益心口服液对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞内钙离子的影响
作者：卫洪昌 王秀薇 朱晓梅 程金波
单位：上海中医药大学，上海 200032
关键词：
中国病理生理杂志001068
目的：观察益心口服液对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞内钙离子的影响。方法：(1)采用大鼠左冠状动脉前降支结扎、放松制造急性心肌缺血再灌注模型。动物分成正常组、假手术组、模型组、预处理组、益心口服液组、消心痛组(各10只)。(2)心肌细胞内Ca2+测定：离体心脏挂于Langendorff上，用无钙的K-H液恒压灌流5 min(6～8 mL/min)，然后用含50 μmol/L CaCl2、0.1% Ⅱ型胶原酶的K-H液恒压灌流30 min，取下心脏，剪去心房和大血管组织，用含0.1% Ⅱ型胶原酶、50 μmol/L CaCl2、1%BSA的K-H液恒温震荡消化心肌组织，连续3次，200目筛网过筛，500 r/min离心5 min，然后以含125、250、750、1000 mmol/L钙离子的K-H液逐步提高浓度，最后以K-H液悬浮。台盼蓝排斥试验检查，细胞存活率85%以上。灌流液始终保持在37℃，并予以95% O2充之。心肌细胞悬液中加入用DMSO配制的0.5 mmol/L Furu-2/AM(终浓度5 μmol/L)，37℃恒温震荡孵育40 min，调整细胞数106～107/mL。检测采用F-4500型荧光分光光度计，发射光波长510 nm，激发光波长340 nm，激发光栅5 nm，发射光栅10 nm，固定在340 nm波长测定细胞静息状态下荧光值，加入20 μL 10% Triton-X-100测Fmax，后加入100 μL 120 mmol/L EGTA 测Fmin。根据公式：[Ca2+]I=kd(F-Fmin)/(Fmax-F),其中kd=224 nmol/L。结果：(1)正常组大鼠心肌细胞内Ca2+浓度为(153.78±32.11) nmol/L，假手术组为(175.35±47.84) nmol/L，模型组为(619.07±51.83) nmol/L，预处理组为(328.95±28.05) nmol/L，益心口服液组为(463.54±82.70) nmol/L，消心痛组为(450.22±59.99) nmol/L。模型组的心肌细胞内Ca2+浓度明显高于正常组、假手术组(P<0.01)；而预处理组和药物组Ca2+浓度均低于模型组(P<0.05)，但仍高于正常组(P<0.05)；预处理组Ca2+浓度明显低于药物组(P<0.05)，两药物组之间比较无显著差别。结论：大鼠心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞内Ca2+超载，缺血预处理、益心口服液、消心痛均能通过降低心肌细胞内Ca2+浓度减轻心肌损害，缺血预处理的效果最佳，益心口服液与消心痛之间无显著差异。
上海市自然科学基金项目(No 99ZB14045), 百拇医药
单位：上海中医药大学，上海 200032
关键词：
中国病理生理杂志001068
目的：观察益心口服液对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞内钙离子的影响。方法：(1)采用大鼠左冠状动脉前降支结扎、放松制造急性心肌缺血再灌注模型。动物分成正常组、假手术组、模型组、预处理组、益心口服液组、消心痛组(各10只)。(2)心肌细胞内Ca2+测定：离体心脏挂于Langendorff上，用无钙的K-H液恒压灌流5 min(6～8 mL/min)，然后用含50 μmol/L CaCl2、0.1% Ⅱ型胶原酶的K-H液恒压灌流30 min，取下心脏，剪去心房和大血管组织，用含0.1% Ⅱ型胶原酶、50 μmol/L CaCl2、1%BSA的K-H液恒温震荡消化心肌组织，连续3次，200目筛网过筛，500 r/min离心5 min，然后以含125、250、750、1000 mmol/L钙离子的K-H液逐步提高浓度，最后以K-H液悬浮。台盼蓝排斥试验检查，细胞存活率85%以上。灌流液始终保持在37℃，并予以95% O2充之。心肌细胞悬液中加入用DMSO配制的0.5 mmol/L Furu-2/AM(终浓度5 μmol/L)，37℃恒温震荡孵育40 min，调整细胞数106～107/mL。检测采用F-4500型荧光分光光度计，发射光波长510 nm，激发光波长340 nm，激发光栅5 nm，发射光栅10 nm，固定在340 nm波长测定细胞静息状态下荧光值，加入20 μL 10% Triton-X-100测Fmax，后加入100 μL 120 mmol/L EGTA 测Fmin。根据公式：[Ca2+]I=kd(F-Fmin)/(Fmax-F),其中kd=224 nmol/L。结果：(1)正常组大鼠心肌细胞内Ca2+浓度为(153.78±32.11) nmol/L，假手术组为(175.35±47.84) nmol/L，模型组为(619.07±51.83) nmol/L，预处理组为(328.95±28.05) nmol/L，益心口服液组为(463.54±82.70) nmol/L，消心痛组为(450.22±59.99) nmol/L。模型组的心肌细胞内Ca2+浓度明显高于正常组、假手术组(P<0.01)；而预处理组和药物组Ca2+浓度均低于模型组(P<0.05)，但仍高于正常组(P<0.05)；预处理组Ca2+浓度明显低于药物组(P<0.05)，两药物组之间比较无显著差别。结论：大鼠心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞内Ca2+超载，缺血预处理、益心口服液、消心痛均能通过降低心肌细胞内Ca2+浓度减轻心肌损害，缺血预处理的效果最佳，益心口服液与消心痛之间无显著差异。
上海市自然科学基金项目(No 99ZB14045), 百拇医药