HPLC法测定清火栀麦片中穿心莲内酯的含量
作者：赵登飞
单位：广西南宁地区药检所 南宁 530001
关键词：清火栀麦片；穿心莲内酯；HPLC法
广西中医学院学报000230
摘 要 【目的】建立清火栀麦片中穿心莲内酯的含量测定方法。【方法】HPLC法，以甲醇—水(50∶50，pH=4.5)为流动相，检测波长为225nm。【结果】加样回收率为98.4%，RSD=2.03%。【结论】该法测定结果准确，精密度、重现性均好，可用于该产品的质量控制。
中图分类号 R284
清火栀麦片收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十三册\{\[1\]\}。本品由穿心莲、栀子、麦冬组成，具有清火，解毒，凉血，消肿之功效，用于咽喉肿痛，急性扁桃腺炎，头痛等。穿心莲内酯为穿心莲的主要有效成分之一，本文以HPLC法测定其含量，报告如下。
, 百拇医药
1 仪器与试药
1.1 仪器 LC-10A高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD-10A紫外检测器，威玛通用多媒体色谱工作站，赛多利斯BP211D型十万分之一分析天平。1.2 试药 穿心莲内酯对照品，购自中国药品生物制品检定所(含量测定用)。样品：清火栀麦片为本所抽验样品，分别为广西A药厂(990181)；B药厂(991104012)；C药厂(991106057)。试剂：甲醇为优级纯；乙醇、氯仿、盐酸等试剂均为分析纯；水为离子交换水。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相∶甲醇—水(50∶50，用盐酸调至pH=4.5)；检测波长为225nm；流速0.8ml/min；理论塔板数按穿心莲内酯峰计不低于1000，分离度大于1.5，色谱图见图1。
, 百拇医药
图1 清火栀麦片及穿心莲内酯对照品HPLC图谱
2.2 标准曲线的绘制 精密称取穿心莲内酯10.13mg，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，溶解并摇匀，即得穿心莲内酯对照品溶液。取对照品溶液适量于12000r/min下离心10min，精密吸取上清液4μl、8μl、12μl、16μl、20μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，并以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，结果得一不通过原点的直线。回归方程为：y=2132488.908x+2318.38, r=0.9997。结果表明穿心莲内酯进样量在0.324～1.621mg之间呈良好的线性关系。
2.3 供试品溶液的制备 取样品10片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取适量(约0.5g)，置100ml三角烧瓶中，加乙醇25ml,超声处理60min，滤过，滤液加水使含醇量约为40%，用氯仿萃取4次(20ml，15ml，15ml，10ml)，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，滤过，定容至5ml的量瓶中，摇匀，即为供试品溶液。用前，取适量，于12000r/min下离心10min,取上清液进样分析。
, 百拇医药
2.4 精密度试验 取同一穿心莲内酯对照品溶液，重复测定5次，测得峰面积分别为：1832994，1880949，1886427，1823028，1889505，RSD为1.71%。说明精密度良好。
2.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，每隔2小时测定一次峰面积，结果得：1778584，1696461，1744056，1713420，RSD为2.1%,表明供试品溶液在6小时内稳定。
2.6 重复性试验 取同一批样品5份，按供试品溶液制备项下方法制备并测定，测得每片含量(mg)分别为：0.201, 0.218, 0.210, 0.207, 0.211，RSD为2.96%，表明重现性良好。
2.7 样品测定 精密吸取供试品溶液10μl及对照品溶液8μl和16μl，注入高效液相色谱仪，依法测定，按二点法计算含量。结果见表1：
, 百拇医药 表1 样品含量测定结果(n=3) 药厂
批号
每片平均含量(mg)
RSD(%)
A药厂
9901181
0.209
0.99
B药厂
991104012
1.217
2.05
, http://www.100md.com C药厂
991106057
1.626
2.13
2.8 回收率试验 精密称取已知含量的同一样品一定量5份，分别加入穿心莲内酯对照品(精密称取对照品4.45mg，配制成0.089mg/ml，精密加入2ml,即加入0.178mg)，按拟定方法配成5ml，进样10μl，测定峰面积，计算回收率，结果见表2：
表2 回收率试验结果 编号
样品量
(mg/5ml)
加入量
(mg/5ml)
, 百拇医药
测得量
(mg/5ml)
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
1
0.184
0.361
99.4
2
, 百拇医药
0.185
0.363
100.0
3
0.187
0.178
0.357
95.5
98.4
2.03
4
0.182
0.360
, 百拇医药
100.0
5
0.189
0.362
97.2
3 讨论
3.1 流动相调为弱酸性后，分离效果较好。是否由于穿心莲为内酯类化合物，遇酸后，内酯环闭合而影响其效果，还有待进一步研究。
4.2 提取方法的选择：穿心莲内酯的提取，文献报道有用索氏提取器，先加石油醚回流至无色，除去部分杂质后，再用乙醇回流3～4小时提取；另有用乙醇冷浸，放置过夜后，再超声处理一定时间，滤过即得[2]。作者认为第一种方法较为繁琐，第二种方法则对色谱柱不利。而本法简单，快捷，且能充分提取出穿心莲内酯，同时又能除去部分杂质，对色谱柱起到保护作用。
, http://www.100md.com
4.3 实验结果表明，不同厂家清火栀麦片中穿心莲内酯的含量相差甚远，究其原因与原料的来源、加工及不同生产厂家的质量把关等有关，但最为重要的原因是至今未有控制其含量的统一标准。因此，建议制定以穿心莲内酯作为清火栀麦片中穿心莲含量测定的标准，以利于更好地控制该产品的质量，保证药效。
参考文献
[1] 卫生部药典委员会.中药成方制剂第十三册.1997.194.
[2] 张 艺.中草药.RP-HPLC测定穿心莲片中穿心莲内酯含量.1995，26(4)：191，192
收稿日期：1999-10-19, http://www.100md.com
单位：广西南宁地区药检所 南宁 530001
关键词：清火栀麦片；穿心莲内酯；HPLC法
广西中医学院学报000230
摘 要 【目的】建立清火栀麦片中穿心莲内酯的含量测定方法。【方法】HPLC法，以甲醇—水(50∶50，pH=4.5)为流动相，检测波长为225nm。【结果】加样回收率为98.4%，RSD=2.03%。【结论】该法测定结果准确，精密度、重现性均好，可用于该产品的质量控制。
中图分类号 R284
清火栀麦片收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十三册\{\[1\]\}。本品由穿心莲、栀子、麦冬组成，具有清火，解毒，凉血，消肿之功效，用于咽喉肿痛，急性扁桃腺炎，头痛等。穿心莲内酯为穿心莲的主要有效成分之一，本文以HPLC法测定其含量，报告如下。
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1 仪器与试药
1.1 仪器 LC-10A高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD-10A紫外检测器，威玛通用多媒体色谱工作站，赛多利斯BP211D型十万分之一分析天平。1.2 试药 穿心莲内酯对照品，购自中国药品生物制品检定所(含量测定用)。样品：清火栀麦片为本所抽验样品，分别为广西A药厂(990181)；B药厂(991104012)；C药厂(991106057)。试剂：甲醇为优级纯；乙醇、氯仿、盐酸等试剂均为分析纯；水为离子交换水。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相∶甲醇—水(50∶50，用盐酸调至pH=4.5)；检测波长为225nm；流速0.8ml/min；理论塔板数按穿心莲内酯峰计不低于1000，分离度大于1.5，色谱图见图1。
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图1 清火栀麦片及穿心莲内酯对照品HPLC图谱
2.2 标准曲线的绘制 精密称取穿心莲内酯10.13mg，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，溶解并摇匀，即得穿心莲内酯对照品溶液。取对照品溶液适量于12000r/min下离心10min，精密吸取上清液4μl、8μl、12μl、16μl、20μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，并以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，结果得一不通过原点的直线。回归方程为：y=2132488.908x+2318.38, r=0.9997。结果表明穿心莲内酯进样量在0.324～1.621mg之间呈良好的线性关系。
2.3 供试品溶液的制备 取样品10片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取适量(约0.5g)，置100ml三角烧瓶中，加乙醇25ml,超声处理60min，滤过，滤液加水使含醇量约为40%，用氯仿萃取4次(20ml，15ml，15ml，10ml)，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，滤过，定容至5ml的量瓶中，摇匀，即为供试品溶液。用前，取适量，于12000r/min下离心10min,取上清液进样分析。
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2.4 精密度试验 取同一穿心莲内酯对照品溶液，重复测定5次，测得峰面积分别为：1832994，1880949，1886427，1823028，1889505，RSD为1.71%。说明精密度良好。
2.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，每隔2小时测定一次峰面积，结果得：1778584，1696461，1744056，1713420，RSD为2.1%,表明供试品溶液在6小时内稳定。
2.6 重复性试验 取同一批样品5份，按供试品溶液制备项下方法制备并测定，测得每片含量(mg)分别为：0.201, 0.218, 0.210, 0.207, 0.211，RSD为2.96%，表明重现性良好。
2.7 样品测定 精密吸取供试品溶液10μl及对照品溶液8μl和16μl，注入高效液相色谱仪，依法测定，按二点法计算含量。结果见表1：
, 百拇医药 表1 样品含量测定结果(n=3) 药厂
批号
每片平均含量(mg)
RSD(%)
A药厂
9901181
0.209
0.99
B药厂
991104012
1.217
2.05
, http://www.100md.com C药厂
991106057
1.626
2.13
2.8 回收率试验 精密称取已知含量的同一样品一定量5份，分别加入穿心莲内酯对照品(精密称取对照品4.45mg，配制成0.089mg/ml，精密加入2ml,即加入0.178mg)，按拟定方法配成5ml，进样10μl，测定峰面积，计算回收率，结果见表2：
表2 回收率试验结果 编号
样品量
(mg/5ml)
加入量
(mg/5ml)
, 百拇医药
测得量
(mg/5ml)
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
1
0.184
0.361
99.4
2
, 百拇医药
0.185
0.363
100.0
3
0.187
0.178
0.357
95.5
98.4
2.03
4
0.182
0.360
, 百拇医药
100.0
5
0.189
0.362
97.2
3 讨论
3.1 流动相调为弱酸性后，分离效果较好。是否由于穿心莲为内酯类化合物，遇酸后，内酯环闭合而影响其效果，还有待进一步研究。
4.2 提取方法的选择：穿心莲内酯的提取，文献报道有用索氏提取器，先加石油醚回流至无色，除去部分杂质后，再用乙醇回流3～4小时提取；另有用乙醇冷浸，放置过夜后，再超声处理一定时间，滤过即得[2]。作者认为第一种方法较为繁琐，第二种方法则对色谱柱不利。而本法简单，快捷，且能充分提取出穿心莲内酯，同时又能除去部分杂质，对色谱柱起到保护作用。
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4.3 实验结果表明，不同厂家清火栀麦片中穿心莲内酯的含量相差甚远，究其原因与原料的来源、加工及不同生产厂家的质量把关等有关，但最为重要的原因是至今未有控制其含量的统一标准。因此，建议制定以穿心莲内酯作为清火栀麦片中穿心莲含量测定的标准，以利于更好地控制该产品的质量，保证药效。
参考文献
[1] 卫生部药典委员会.中药成方制剂第十三册.1997.194.
[2] 张 艺.中草药.RP-HPLC测定穿心莲片中穿心莲内酯含量.1995，26(4)：191，192
收稿日期：1999-10-19, http://www.100md.com