人血清中反式曲马朵与反式氧去甲基曲马朵对映体的测定及其在治疗药物监测中的应用
作者：刘会臣 杨燕燕 王亚丽 胡玉钦 侯艳宁
单位：白求恩国际和平医院，石家庄 050082
关键词：反式曲马朵；反式氧去甲基曲马朵；对映体
中国临床药理学杂志000516
摘 要 目的：建立人血清中反式曲马朵((±)-trans T)与氧去甲基曲马朵((±)-M1)对映体的测定方法，研究血清中 (±)-trans T和(±)-M1对映体浓度与临床效果的关系。方法：以磺丁基-β-环糊精为手性选择剂，高效毛细管电泳(HPCE)法测定人血清中(±)-trans T与(±)-M1对映体的浓度；监测20例术后病人静滴盐酸(±)-trans T 400 mg.d-1 或 300 mg.d-1后血清中 (±)-trans T与 (±)-M1对映体浓度，并观察临床镇痛效果及药物不良反应。结果：血清中 (±)-trans T与 (±)-M1对映体分离效果良好，(±)-trans T与 (±)-M1对映体的线性范围分别为20～640 mg.L-1 和10～160mg.L-1，相对回收率在92.30%～107.80%之间，日内RSD小于10%，日间RSD小于15%，最低检测浓度为1.10mg.L-1。400 mg.d-1 组病人血清中(±)-trans T对映体的浓度、药物不良反应的发生率和严重程度明显高于300 mg.d-1 组病人，而400 mg.d-1组和300 mg.d-1组病人血清中(±)-M1对映体浓度及镇痛效果无明显区别。结论：所建立的HPCE方法可用于临床治疗药物监测。血清中(+)-M1的浓度与镇痛效果密切相关，(±)-trans T对映体浓度过高可能是药物不良反应的发生率增高和程度增强的原因之一。
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Determination of the Enantiomers of (±) -Trans Tramadol and (±)-Trans O-demethyltramadol in Human Serum and Its Application in Therapeutic Drug Monitoring
LIU Hui-CHen,YANG Yan-Yan,WANG Ya-Li,HU Yu-Qin,HOU Yan-Ning
(Bethune International Peace Hospital, Shijiazhuang 050082)
Abstract OBJECTIVE: To establish a method for determining the enantiomers of (±)-trans tramadol ((±)-trans T) and (±)-trans O-demethyltramadol ((±)-M1) in human serum, and to study the relationship between the clinical actions and the serum concentrations of the enantiomers of (±)-trans T and (±)-M1. METHODS: By using sulfobutylether-b-cyclodextrin as a chiral selector, a high performance capillary electrophoresis (HPCE) method was developed to analyze the enantiomers of (±)-trans T and (±)-M1. Twenty postoperative patients were divided into two groups and given multiple intravenous doses of (±)-trans T hydrochloride, 400 mg.d-1 or 300 mg.d-1. The relationship between the clinical actions and the serum concentrations of the enantiomers of (±)-trans T and (±)-M1was studied. RESULTS: The enantiomers of (±)-trans T and (±)-M1 in human serum were separated well. The linear ranges were 20～640 mg.L-1 for the enantiomers of (±)-trans T, 10～160 mg.L-1 for the enantiomers of (±)- M1. For the enantiomers of (±)-trans T and (±)-M1, the within-day and day-to-day RSDs were less than 10% and 15% respectively; the relative recoveries were from 92.30% to107.80%; the limit of detection was 1.10mg.L-1. The concentrations of the enantiomers of (±)-trans T, the frequency and serious level of adverse reactions were higher in 400 mg.d-1 group than that in 300 mg.d-1 group. The concentrations of the enantiomers of (±)- M1, and the analgesic effect were similar between the two groups. Conclusion: The HPCE method could be used in clinical therapeutic drug monitoring. There was close relationship between the analgesic effect and the concentration of (+)-M1 in serum. The frequency and serious level of adverse reactions might be attributed to the higher concentrations of the enantiomers of (±)-trans T, which may be due to the saturated metabolism.
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Key words (±)-trans tramadol; (±)-trans O-demethyltramadal; enantiomer
反式曲马朵(trans tramadol,(±)-trans T)为新型中枢镇痛药，临床上用于中度、中重度疼痛的治疗，不易引起呼吸抑制、成瘾和滥用。T分子中含两个手性碳原子，有四个立体异构体，其中(+)-(1R，2R)-T((+)-trans T)和(-)-(1S，2S)-T ((-)-trans T)为药用品。(+)-trans T和(-)-trans T的作用机理是抑制单胺递质的再摄取和促进单胺递质的释放，(+)-trans T的代谢物(+)-(1R，2R)-氧去甲基曲马多((+)-trans O-demethyltramadol, (+)-M1)则是通过激动μ-阿片受体而发挥作用[1,2]。为了评价和优化临床盐酸(±)-trans T的给药方案，本文在前文[3]基础上建立了同时测定人血清中(±)- trans T和(±)-M1对映体浓度的高效毛细管电泳(high performance capillary electrophoresis, HPCE)法，并研究了术后病人血清中 (±)-trans T和(±)-M1对映体浓度与临床效果的关系。
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材 料 与 方 法
1.仪器与试剂
P/ACE 5000 HPCE, 配紫外检测器及Gold色谱软件; 未涂层石英毛细管(75mm，i.d.), 总长37 cm, 有效长度30 cm, 美国Beckman公司产品。盐酸(±)-trans T(批号5D7416)、 盐酸(+)-trans T(批号06)、 盐酸(-)-trans T(批号07)、(±)-M1(批号TK168)， 德国Grünenthal Gmbh公司惠赠；盐酸(±)-cis T，锦州医学院化学教研室合成。磺丁基-β-环糊精，中国科学院兰州化物所合成；Tris，H3PO4，NaOH，HCl 均为市售分析纯；超纯水。
2.病例与分组
20例接受心胸外科肿瘤切除术后入住ICU病房的病人，受试前需征得受试者知情同意，随机分为两组。400 mg .d-1组：10例，男6例， 女4例；年龄(59±7)岁，体重(60±10)kg；贲门癌7例，食管癌2例，肺癌1例。300 mg.d-1组：10例，男8例，女2例；年龄(64±12)岁，体重(64±8)kg；贲门癌7例，食管癌2例，肺癌1例。两组病人术前、术中、术后的其它用药尽可能保持一致。
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3.药品与给药方法
盐酸(±)-trans T注射液，每支100 mg，德国Grünenthal Gmbh公司生产，批号9706。病人术后到ICU病房完全清醒后即开始给予盐酸(±)-trans T注射液，加于50mL生理盐水中恒速静滴，日剂量平均分为3次，每次6 h，间隔2 h。连续给药5次后，即第1次给药后38h取血3 mL，离心分离血清，冻存备用。
4.样品处理与测定
1 ml血清中加 1mg.L-1 盐酸cis T溶液100μl，0.5 mol.L-1 NaOH 0.5 ml，乙酸乙酯5 ml，充分混匀2 min，离心(5000 r.min-1)15 min，取上清液4 ml以氮气流吹干，残渣用100μl水溶解，取30μl上机分析。分析条件：磺丁基-β-环糊精以40 mmol.L-1 Tris缓冲液(H3PO4 调pH至2.5)溶解配制分离介质，磺丁基-β-环糊精的浓度0.8 mmol.L-1；进样电压10 kV，20 s，入口为阳极；分离电压15 kV，柱温25 ℃，检测波长214 nm。
, 百拇医药
5.临床效果评价
目测划线法(visual analgesic scale, VAS)记录用药后疼痛的程度，设0为无痛，10为重度疼痛。治疗开始后密切观察并记录出现的药物不良反应及其程度，并根据药物不良反应的判断标准判定不良反应与药物的关系。
6. 统计学处理
两组病人疼痛评分采用t-检验，药物不良反应发生率采用c2-检验。
结 果
1 血药浓度测定方法[3]
1.1 分离效果
T的四种立体异构体及(±)-M1对映体达到基线分离，且血清组分无干扰峰。(±)-cis T对映体的tR分别为8.16 min和8.73 mim ，(+)-trans T和(-)-trans T的tR分别为9.46 min和10.52 mim；(+)-M1和(-)-M1的tR分别为7.98 min和8.43 mim。典型电泳图谱见图1。
, 百拇医药
1.2 标准曲线
以(±)-cis T后出峰的对映体为内标，血清中(+)-trans T，(-)-trans T浓度在20～640 mg·L-1范围内，(+)-M1和(-)-M1浓度在10～60 mg.L-1范围内，其峰面积和内标峰面积的比值(Y)与浓度(X)呈良好的线性关系,回归方程分别为
(+)-trans T：Y=-0.1587+0.01827X(n=6, r=0.9957)；(-)-trans T：Y=-0.5037+0.01865X(n=6, r=0.9924)；(+)-M1：Y=-0.3020+0.02000X(n=5, r=0.9949)；(-)-M1：Y=0.1073+0.01987X(n=5, r=0.9980)。
, 百拇医药
Fig1. Electropherogram of a serum sample spicked with ( )-cis
tramadol. 1. an unknown metabolite; 2. (+)-trans O-demethyltramadol; 3.
one enantiomer of ( )-cis tramadol; 4. (-)-trans O-demethyltramadol;
5. another enantiomer of ( )-cis tramadol; 6. (+)-trans tramadol; 7. (-)-trans
tramadol
1.3 回收率、精密度和灵敏度
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取高、中、低3个已知浓度的样品进行日内、日间测定。 结果见表1，(+)-Trans-T，(-)-trans-T，(+)-M1，(-)-M1的相对回收率在92.30%～107.80%之间，日内RSDs小于10%，日间RSDs小于15%，最低检测浓度均为1.10ng.mL -1 (S/N>3)。
2. 血清中(±)-trans T及(±)-M1对映体浓度和比值
结果见表2。400 mg.d-1组病人血清中(+)- trans T，(-)- trans T以及(±)- trans T均明显高于300 mg.d-1组(P<0.001)；10例病人血清中，(±) - trans T对映体浓度基本一致(比值为0.97～1.03)的1例，(+)- trans T浓度低于(-)- trans T的2例，明显高的17例。表明大部分病人体内(±)- trans T自血中清除有立体选择性，且多数以(-)- trans T清除更快。
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400 mg.d-1组与300 mg.d-1组病人血清中(+)- M1，(-)- M1以及(±)-M1浓度无明显差异(P>0.05)；10例病人血清中，(±)- M1对映体浓度基本一致的3例，(+)- M1的浓度低于(-)- M1的16例，明显高的1例。表明大部分病人体内(±)-M1药代动力学过程(包括生成、分布和/或消除)具有立体选择性。
3. 临床效果
用药后12 h，24 h，36 h 评定镇痛效果。400 mg.d-1组和300 mg.d-1组病人疼痛评分分别为4.0±1.0和4.2±1.0, 两组病人间无明显差别(P>0.05)。
, 百拇医药
因为是术后病人，重点观察呕吐、恶心、出汗等明显的不良反应。400 mg.d-1组和300 mg.d-1组病人中出现恶心的分别为10例(100%)和5例(50%)(P<0.05)，出现呕吐的分别为6例(60%)和2例(20%)(P>0.05)，有出汗现象的分别为10例(100%)和8例(80%)(P>0.05)；此外，400 mg.d-1组病人中有3例(30%)出现严重呕吐，5例(50%)出现大汗淋漓(P<0.05)。这表明400 mg.d-1组病人的药物不良反应发生率和严重程度明显高于300 mg.d-1组病人。
Table 1.The precision and recovery of the assay of the enantiomers of (±)-trans tramadol
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((±)-trans T)and (±)-trans O-demethyltramadol((±)-M 1 )in serum(n=5) Added
Within-day
Day-to-Day
Found
RSD
Recovery
Found
RSD
Recovery
(μg.L-1)
(μg.L-1)
, 百拇医药
(%)
(%)
(mg.L-1)
(%)
(%)
(+)-trans T
40
42.40±2.56
6.04
106.00
41.20±3.62
8.79
103.00
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160
157.52±10.52
6.68
98.45
156.26±12.12
7.76
97.66
480
481.78±17.38
3.61
100.37
479.92±17.08
, 百拇医药
3.56
98.98
(-)-trans
T
40
41.90±3.58
8.54
104.75
21.56±2.82
13.08
107.80
160
155.88±2.82
, 百拇医药
2.45
97.42
147.68±20.14
13.64
92.30
480
477.62±21.84
4.57
99.50
492.08±41.96
8.53
102.52
, 百拇医药
(+)-M
1
20
19.64±1.52
7.74
98.20
19.04±2.76
14.50
95.20
80
84.68±3.28
3.87
105.85
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81.24±3.52
4.33
101.55
160
161.52±13.84
8.57
100.88
160.16±15.84
9.89
100.10
(-)-M1
20
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19.60±1.60
8.16
98.00
20.24±2.48
12.25
101.20
80
81.00±3.76
4.64
101.25
80.72±4.20
5.20
, 百拇医药
100.90
160
161.28±14.04
8.70
100.80
159.28±16.96
10.65
99.55
Table 2.The serum enantiomeric concentrations and ratios of (±)-trans tramadol((±)-trans T)and (±)-trans O-demethyltramadol((±)-M 1 )in postoperative patients after multiple intravenous doses of (±)-trans
, 百拇医药
tramadol hydrochloride Groups(mg.d-1)
Concentrations(mg.L-1)
(+)/(-)Ratios
(+)-transT
(-)-transT
(±)-transT
400
414.26±120.32
381.08±100.67
795.34±220.31
, 百拇医药 1.08±0.06
300
224.07±82.11*
197.77±76.71*
421.84±156.03*
1.17±0.21
(+)-M1
(-)-M1
(±)-M1
400
54.03±35.91
68.24±43.65
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122.27±79.43
0.77±0.09
300
48.20±23.05
54.91±24.72
103.11±46.00
0.89±0.24
*P<0.001, compared with that in 400 mg . d -1 group
讨 论
本文方法是通过考察不同浓度和pH 的Tris缓冲液、不同种类和浓度的环糊精、不同的分离电压等条件，从分离度、分离时间、峰型、运行电流等方面优化分析条件而得的。采用电压进样对样品进行柱上富集，使方法的灵敏度能够满足临床微量分析的需要；适当缩短高浓度样品的进样时间，可改善线性关系；每批样品随做标准曲线，能提高精密度。最终方法能够满足临床治疗药物监测的要求。
, 百拇医药
本文结果表明，(±)- trans -T的体内药代动力学具有立体选择性，在多数病人体内(-)- trans T清除较快，与前文结果一致[4]。400 mg.d-1组较300 mg.d-1组的剂量仅高25%，而400 mg.d-1组病人血清中(+)- trans T、(-)- trans T的浓度都接近增高1倍，说明(±)- trans T对映体的清除存在饱合现象。400 mg.d-1组与300 mg.d-1组病人血清中(±)-M1的浓度基本一致，(+)- M1的浓度十分接近，进一步说明由(±)- trans T生成(±)-M1，尤其是由(+)- trans T生成(+)- M1过程具有饱合现象。
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400 mg.d-1组与300 mg.d-1组的临床镇痛效果无明显区别，但不良反应明显不同。联系血药浓度监测结果，推测血清中(+)- M1 浓度与临床疗效密切相关，这一点与文献观点一致[5]；药物不良反应的发生率和严重程度有可能与血清中(+)- trans T和/或(-)- trans T较高有关，但不能排除未知代谢物的作用。
参考文献
1.Gibson TP. Pharmacokinetics, efficacy and safety of analgesic with a focus on tramadol HCl. Am J Med, 1996; 101(Suppl. 1A):47s～53s.
2.Raffa RB, Friderich E, ReimannW, et al. Complementary and synergistic antinocieptive interaction between the enantiomers of tramadol. J Pharmacol Exp Ther, 1993; 267:331～340.
, 百拇医药
3.刘会臣、刘铁军、冯超英，等. 高效毛细管电泳测定血清中反式曲马多对映体. 药物分析杂志, 2000；20:152～153.
4.刘会臣、侯艳宁、刘铁军，等. 反式曲马多对映体的药代动力学立体选择性. 药学学报, 2000；35:40～43.
5.Poulsen L, Arendt-Nielsen L, Brosen K, et al. The hypoanalgesic effect of tramadol in relation to CYP2D6. Clin Pharmacol Ther, 1996; 60: 636～644.
收稿：2000-06-17,修回：2000-09-07, http://www.100md.com
单位：白求恩国际和平医院，石家庄 050082
关键词：反式曲马朵；反式氧去甲基曲马朵；对映体
中国临床药理学杂志000516
摘 要 目的：建立人血清中反式曲马朵((±)-trans T)与氧去甲基曲马朵((±)-M1)对映体的测定方法，研究血清中 (±)-trans T和(±)-M1对映体浓度与临床效果的关系。方法：以磺丁基-β-环糊精为手性选择剂，高效毛细管电泳(HPCE)法测定人血清中(±)-trans T与(±)-M1对映体的浓度；监测20例术后病人静滴盐酸(±)-trans T 400 mg.d-1 或 300 mg.d-1后血清中 (±)-trans T与 (±)-M1对映体浓度，并观察临床镇痛效果及药物不良反应。结果：血清中 (±)-trans T与 (±)-M1对映体分离效果良好，(±)-trans T与 (±)-M1对映体的线性范围分别为20～640 mg.L-1 和10～160mg.L-1，相对回收率在92.30%～107.80%之间，日内RSD小于10%，日间RSD小于15%，最低检测浓度为1.10mg.L-1。400 mg.d-1 组病人血清中(±)-trans T对映体的浓度、药物不良反应的发生率和严重程度明显高于300 mg.d-1 组病人，而400 mg.d-1组和300 mg.d-1组病人血清中(±)-M1对映体浓度及镇痛效果无明显区别。结论：所建立的HPCE方法可用于临床治疗药物监测。血清中(+)-M1的浓度与镇痛效果密切相关，(±)-trans T对映体浓度过高可能是药物不良反应的发生率增高和程度增强的原因之一。
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Determination of the Enantiomers of (±) -Trans Tramadol and (±)-Trans O-demethyltramadol in Human Serum and Its Application in Therapeutic Drug Monitoring
LIU Hui-CHen,YANG Yan-Yan,WANG Ya-Li,HU Yu-Qin,HOU Yan-Ning
(Bethune International Peace Hospital, Shijiazhuang 050082)
Abstract OBJECTIVE: To establish a method for determining the enantiomers of (±)-trans tramadol ((±)-trans T) and (±)-trans O-demethyltramadol ((±)-M1) in human serum, and to study the relationship between the clinical actions and the serum concentrations of the enantiomers of (±)-trans T and (±)-M1. METHODS: By using sulfobutylether-b-cyclodextrin as a chiral selector, a high performance capillary electrophoresis (HPCE) method was developed to analyze the enantiomers of (±)-trans T and (±)-M1. Twenty postoperative patients were divided into two groups and given multiple intravenous doses of (±)-trans T hydrochloride, 400 mg.d-1 or 300 mg.d-1. The relationship between the clinical actions and the serum concentrations of the enantiomers of (±)-trans T and (±)-M1was studied. RESULTS: The enantiomers of (±)-trans T and (±)-M1 in human serum were separated well. The linear ranges were 20～640 mg.L-1 for the enantiomers of (±)-trans T, 10～160 mg.L-1 for the enantiomers of (±)- M1. For the enantiomers of (±)-trans T and (±)-M1, the within-day and day-to-day RSDs were less than 10% and 15% respectively; the relative recoveries were from 92.30% to107.80%; the limit of detection was 1.10mg.L-1. The concentrations of the enantiomers of (±)-trans T, the frequency and serious level of adverse reactions were higher in 400 mg.d-1 group than that in 300 mg.d-1 group. The concentrations of the enantiomers of (±)- M1, and the analgesic effect were similar between the two groups. Conclusion: The HPCE method could be used in clinical therapeutic drug monitoring. There was close relationship between the analgesic effect and the concentration of (+)-M1 in serum. The frequency and serious level of adverse reactions might be attributed to the higher concentrations of the enantiomers of (±)-trans T, which may be due to the saturated metabolism.
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Key words (±)-trans tramadol; (±)-trans O-demethyltramadal; enantiomer
反式曲马朵(trans tramadol,(±)-trans T)为新型中枢镇痛药，临床上用于中度、中重度疼痛的治疗，不易引起呼吸抑制、成瘾和滥用。T分子中含两个手性碳原子，有四个立体异构体，其中(+)-(1R，2R)-T((+)-trans T)和(-)-(1S，2S)-T ((-)-trans T)为药用品。(+)-trans T和(-)-trans T的作用机理是抑制单胺递质的再摄取和促进单胺递质的释放，(+)-trans T的代谢物(+)-(1R，2R)-氧去甲基曲马多((+)-trans O-demethyltramadol, (+)-M1)则是通过激动μ-阿片受体而发挥作用[1,2]。为了评价和优化临床盐酸(±)-trans T的给药方案，本文在前文[3]基础上建立了同时测定人血清中(±)- trans T和(±)-M1对映体浓度的高效毛细管电泳(high performance capillary electrophoresis, HPCE)法，并研究了术后病人血清中 (±)-trans T和(±)-M1对映体浓度与临床效果的关系。
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材 料 与 方 法
1.仪器与试剂
P/ACE 5000 HPCE, 配紫外检测器及Gold色谱软件; 未涂层石英毛细管(75mm，i.d.), 总长37 cm, 有效长度30 cm, 美国Beckman公司产品。盐酸(±)-trans T(批号5D7416)、 盐酸(+)-trans T(批号06)、 盐酸(-)-trans T(批号07)、(±)-M1(批号TK168)， 德国Grünenthal Gmbh公司惠赠；盐酸(±)-cis T，锦州医学院化学教研室合成。磺丁基-β-环糊精，中国科学院兰州化物所合成；Tris，H3PO4，NaOH，HCl 均为市售分析纯；超纯水。
2.病例与分组
20例接受心胸外科肿瘤切除术后入住ICU病房的病人，受试前需征得受试者知情同意，随机分为两组。400 mg .d-1组：10例，男6例， 女4例；年龄(59±7)岁，体重(60±10)kg；贲门癌7例，食管癌2例，肺癌1例。300 mg.d-1组：10例，男8例，女2例；年龄(64±12)岁，体重(64±8)kg；贲门癌7例，食管癌2例，肺癌1例。两组病人术前、术中、术后的其它用药尽可能保持一致。
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3.药品与给药方法
盐酸(±)-trans T注射液，每支100 mg，德国Grünenthal Gmbh公司生产，批号9706。病人术后到ICU病房完全清醒后即开始给予盐酸(±)-trans T注射液，加于50mL生理盐水中恒速静滴，日剂量平均分为3次，每次6 h，间隔2 h。连续给药5次后，即第1次给药后38h取血3 mL，离心分离血清，冻存备用。
4.样品处理与测定
1 ml血清中加 1mg.L-1 盐酸cis T溶液100μl，0.5 mol.L-1 NaOH 0.5 ml，乙酸乙酯5 ml，充分混匀2 min，离心(5000 r.min-1)15 min，取上清液4 ml以氮气流吹干，残渣用100μl水溶解，取30μl上机分析。分析条件：磺丁基-β-环糊精以40 mmol.L-1 Tris缓冲液(H3PO4 调pH至2.5)溶解配制分离介质，磺丁基-β-环糊精的浓度0.8 mmol.L-1；进样电压10 kV，20 s，入口为阳极；分离电压15 kV，柱温25 ℃，检测波长214 nm。
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5.临床效果评价
目测划线法(visual analgesic scale, VAS)记录用药后疼痛的程度，设0为无痛，10为重度疼痛。治疗开始后密切观察并记录出现的药物不良反应及其程度，并根据药物不良反应的判断标准判定不良反应与药物的关系。
6. 统计学处理
两组病人疼痛评分采用t-检验，药物不良反应发生率采用c2-检验。
结 果
1 血药浓度测定方法[3]
1.1 分离效果
T的四种立体异构体及(±)-M1对映体达到基线分离，且血清组分无干扰峰。(±)-cis T对映体的tR分别为8.16 min和8.73 mim ，(+)-trans T和(-)-trans T的tR分别为9.46 min和10.52 mim；(+)-M1和(-)-M1的tR分别为7.98 min和8.43 mim。典型电泳图谱见图1。
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1.2 标准曲线
以(±)-cis T后出峰的对映体为内标，血清中(+)-trans T，(-)-trans T浓度在20～640 mg·L-1范围内，(+)-M1和(-)-M1浓度在10～60 mg.L-1范围内，其峰面积和内标峰面积的比值(Y)与浓度(X)呈良好的线性关系,回归方程分别为
(+)-trans T：Y=-0.1587+0.01827X(n=6, r=0.9957)；(-)-trans T：Y=-0.5037+0.01865X(n=6, r=0.9924)；(+)-M1：Y=-0.3020+0.02000X(n=5, r=0.9949)；(-)-M1：Y=0.1073+0.01987X(n=5, r=0.9980)。
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Fig1. Electropherogram of a serum sample spicked with ( )-cis
tramadol. 1. an unknown metabolite; 2. (+)-trans O-demethyltramadol; 3.
one enantiomer of ( )-cis tramadol; 4. (-)-trans O-demethyltramadol;
5. another enantiomer of ( )-cis tramadol; 6. (+)-trans tramadol; 7. (-)-trans
tramadol
1.3 回收率、精密度和灵敏度
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取高、中、低3个已知浓度的样品进行日内、日间测定。 结果见表1，(+)-Trans-T，(-)-trans-T，(+)-M1，(-)-M1的相对回收率在92.30%～107.80%之间，日内RSDs小于10%，日间RSDs小于15%，最低检测浓度均为1.10ng.mL -1 (S/N>3)。
2. 血清中(±)-trans T及(±)-M1对映体浓度和比值
结果见表2。400 mg.d-1组病人血清中(+)- trans T，(-)- trans T以及(±)- trans T均明显高于300 mg.d-1组(P<0.001)；10例病人血清中，(±) - trans T对映体浓度基本一致(比值为0.97～1.03)的1例，(+)- trans T浓度低于(-)- trans T的2例，明显高的17例。表明大部分病人体内(±)- trans T自血中清除有立体选择性，且多数以(-)- trans T清除更快。
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400 mg.d-1组与300 mg.d-1组病人血清中(+)- M1，(-)- M1以及(±)-M1浓度无明显差异(P>0.05)；10例病人血清中，(±)- M1对映体浓度基本一致的3例，(+)- M1的浓度低于(-)- M1的16例，明显高的1例。表明大部分病人体内(±)-M1药代动力学过程(包括生成、分布和/或消除)具有立体选择性。
3. 临床效果
用药后12 h，24 h，36 h 评定镇痛效果。400 mg.d-1组和300 mg.d-1组病人疼痛评分分别为4.0±1.0和4.2±1.0, 两组病人间无明显差别(P>0.05)。
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因为是术后病人，重点观察呕吐、恶心、出汗等明显的不良反应。400 mg.d-1组和300 mg.d-1组病人中出现恶心的分别为10例(100%)和5例(50%)(P<0.05)，出现呕吐的分别为6例(60%)和2例(20%)(P>0.05)，有出汗现象的分别为10例(100%)和8例(80%)(P>0.05)；此外，400 mg.d-1组病人中有3例(30%)出现严重呕吐，5例(50%)出现大汗淋漓(P<0.05)。这表明400 mg.d-1组病人的药物不良反应发生率和严重程度明显高于300 mg.d-1组病人。
Table 1.The precision and recovery of the assay of the enantiomers of (±)-trans tramadol
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((±)-trans T)and (±)-trans O-demethyltramadol((±)-M 1 )in serum(n=5) Added
Within-day
Day-to-Day
Found
RSD
Recovery
Found
RSD
Recovery
(μg.L-1)
(μg.L-1)
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(%)
(%)
(mg.L-1)
(%)
(%)
(+)-trans T
40
42.40±2.56
6.04
106.00
41.20±3.62
8.79
103.00
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160
157.52±10.52
6.68
98.45
156.26±12.12
7.76
97.66
480
481.78±17.38
3.61
100.37
479.92±17.08
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3.56
98.98
(-)-trans
T
40
41.90±3.58
8.54
104.75
21.56±2.82
13.08
107.80
160
155.88±2.82
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2.45
97.42
147.68±20.14
13.64
92.30
480
477.62±21.84
4.57
99.50
492.08±41.96
8.53
102.52
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(+)-M
1
20
19.64±1.52
7.74
98.20
19.04±2.76
14.50
95.20
80
84.68±3.28
3.87
105.85
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81.24±3.52
4.33
101.55
160
161.52±13.84
8.57
100.88
160.16±15.84
9.89
100.10
(-)-M1
20
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19.60±1.60
8.16
98.00
20.24±2.48
12.25
101.20
80
81.00±3.76
4.64
101.25
80.72±4.20
5.20
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100.90
160
161.28±14.04
8.70
100.80
159.28±16.96
10.65
99.55
Table 2.The serum enantiomeric concentrations and ratios of (±)-trans tramadol((±)-trans T)and (±)-trans O-demethyltramadol((±)-M 1 )in postoperative patients after multiple intravenous doses of (±)-trans
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tramadol hydrochloride Groups(mg.d-1)
Concentrations(mg.L-1)
(+)/(-)Ratios
(+)-transT
(-)-transT
(±)-transT
400
414.26±120.32
381.08±100.67
795.34±220.31
, 百拇医药 1.08±0.06
300
224.07±82.11*
197.77±76.71*
421.84±156.03*
1.17±0.21
(+)-M1
(-)-M1
(±)-M1
400
54.03±35.91
68.24±43.65
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122.27±79.43
0.77±0.09
300
48.20±23.05
54.91±24.72
103.11±46.00
0.89±0.24
*P<0.001, compared with that in 400 mg . d -1 group
讨 论
本文方法是通过考察不同浓度和pH 的Tris缓冲液、不同种类和浓度的环糊精、不同的分离电压等条件，从分离度、分离时间、峰型、运行电流等方面优化分析条件而得的。采用电压进样对样品进行柱上富集，使方法的灵敏度能够满足临床微量分析的需要；适当缩短高浓度样品的进样时间，可改善线性关系；每批样品随做标准曲线，能提高精密度。最终方法能够满足临床治疗药物监测的要求。
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本文结果表明，(±)- trans -T的体内药代动力学具有立体选择性，在多数病人体内(-)- trans T清除较快，与前文结果一致[4]。400 mg.d-1组较300 mg.d-1组的剂量仅高25%，而400 mg.d-1组病人血清中(+)- trans T、(-)- trans T的浓度都接近增高1倍，说明(±)- trans T对映体的清除存在饱合现象。400 mg.d-1组与300 mg.d-1组病人血清中(±)-M1的浓度基本一致，(+)- M1的浓度十分接近，进一步说明由(±)- trans T生成(±)-M1，尤其是由(+)- trans T生成(+)- M1过程具有饱合现象。
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400 mg.d-1组与300 mg.d-1组的临床镇痛效果无明显区别，但不良反应明显不同。联系血药浓度监测结果，推测血清中(+)- M1 浓度与临床疗效密切相关，这一点与文献观点一致[5]；药物不良反应的发生率和严重程度有可能与血清中(+)- trans T和/或(-)- trans T较高有关，但不能排除未知代谢物的作用。
参考文献
1.Gibson TP. Pharmacokinetics, efficacy and safety of analgesic with a focus on tramadol HCl. Am J Med, 1996; 101(Suppl. 1A):47s～53s.
2.Raffa RB, Friderich E, ReimannW, et al. Complementary and synergistic antinocieptive interaction between the enantiomers of tramadol. J Pharmacol Exp Ther, 1993; 267:331～340.
, 百拇医药
3.刘会臣、刘铁军、冯超英，等. 高效毛细管电泳测定血清中反式曲马多对映体. 药物分析杂志, 2000；20:152～153.
4.刘会臣、侯艳宁、刘铁军，等. 反式曲马多对映体的药代动力学立体选择性. 药学学报, 2000；35:40～43.
5.Poulsen L, Arendt-Nielsen L, Brosen K, et al. The hypoanalgesic effect of tramadol in relation to CYP2D6. Clin Pharmacol Ther, 1996; 60: 636～644.
收稿：2000-06-17,修回：2000-09-07, http://www.100md.com