Wilms瘤p16基因的表达
作者：杨立业 王惠忠 高红
单位：中国医科大学附属第二医院，卫生部小儿先天畸形重点实验室，辽宁沈阳，110003
关键词：Wilms瘤；p16基因；免疫组织化学；病理；临床分期
苏州医学院学报001007 摘要 目的 探讨p16基因表达产物p16在Wilms瘤中的表达及其与病理分型和临床分期间的关系。方法 应用免疫组织化学S-P方法常规进行染色。结果 52例Wilms瘤中，p16表达阳性在预后好的病理分型和预后差的病理分型分别为37.2%、0%，两组差异显著(P<0.05)。p16阳性表达在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为91%、60%、40%、6.67%。4期间比较，差异显著(P<0.05)。结论 p16蛋白表达与病理分型及临床分期有关，p16蛋白失活是Wilms发生发展中的晚期事件。
中图法分类号 R736.6
, 百拇医药
p16 Gene Expression in Wilms Tumors
Yang Liye, Wang Huizhong, Gao Hong
(The Key Laboratory of Congenital Malformation，The Second Hospital Affiliated
to China Medical University,Liaonin Shenyang,110003)
Abstract Objective To investigate the p16 gene expression and its relationship with pathological type and clinical stage.Methods Fifty four Wilms tumors specimen were stained by S-P immunohistochemical method routinely.Results Positive expression rate of p16 gene were 37.2% (16/43) and 0% (0/9) in favorable pathological type and unfavorable pathological type respectively,and there was significant correlation between the two groups (P<0.05).Positive expression rate of p16 gene were 91% (10/11),60% (3/5),40% (2/5) 6.67% (1/15) in Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ clinical stage respectively,there was significant correlation among the four groups.Conclusion Positive expression of p16 gene is significantly correlated with pathological type and clinical stage,p16 inactivation is the later event of this tumor progression.
, 百拇医药
Key words Wilms tumor;p16 gene;immunohistochemistry
p16基因是一种抑癌基因，又称多种肿瘤抑制基因(multiple tumor suppressor gene,MTSI),位于人类第9号染色体短臂上(9p21)。其产物p16对细胞的生长起负性调节作用[1]。通过PCR、印迹杂交和SSCP等研究发现多种肿瘤细胞株中的p16基因缺失或突变率较高。但有关p16基因的产物p16蛋白在Wilms瘤中的表达目前尚未见报道。为探讨p16蛋白与Wilms瘤的关系，本文研究结果报道于下。
1 研究资料
1.1 材料和方法 52例Wilms瘤，标本均来自中国医科大学附二院小儿外科1978～1990年手术切除标本。发病年龄为2个月～14岁，小于5岁者40例。双侧1例，肾外型1例。男27例，女25例。其主要症状为：腹部包块36例次，血尿5例次，腹痛15例次，肠梗阻1例次，高血压1例次。标本经10%福尔马林固定，石腊包埋，4～6μm厚制片，HE、Giemsa等染色，诊断均经病理学证实。
, http://www.100md.com
p16蛋白检测采用免疫组织化学S-P法，抗p16多克隆抗体(Maxim),切片经微波处理后，按S-P法进行染色，阳性对照为已知胰腺癌阳性切片，7例正常肾组织标本为正常对照组，阴性对照用PBS代替p16抗体，阳性表达以细胞内出现明显的棕色颗粒且肿瘤细胞阳性总数大于30%为判断标准。
Wilms的临床分期按NWTS-3[2] 标准进行。病床分型按Beckwith[3]标准进行。对p16蛋白表达在Wilms瘤不同分组间的差异显著性用x2检验予以判断。
1.2 结果
1.2.1 p16蛋白表达在Wilms瘤和正常肾组织中的分布 7例肿瘤周围正常肾组织中，大部分肾小管上皮细胞内出现阳性表达，肾小球细胞中无阳性表达。正常肾组织和肿瘤组织中的血管内皮细胞阳性表达。浸润到肿瘤中的淋巴细胞内p16阳性表达。肿瘤细胞只在部分预后好的组织类型中阳性表达(附图)，预后差的肿瘤细胞中无阳性表达。
, http://www.100md.com
附图 Wilms瘤细胞p16蛋白阳性表达(×200)
1.2.2 p16蛋白表达与Wilms瘤的组织学类型，临床分期间的关系 见表1，可见p16蛋白阳性表达主要出现在混合型、间叶型、上皮型、胚芽型等预后好的Wilms瘤细胞中(16/43)，而预后差的Wilms瘤p16蛋白表达均为阴性(0/9)。两者比较差异显著(P<0.05)。由表2可见，NWTS-3不同分期之间p16蛋白的阳性表达有显著性差异(P<0.05)。其中，Ⅰ期与Ⅳ期之间差异也显著(P<0.05)。表1 p16蛋白在Wilms瘤及对照组表达 类 别
n
p16阳性
p16阴性
正常肾
7
, 百拇医药
7
0
预后好的病理分型
43
16
27
预后差的病理分型
9
0
9
表2 p16蛋白在不同临床分期的表达 临床分期
n
p16阳性
, http://www.100md.com
p16阴性
Ⅰ
21
10
11
Ⅱ
8
3
5
Ⅲ
7
2
5
Ⅳ
, http://www.100md.com
16
1
15
1.2.3 p16蛋白表达与预后 肿瘤患者5年生存率p16蛋白表达阳性者为87.5%(14/16)。p16表达阴性者为69.4%(25/36)。两者无显著性差异。
2 讨论
肿瘤抑制基因p16位于9号染色体短臂9p21，编码一个由148个氨基酸组成，分子量为16kD的蛋白质。在正常细胞中，周期素依赖激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)与周期素D(cyclin D)结合，刺激ATP和去磷酸化的Rb蛋白和TF因子，从而使细胞分裂，p16蛋白通过抑制CDK4而阻止细胞由G1期进入S期，抑制细胞增殖[1]。
本研究的52例Wilms组织标本中，16例(16/52)p16蛋白表达阳性，阳性部位均在癌细胞质中。文献中有关p16基因的缺失和突变的报道较多[6]，但目前尚未见到p16蛋白在Wilms瘤中表达研究。
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本组资料中，Wilms瘤p16蛋白阳性表达率为30.8%(16/52)。阳性表达均发生在预后好的病理分型肿瘤中，而在预后差的病理分型肿瘤中无阳性表达，两者间差异显著。p16蛋白的表达在不同的临床分期间有显著性差异，提示p16蛋白的失活可能是肿瘤发展中的晚期事件。
p16蛋白功能丧失可能由于p16基因缺失或突变。尤其是ankyrin重复序列的突变或缺失，其中第4ankyrin重复序列缺失将使p16蛋白的功能完全丧失[4]。光炜等发现，p16基因在Wilms瘤中缺失的现象，但其缺失率较低(1/24)[6]。仅p16基因的缺失不能解释p16蛋白在Wilms瘤中的失活，还有其他的机制在起作用。Merlo等研究[5]证实，p16基因启动子区域的甲基化是p16基因失活的另一种机制。Wilms瘤中启动子区域是否有甲基化发生，还需进一步研究。
杨立业苏州医学院附属第一医院99级博士研究生
, 百拇医药
参考文献
1，Kamb A,Gruis NA,Weaver-Feldhaus J,et al.A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types. Science,1994,264∶436
2，D'Angio GJ,Breslow N,Beckwith JB,et al.The treatment of Wilms tumor,results of the third national Wilms tumor study.Cancer,1989,64∶349
3，Beckwith JB,Palmer NF.Histopathology and prognosis of Wilms tumor.Cancer,1978,41∶1937
, http://www.100md.com
4，Rong Yang,Adrion F,Gombart,et al.Mutational effects on the p16INK4a tumor suppressor protein.Cancer Research,1995,55∶2503
5，Adrian Merlo,James G,Herman JG,et al.5'CpG island methylation is associated with transcriptional silencing of the tumor suppressor p16/CDKN2/MTS1 in human cancers.Nature Medicine,1995,1(7)∶686
6，光 炜，王 菁，杜伟书，等.Wilms瘤中p16基因缺失一例报告.中华医学遗传学杂志，1997，14(1)∶28
(2000年3月20日收稿), http://www.100md.com
单位：中国医科大学附属第二医院，卫生部小儿先天畸形重点实验室，辽宁沈阳，110003
关键词：Wilms瘤；p16基因；免疫组织化学；病理；临床分期
苏州医学院学报001007 摘要 目的 探讨p16基因表达产物p16在Wilms瘤中的表达及其与病理分型和临床分期间的关系。方法 应用免疫组织化学S-P方法常规进行染色。结果 52例Wilms瘤中，p16表达阳性在预后好的病理分型和预后差的病理分型分别为37.2%、0%，两组差异显著(P<0.05)。p16阳性表达在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为91%、60%、40%、6.67%。4期间比较，差异显著(P<0.05)。结论 p16蛋白表达与病理分型及临床分期有关，p16蛋白失活是Wilms发生发展中的晚期事件。
中图法分类号 R736.6
, 百拇医药
p16 Gene Expression in Wilms Tumors
Yang Liye, Wang Huizhong, Gao Hong
(The Key Laboratory of Congenital Malformation，The Second Hospital Affiliated
to China Medical University,Liaonin Shenyang,110003)
Abstract Objective To investigate the p16 gene expression and its relationship with pathological type and clinical stage.Methods Fifty four Wilms tumors specimen were stained by S-P immunohistochemical method routinely.Results Positive expression rate of p16 gene were 37.2% (16/43) and 0% (0/9) in favorable pathological type and unfavorable pathological type respectively,and there was significant correlation between the two groups (P<0.05).Positive expression rate of p16 gene were 91% (10/11),60% (3/5),40% (2/5) 6.67% (1/15) in Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ clinical stage respectively,there was significant correlation among the four groups.Conclusion Positive expression of p16 gene is significantly correlated with pathological type and clinical stage,p16 inactivation is the later event of this tumor progression.
, 百拇医药
Key words Wilms tumor;p16 gene;immunohistochemistry
p16基因是一种抑癌基因，又称多种肿瘤抑制基因(multiple tumor suppressor gene,MTSI),位于人类第9号染色体短臂上(9p21)。其产物p16对细胞的生长起负性调节作用[1]。通过PCR、印迹杂交和SSCP等研究发现多种肿瘤细胞株中的p16基因缺失或突变率较高。但有关p16基因的产物p16蛋白在Wilms瘤中的表达目前尚未见报道。为探讨p16蛋白与Wilms瘤的关系，本文研究结果报道于下。
1 研究资料
1.1 材料和方法 52例Wilms瘤，标本均来自中国医科大学附二院小儿外科1978～1990年手术切除标本。发病年龄为2个月～14岁，小于5岁者40例。双侧1例，肾外型1例。男27例，女25例。其主要症状为：腹部包块36例次，血尿5例次，腹痛15例次，肠梗阻1例次，高血压1例次。标本经10%福尔马林固定，石腊包埋，4～6μm厚制片，HE、Giemsa等染色，诊断均经病理学证实。
, http://www.100md.com
p16蛋白检测采用免疫组织化学S-P法，抗p16多克隆抗体(Maxim),切片经微波处理后，按S-P法进行染色，阳性对照为已知胰腺癌阳性切片，7例正常肾组织标本为正常对照组，阴性对照用PBS代替p16抗体，阳性表达以细胞内出现明显的棕色颗粒且肿瘤细胞阳性总数大于30%为判断标准。
Wilms的临床分期按NWTS-3[2] 标准进行。病床分型按Beckwith[3]标准进行。对p16蛋白表达在Wilms瘤不同分组间的差异显著性用x2检验予以判断。
1.2 结果
1.2.1 p16蛋白表达在Wilms瘤和正常肾组织中的分布 7例肿瘤周围正常肾组织中，大部分肾小管上皮细胞内出现阳性表达，肾小球细胞中无阳性表达。正常肾组织和肿瘤组织中的血管内皮细胞阳性表达。浸润到肿瘤中的淋巴细胞内p16阳性表达。肿瘤细胞只在部分预后好的组织类型中阳性表达(附图)，预后差的肿瘤细胞中无阳性表达。
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附图 Wilms瘤细胞p16蛋白阳性表达(×200)
1.2.2 p16蛋白表达与Wilms瘤的组织学类型，临床分期间的关系 见表1，可见p16蛋白阳性表达主要出现在混合型、间叶型、上皮型、胚芽型等预后好的Wilms瘤细胞中(16/43)，而预后差的Wilms瘤p16蛋白表达均为阴性(0/9)。两者比较差异显著(P<0.05)。由表2可见，NWTS-3不同分期之间p16蛋白的阳性表达有显著性差异(P<0.05)。其中，Ⅰ期与Ⅳ期之间差异也显著(P<0.05)。表1 p16蛋白在Wilms瘤及对照组表达 类 别
n
p16阳性
p16阴性
正常肾
7
, 百拇医药
7
0
预后好的病理分型
43
16
27
预后差的病理分型
9
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9
表2 p16蛋白在不同临床分期的表达 临床分期
n
p16阳性
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p16阴性
Ⅰ
21
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Ⅱ
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Ⅲ
7
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Ⅳ
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1.2.3 p16蛋白表达与预后 肿瘤患者5年生存率p16蛋白表达阳性者为87.5%(14/16)。p16表达阴性者为69.4%(25/36)。两者无显著性差异。
2 讨论
肿瘤抑制基因p16位于9号染色体短臂9p21，编码一个由148个氨基酸组成，分子量为16kD的蛋白质。在正常细胞中，周期素依赖激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)与周期素D(cyclin D)结合，刺激ATP和去磷酸化的Rb蛋白和TF因子，从而使细胞分裂，p16蛋白通过抑制CDK4而阻止细胞由G1期进入S期，抑制细胞增殖[1]。
本研究的52例Wilms组织标本中，16例(16/52)p16蛋白表达阳性，阳性部位均在癌细胞质中。文献中有关p16基因的缺失和突变的报道较多[6]，但目前尚未见到p16蛋白在Wilms瘤中表达研究。
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本组资料中，Wilms瘤p16蛋白阳性表达率为30.8%(16/52)。阳性表达均发生在预后好的病理分型肿瘤中，而在预后差的病理分型肿瘤中无阳性表达，两者间差异显著。p16蛋白的表达在不同的临床分期间有显著性差异，提示p16蛋白的失活可能是肿瘤发展中的晚期事件。
p16蛋白功能丧失可能由于p16基因缺失或突变。尤其是ankyrin重复序列的突变或缺失，其中第4ankyrin重复序列缺失将使p16蛋白的功能完全丧失[4]。光炜等发现，p16基因在Wilms瘤中缺失的现象，但其缺失率较低(1/24)[6]。仅p16基因的缺失不能解释p16蛋白在Wilms瘤中的失活，还有其他的机制在起作用。Merlo等研究[5]证实，p16基因启动子区域的甲基化是p16基因失活的另一种机制。Wilms瘤中启动子区域是否有甲基化发生，还需进一步研究。
杨立业苏州医学院附属第一医院99级博士研究生
, 百拇医药
参考文献
1，Kamb A,Gruis NA,Weaver-Feldhaus J,et al.A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types. Science,1994,264∶436
2，D'Angio GJ,Breslow N,Beckwith JB,et al.The treatment of Wilms tumor,results of the third national Wilms tumor study.Cancer,1989,64∶349
3，Beckwith JB,Palmer NF.Histopathology and prognosis of Wilms tumor.Cancer,1978,41∶1937
, http://www.100md.com
4，Rong Yang,Adrion F,Gombart,et al.Mutational effects on the p16INK4a tumor suppressor protein.Cancer Research,1995,55∶2503
5，Adrian Merlo,James G,Herman JG,et al.5'CpG island methylation is associated with transcriptional silencing of the tumor suppressor p16/CDKN2/MTS1 in human cancers.Nature Medicine,1995,1(7)∶686
6，光 炜，王 菁，杜伟书，等.Wilms瘤中p16基因缺失一例报告.中华医学遗传学杂志，1997，14(1)∶28
(2000年3月20日收稿), http://www.100md.com