API0134对血小板α颗粒膜蛋白和血小板聚集的影响*
作者：李树生 赵华月 王琳 郭志凌
单位：同济医科大学附属同济医院 武汉 430030 急诊科 李树生；同济医科大学附属同济医院 武汉 430030 内科 赵华月 王琳 郭志凌
关键词：穿心莲有效成分；心肌梗死；α颗粒膜蛋白；溶栓；血小板聚集
同济医科大学学报990317 摘要 20例急性心肌梗死患者在溶栓后随机分为穿心莲有效成分(API0134，API)组与对照组，治疗15 d，均同时给予阿司匹林等药物。检测溶栓前后血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)浓度和ADP诱导的血小板聚集反应。结果表明，API组溶栓后72 h血浆GMP-140浓度轻度增加，对照组显著性增加(P<0.01)。API组GMP-140在溶栓后72 h和15 d均低于对照组，差异有显著意义(均为P<0.05)。API组1 min和5 min血小板聚集率均低于对照组，差异均有显著意义(72 h， P<0.05；15 d， P<0.01)。研究表明，API与阿司匹林联合应用可抑制溶栓后血小板的活化，优于阿司匹林单独应用，因此API有可能用于临床预防溶栓后的再闭塞。
, 百拇医药
Inhibitive Effects of API0134 against Activation of Platelets
on GMP-140 and Aggregation of Platelets
Li Shusheng1，Zhao Huayue2，Wang Lin2 et al
1 Department of Emergency Medicine, 2 Internal Medicine,Tongji Hospital， Tongji Medical University, Wuhan 430030
Abstract In order to investigate the inhibitive effects of API0134(API) on activation of platelets after thrombolytic therapy, 20 acute myocardiac infarction patients after thrombolytic treatment with urokinase were randomly divided into two groups-treated group with API and control group(n=10 in each group). API was given orally for 15 days，2 groups were all given Aspirin and other conservative agents.Plasma membrane glycoprotein-140(GMP-140), and ADP-induced aggregation rate of platelets were observed before and after thrombolytic treatment.In comparison with prethrombolytic treatment status, the concentration of GMP-140 72 h after API treatment was only slightly increased, whereas in control group markedly increased(P<0.01).Comparison between two groups showed the concentration of GMP-140 in treated group 72 h as well as 15 days after thrombolytic treatment was significantly lower than in control group (P<0.05).With regard to the rate of platelets aggregation the treated group showed significant lower value in the 1st and second phase than control group(P<0.05 after 72 h, P<0.01 after 15 days). This result showed that API combined with Aspirin may inhibit the activation of platelets after thrombolytic therapy,which was superior than by using Aspirin alone.Thus API might prevent from reocclusion after thrombolysis clinically.
, 百拇医药
Key words API0134; myocardiac infarction; membrane glycoprotein-140; thrombolysis; platelet aggregation
溶栓治疗在很大程度上改善了急性心肌梗死(AMI)患者的预后,但约有15%～20%的溶栓再通患者出现早期再闭塞。其发生与血小板活化密切相关[1]。穿心莲是一早已应用于临床的纯中药制剂,经提纯得到的穿心莲有效成分(Andrographis Paniculata Isolate-0134,API0134,API)具有较强的抗血小板和预防血栓形成能力[2，3]，动物实验证实，它具有预防心肌梗死溶栓后再闭塞作用。本实验旨在观察API对AMI患者溶栓后血小板α颗粒膜蛋白(GMP-140)和血小板聚集的影响。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 病例
20例AMI患者，平均年龄54.4岁(41～72岁)，起病时间为(5.0±1.3) h，确诊后静脉注射尿激酶1.5～2.0 U/kg体重(加入100 g/L葡萄糖100 ml中1 h内滴完)。溶栓再通后随机分为实验组和对照组,实验组给予API(本院药厂植化室提供)，剂量为600 mg，每d 2次，共15 d，实验组和对照组均按常规先给予阿司匹林300 mg口服，以后每d 80 mg，长期口服。其他治疗，包括硝酸酯类、钙拮抗剂等在两组之间无差异。年龄和心肌梗死部位在两组之间的分布无统计学差异。
1.2 标本处理
在溶栓前、溶栓后72 h及15 d分别测定血浆GMP-140浓度(放射免疫法，药盒由苏州医学院提供)，同时按常规分离富血小板血浆，测定ADP诱导的血小板聚集。
1.3 统计学处理
, http://www.100md.com
测定结果均以
±s表示，采用t检验进行统计学分析。
表1 API对血浆GMP-140浓度的影响(±s) 分 组
例数
GMP-140(μg/L)
基础
72 h
15 d
API
对照组
, 百拇医药 10
10
60.58±12.30
60.31±13.43
68.50
91.86
±14.61*
±22.87##
41.09
56.63
±11.34*
±12.70
, 百拇医药
与对照组比较 *P<0.05； 与基础值比较 ##P<0.01
2 结果
2.1 血浆GMP-140浓度
结果见表1，API组血浆GMP-140在溶栓后72 h仅轻度升高，对照组则明显升高(P<0.01)。API组GMP-140浓度在溶栓后72 h和15 d明显低于对照组，均为P<0.05。
2.2 ADP诱导的血小板聚集率
在溶栓后72 h和15 d，对照组5 min血小板聚集率增加，与基础值比较均为P<0.05。API组15 d时5 min血小板聚集率低于基础值，P<0.05。72 h和15 d时API组1 min和5 min血小板聚集率均显著低于对照组(P分别<0.05，<0.01)。见表2。
, 百拇医药
表2 API对溶栓后ADP诱导的血小板聚集率的影响(±s) 分 组
例数
血小板聚集率(%)
基础
72 h
15 d
API组
10
1 min
48.31
±16.02
, 百拇医药
50.14
±13.56*
40.15
±8.74**
5 min
62.25
±18.16
66.86
±12.95*
48.15
±9.34**#
, http://www.100md.com
对照组
10
1 min
54.23
±13.82
68.13
±18.45
54.18
±12.16
5 min
66.15
±15.30
86.67
, 百拇医药
±22.56#
83.70
±12.41#
与对照组比较 *P<0.05 **P<0.01； 与基础值比较 # P<0.05
2.3 副作用
用药期间发现API与阿司匹林合用，患者均能耐受，其胃肠道副作用发生率与单用阿司匹林组相当，也无出血等并发症。3 讨论
大量研究证实AMI患者溶栓治疗后血小板被激活，与溶栓再通后冠脉血管的再闭塞密切相关。其机制包括：①溶栓药物在促进纤溶的同时激活内源性凝血系统；②残余血栓促进血小板粘附；③残存狭窄产生剪切力激活血小板；④溶栓后内源性纤溶活性减低[1]。各种抗血小板药物的临床应用均表现出不同程度的抗溶栓后再闭塞作用，也进一步说明了血小板活化在再闭塞中的重要地位[4,5]。
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血小板活化时释放α颗粒、致密体、溶酶体等，GMP-140位于正常血小板内α颗粒膜上,当血小板活化释放颗粒内容物时，GMP-140才整合并表达在活化血小板表面，并进入血浆中，因此检测血浆GMP-140成为反映血小板活化程度的特异分子标志之一。研究表明，在AMI早期GMP-140即明显增高，在48～72 h达高峰，并在一定程度上反映疾病的严重程度，是检测AMI后血小板活化程度的敏感指标[6,7]。本研究表明，在溶栓后AMI患者血浆中GMP-140水平明显高于文献报道的非溶栓患者血浆GMP-140水平，再次证明溶栓可进一步使血小板活化。
自1987年以来,本研究室证明,API具有较强的抑制血小板活化和抗血栓形成作用[2,3]，最近又发现它可以预防犬AMI溶栓后冠状动脉的再闭塞。本研究表明，API与阿司匹林合用，可以抑制AMI患者溶栓后血小板的活化，表现为溶栓后血浆GMP-140水平无明显升高，而单用阿司匹林的对照组，血浆GMP-140水平仍显著增加。同时ADP诱导的血小板1 min和5 min聚集率在API组明显低于单用阿司匹林的对照组，因阿司匹林无5 min血小板聚集抑制作用,其5 min血小板聚集率要较基础值显著增加。表明单用阿司匹林并不能充分抑制溶栓后血小板的活化。并且二药合用患者耐受性良好。
, 百拇医药
* 国家自然科学基金资助课题项目(No. 39470859)
作者简介:李树生，男,1965年生,主治医师,博士
参考文献
1 Eisenberg P R.Mechanisms of reocclusion after coronary thrombolysis. Z Kardiol,1993,82(suppl 2):175
2 付良武,赵华月,熊一力等.API0134对四种诱聚剂致血小板聚集的影响. 中国药理学通报,1995,11(3):209
3 付良武,赵华月,熊一力等.API0134对大鼠血浆血栓素TXB2生成与血小板聚集的影响.中国病理生理杂志,1996,12(1):99
, http://www.100md.com
4 Roux S P,Tschopp T B,Huhn H et al.Effects of aspirin and a synthetic platelet glycoprotein Ⅱb/Ⅲa receptor antagonist(Ro43-5054) on coronary artery reperfusion and reocclusion after thrombolysis with tissue-type plasminogen in the dog.J Pharm Exp Ther,1993,264:501
5 Takiguchi Y,Asai F,Wada K et al.Comparison of antithrombotic effects of gpⅡb/Ⅲa receptor antagonist and TXA2 receptor antagonist in the guinea-pig thrombosis model:possible role of TXA2 in reocclusion after thrombolysis.Throm Haemostase,1995,73:683
6 吾柏铭,潘宜智,洪小苏等.急性心肌梗死血小板α颗粒膜蛋白的改变及意义.中华 心血管病杂志,1994,22(3):175
7 吴国新,阮长耿.125I标记单抗夹心法测定血浆GMP-140及其临床应用.中华核医学杂志,1993,13(4):232
(1998-06-29 收稿), 百拇医药
单位：同济医科大学附属同济医院 武汉 430030 急诊科 李树生；同济医科大学附属同济医院 武汉 430030 内科 赵华月 王琳 郭志凌
关键词：穿心莲有效成分；心肌梗死；α颗粒膜蛋白；溶栓；血小板聚集
同济医科大学学报990317 摘要 20例急性心肌梗死患者在溶栓后随机分为穿心莲有效成分(API0134，API)组与对照组，治疗15 d，均同时给予阿司匹林等药物。检测溶栓前后血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)浓度和ADP诱导的血小板聚集反应。结果表明，API组溶栓后72 h血浆GMP-140浓度轻度增加，对照组显著性增加(P<0.01)。API组GMP-140在溶栓后72 h和15 d均低于对照组，差异有显著意义(均为P<0.05)。API组1 min和5 min血小板聚集率均低于对照组，差异均有显著意义(72 h， P<0.05；15 d， P<0.01)。研究表明，API与阿司匹林联合应用可抑制溶栓后血小板的活化，优于阿司匹林单独应用，因此API有可能用于临床预防溶栓后的再闭塞。
, 百拇医药
Inhibitive Effects of API0134 against Activation of Platelets
on GMP-140 and Aggregation of Platelets
Li Shusheng1，Zhao Huayue2，Wang Lin2 et al
1 Department of Emergency Medicine, 2 Internal Medicine,Tongji Hospital， Tongji Medical University, Wuhan 430030
Abstract In order to investigate the inhibitive effects of API0134(API) on activation of platelets after thrombolytic therapy, 20 acute myocardiac infarction patients after thrombolytic treatment with urokinase were randomly divided into two groups-treated group with API and control group(n=10 in each group). API was given orally for 15 days，2 groups were all given Aspirin and other conservative agents.Plasma membrane glycoprotein-140(GMP-140), and ADP-induced aggregation rate of platelets were observed before and after thrombolytic treatment.In comparison with prethrombolytic treatment status, the concentration of GMP-140 72 h after API treatment was only slightly increased, whereas in control group markedly increased(P<0.01).Comparison between two groups showed the concentration of GMP-140 in treated group 72 h as well as 15 days after thrombolytic treatment was significantly lower than in control group (P<0.05).With regard to the rate of platelets aggregation the treated group showed significant lower value in the 1st and second phase than control group(P<0.05 after 72 h, P<0.01 after 15 days). This result showed that API combined with Aspirin may inhibit the activation of platelets after thrombolytic therapy,which was superior than by using Aspirin alone.Thus API might prevent from reocclusion after thrombolysis clinically.
, 百拇医药
Key words API0134; myocardiac infarction; membrane glycoprotein-140; thrombolysis; platelet aggregation
溶栓治疗在很大程度上改善了急性心肌梗死(AMI)患者的预后,但约有15%～20%的溶栓再通患者出现早期再闭塞。其发生与血小板活化密切相关[1]。穿心莲是一早已应用于临床的纯中药制剂,经提纯得到的穿心莲有效成分(Andrographis Paniculata Isolate-0134,API0134,API)具有较强的抗血小板和预防血栓形成能力[2，3]，动物实验证实，它具有预防心肌梗死溶栓后再闭塞作用。本实验旨在观察API对AMI患者溶栓后血小板α颗粒膜蛋白(GMP-140)和血小板聚集的影响。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 病例
20例AMI患者，平均年龄54.4岁(41～72岁)，起病时间为(5.0±1.3) h，确诊后静脉注射尿激酶1.5～2.0 U/kg体重(加入100 g/L葡萄糖100 ml中1 h内滴完)。溶栓再通后随机分为实验组和对照组,实验组给予API(本院药厂植化室提供)，剂量为600 mg，每d 2次，共15 d，实验组和对照组均按常规先给予阿司匹林300 mg口服，以后每d 80 mg，长期口服。其他治疗，包括硝酸酯类、钙拮抗剂等在两组之间无差异。年龄和心肌梗死部位在两组之间的分布无统计学差异。
1.2 标本处理
在溶栓前、溶栓后72 h及15 d分别测定血浆GMP-140浓度(放射免疫法，药盒由苏州医学院提供)，同时按常规分离富血小板血浆，测定ADP诱导的血小板聚集。
1.3 统计学处理
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测定结果均以
±s表示，采用t检验进行统计学分析。表1 API对血浆GMP-140浓度的影响(
±s) 分 组例数
GMP-140(μg/L)
基础
72 h
15 d
API
对照组
, 百拇医药 10
10
60.58±12.30
60.31±13.43
68.50
91.86
±14.61*
±22.87##
41.09
56.63
±11.34*
±12.70
, 百拇医药
与对照组比较 *P<0.05； 与基础值比较 ##P<0.01
2 结果
2.1 血浆GMP-140浓度
结果见表1，API组血浆GMP-140在溶栓后72 h仅轻度升高，对照组则明显升高(P<0.01)。API组GMP-140浓度在溶栓后72 h和15 d明显低于对照组，均为P<0.05。
2.2 ADP诱导的血小板聚集率
在溶栓后72 h和15 d，对照组5 min血小板聚集率增加，与基础值比较均为P<0.05。API组15 d时5 min血小板聚集率低于基础值，P<0.05。72 h和15 d时API组1 min和5 min血小板聚集率均显著低于对照组(P分别<0.05，<0.01)。见表2。
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表2 API对溶栓后ADP诱导的血小板聚集率的影响(
±s) 分 组例数
血小板聚集率(%)
基础
72 h
15 d
API组
10
1 min
48.31
±16.02
, 百拇医药
50.14
±13.56*
40.15
±8.74**
5 min
62.25
±18.16
66.86
±12.95*
48.15
±9.34**#
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对照组
10
1 min
54.23
±13.82
68.13
±18.45
54.18
±12.16
5 min
66.15
±15.30
86.67
, 百拇医药
±22.56#
83.70
±12.41#
与对照组比较 *P<0.05 **P<0.01； 与基础值比较 # P<0.05
2.3 副作用
用药期间发现API与阿司匹林合用，患者均能耐受，其胃肠道副作用发生率与单用阿司匹林组相当，也无出血等并发症。3 讨论
大量研究证实AMI患者溶栓治疗后血小板被激活，与溶栓再通后冠脉血管的再闭塞密切相关。其机制包括：①溶栓药物在促进纤溶的同时激活内源性凝血系统；②残余血栓促进血小板粘附；③残存狭窄产生剪切力激活血小板；④溶栓后内源性纤溶活性减低[1]。各种抗血小板药物的临床应用均表现出不同程度的抗溶栓后再闭塞作用，也进一步说明了血小板活化在再闭塞中的重要地位[4,5]。
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血小板活化时释放α颗粒、致密体、溶酶体等，GMP-140位于正常血小板内α颗粒膜上,当血小板活化释放颗粒内容物时，GMP-140才整合并表达在活化血小板表面，并进入血浆中，因此检测血浆GMP-140成为反映血小板活化程度的特异分子标志之一。研究表明，在AMI早期GMP-140即明显增高，在48～72 h达高峰，并在一定程度上反映疾病的严重程度，是检测AMI后血小板活化程度的敏感指标[6,7]。本研究表明，在溶栓后AMI患者血浆中GMP-140水平明显高于文献报道的非溶栓患者血浆GMP-140水平，再次证明溶栓可进一步使血小板活化。
自1987年以来,本研究室证明,API具有较强的抑制血小板活化和抗血栓形成作用[2,3]，最近又发现它可以预防犬AMI溶栓后冠状动脉的再闭塞。本研究表明，API与阿司匹林合用，可以抑制AMI患者溶栓后血小板的活化，表现为溶栓后血浆GMP-140水平无明显升高，而单用阿司匹林的对照组，血浆GMP-140水平仍显著增加。同时ADP诱导的血小板1 min和5 min聚集率在API组明显低于单用阿司匹林的对照组，因阿司匹林无5 min血小板聚集抑制作用,其5 min血小板聚集率要较基础值显著增加。表明单用阿司匹林并不能充分抑制溶栓后血小板的活化。并且二药合用患者耐受性良好。
, 百拇医药
* 国家自然科学基金资助课题项目(No. 39470859)
作者简介:李树生，男,1965年生,主治医师,博士
参考文献
1 Eisenberg P R.Mechanisms of reocclusion after coronary thrombolysis. Z Kardiol,1993,82(suppl 2):175
2 付良武,赵华月,熊一力等.API0134对四种诱聚剂致血小板聚集的影响. 中国药理学通报,1995,11(3):209
3 付良武,赵华月,熊一力等.API0134对大鼠血浆血栓素TXB2生成与血小板聚集的影响.中国病理生理杂志,1996,12(1):99
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4 Roux S P,Tschopp T B,Huhn H et al.Effects of aspirin and a synthetic platelet glycoprotein Ⅱb/Ⅲa receptor antagonist(Ro43-5054) on coronary artery reperfusion and reocclusion after thrombolysis with tissue-type plasminogen in the dog.J Pharm Exp Ther,1993,264:501
5 Takiguchi Y,Asai F,Wada K et al.Comparison of antithrombotic effects of gpⅡb/Ⅲa receptor antagonist and TXA2 receptor antagonist in the guinea-pig thrombosis model:possible role of TXA2 in reocclusion after thrombolysis.Throm Haemostase,1995,73:683
6 吾柏铭,潘宜智,洪小苏等.急性心肌梗死血小板α颗粒膜蛋白的改变及意义.中华 心血管病杂志,1994,22(3):175
7 吴国新,阮长耿.125I标记单抗夹心法测定血浆GMP-140及其临床应用.中华核医学杂志,1993,13(4):232
(1998-06-29 收稿), 百拇医药