胞表达人β2-AR mRNA;Western免疫印迹杂交分析表明转染的心肌细胞有人β2-AR；并在荧光显微镜下可观察到心肌细胞表达EGFP；放射性配基检测显示转基因心肌细胞的β2-AR密度(204.0±6.4 fmol/mg蛋白)明显高于未转染的心肌细胞(76.0±2.8 fmol/mg蛋白)(P<0.01);经10 μmol/L异丙肾上腺素作用，转基因的心肌细胞的cAMP量(116.2±5.8 pmol/106cells)明显高于对照组(58.4±4.6 pmol/106 cells)(P<0.01)。结论：人β2-AR、EGFP基因经AAV载体导入心肌细胞后能有效地表达，且表达人β2-AR具有激活肾上腺素信号的作用。, 百拇医药