JH与Tβ基因重排检测在白血病分型中的应用
作者：朱元晓 白炎 申明燕 赖春宁 陈勇 王建安
单位：(军事医学科学院基础医学研究所，北京，100850)
关键词：
中华医学杂志910620
免疫球蛋白(Ig)和T细胞抗原受体(TCR)是B、T细胞识别抗原的特异分子及区分B、T细胞的重要标志。本实验以编码Ig重链J区基因(JH)与编码TCR分子β链基因(Tβ)为探针，检测一组白血病细胞株和34例白血病病人白细胞的JH与Tβ基因重排，以探讨基因重排检测在白血病分型诊断中的意义。
一、材料和方法
1、细胞制备和免疫表型分析：实验标本选用临床确诊的白血病病人的骨髓或外周血。分离出单个核细胞，取部分细胞作免疫表型分析[1]，其余细胞用于提取DNA。8株T、B白血病细胞株由英国ICR实验室惠赠。
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2、探针制备：含Ig重链基因J区的重组质粒与含Tβ基因恒区的重组质粒均由国外实验室惠赠。经酶切、电泳回收插入片段后，再用α-32P d CTP标记片段作为探针[2]，其比活大于108cpm/μg DNA。
3、细胞DNA提取及Southern杂交：按常规方法提取细胞DNA，经电泳检测其分子量在50kb以上。用限制性核酸内切酶消化DNA，按文献[3]方法进行电泳、转移、杂交和洗膜。在-70℃放射自显影3～7天。
二、结果
1、8株T、B白血病细胞株的Tβ与JH基因重排：用Bam H1消化细胞DNA， 与32P标记的Tβ探 针杂交显示：3株B细胞株出现一条与文献[4]报道相似的约22kb的胚系基因条带，而5株T细胞株则出现分子量小于22kb的重排条带。相反，当用EcorI消化，与JH探针杂交时，T细胞株出现一条16kb的胚系基因条带[5]，而B细胞株则出现小于16kb的重排条带或条带缺失，基因缺失是基因重排的一种类型。
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2、34例白血病病的白细胞的Tβ与JH基因重排：根据免疫表型检测结果，34例中18例的细胞具有T细胞相关标志(CD7，CD5，CD3，CD4，CD8)，其中3例同时表达DR抗原，1例表达CD10抗原。Tβ基因检测发现，除2例细胞表型为单独CD7阳性或DR、CD7阳性的病例无Tβ基因重排外，其余均有Tβ基因重排，Tβ基因重排大约出现于CD5抗原表达前后。检测8例JH基因发现，所有病人的JH基因均为胚系基因。对13例具有非T细胞相关标志病人肿瘤细胞的Tβ与JH基因检测发现，6例Null-ALL中，5例具有JH基因重排，其中3例细胞的表型标志为DR阳性、CD19阴性或弱阳性。检测这13例中9例的Tβ基因，除1例C-ALL病人有重排外，其余均为胚系基因，本组还有3例混合性标志的白血病病人，其中2例具有B细胞标志(CD19，CD10)及粒细胞标志(CD33)共表达，其Tβ与JH基因均为胚系构型。1例T(CD2)、B(CD19，CD10)双重标志的病人，其Tβ与JH基因，均出现重排。
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三、讨论
白血病分型对病人的预后和治疗方案的选择，具有重要的临床意义。从基因水平检测有可能成为解决这一分型难题的途径[6]。本组结果显示，Tβ基因和JH基因重排分别是T和B细胞源性白血病较为特异的标志。由于基因重排出现于细胞分化的早期，检测基因重排可进一步提高分型的准确性。本组3例CD19弱阳性和CD19阴性的Null-ALL，其JH基因发生重排，表明属前B细胞白血病。本组2例B粒混合标志白血病的Tβ和JH基因均为胚系基因，提示本质上属粒细胞白血病，临床按粒细胞性白血病治疗而缓解。具有T、B双重标志的肿瘤细胞同时出现JH与Tβ基因重排，表明其肿瘤细胞起源于T、B细胞前体、临床使用各种治疗方案均未能缓解。显然进一步进行这方面的研究，有可能为临床混合性白血病的治疗和预测预后提供依据。
参考文献
1 Greaves MF, Target' cells cellular phenotypes and lineage fidelity in human leukemia. J Cell 1982;1[Suppl]:113.
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2 Feinberg AP, Vogelstein B. A technique for radiolabeling DNA restric tion endonuclease fragments to high specific activity. Anal Biochem 1983;132:6.
3 Boulnois GJ(ed). Gene clongng and analysis. Oxford: 1987:47-60.
4 Furley AJ, et al. Developmentally regulated rearrangement and expression of genes encoding the T cell receptor-T3 complex. Cell 1986;46:75.
5 Korsmeyer SJ, et al. Immunoglobulin gene rearrangement and cell surface antigen expression in acute lymphocytic leukemias of T cell and B cell Precursor origins. J Clin Invest 1983;71:301.
6 Sanford AS(ed). Acute leukemia New York:1987;299-320., 百拇医药
单位：(军事医学科学院基础医学研究所，北京，100850)
关键词：
中华医学杂志910620
免疫球蛋白(Ig)和T细胞抗原受体(TCR)是B、T细胞识别抗原的特异分子及区分B、T细胞的重要标志。本实验以编码Ig重链J区基因(JH)与编码TCR分子β链基因(Tβ)为探针，检测一组白血病细胞株和34例白血病病人白细胞的JH与Tβ基因重排，以探讨基因重排检测在白血病分型诊断中的意义。
一、材料和方法
1、细胞制备和免疫表型分析：实验标本选用临床确诊的白血病病人的骨髓或外周血。分离出单个核细胞，取部分细胞作免疫表型分析[1]，其余细胞用于提取DNA。8株T、B白血病细胞株由英国ICR实验室惠赠。
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2、探针制备：含Ig重链基因J区的重组质粒与含Tβ基因恒区的重组质粒均由国外实验室惠赠。经酶切、电泳回收插入片段后，再用α-32P d CTP标记片段作为探针[2]，其比活大于108cpm/μg DNA。
3、细胞DNA提取及Southern杂交：按常规方法提取细胞DNA，经电泳检测其分子量在50kb以上。用限制性核酸内切酶消化DNA，按文献[3]方法进行电泳、转移、杂交和洗膜。在-70℃放射自显影3～7天。
二、结果
1、8株T、B白血病细胞株的Tβ与JH基因重排：用Bam H1消化细胞DNA， 与32P标记的Tβ探 针杂交显示：3株B细胞株出现一条与文献[4]报道相似的约22kb的胚系基因条带，而5株T细胞株则出现分子量小于22kb的重排条带。相反，当用EcorI消化，与JH探针杂交时，T细胞株出现一条16kb的胚系基因条带[5]，而B细胞株则出现小于16kb的重排条带或条带缺失，基因缺失是基因重排的一种类型。
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三、讨论
白血病分型对病人的预后和治疗方案的选择，具有重要的临床意义。从基因水平检测有可能成为解决这一分型难题的途径[6]。本组结果显示，Tβ基因和JH基因重排分别是T和B细胞源性白血病较为特异的标志。由于基因重排出现于细胞分化的早期，检测基因重排可进一步提高分型的准确性。本组3例CD19弱阳性和CD19阴性的Null-ALL，其JH基因发生重排，表明属前B细胞白血病。本组2例B粒混合标志白血病的Tβ和JH基因均为胚系基因，提示本质上属粒细胞白血病，临床按粒细胞性白血病治疗而缓解。具有T、B双重标志的肿瘤细胞同时出现JH与Tβ基因重排，表明其肿瘤细胞起源于T、B细胞前体、临床使用各种治疗方案均未能缓解。显然进一步进行这方面的研究，有可能为临床混合性白血病的治疗和预测预后提供依据。
参考文献
1 Greaves MF, Target' cells cellular phenotypes and lineage fidelity in human leukemia. J Cell 1982;1[Suppl]:113.
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2 Feinberg AP, Vogelstein B. A technique for radiolabeling DNA restric tion endonuclease fragments to high specific activity. Anal Biochem 1983;132:6.
3 Boulnois GJ(ed). Gene clongng and analysis. Oxford: 1987:47-60.
4 Furley AJ, et al. Developmentally regulated rearrangement and expression of genes encoding the T cell receptor-T3 complex. Cell 1986;46:75.
5 Korsmeyer SJ, et al. Immunoglobulin gene rearrangement and cell surface antigen expression in acute lymphocytic leukemias of T cell and B cell Precursor origins. J Clin Invest 1983;71:301.
6 Sanford AS(ed). Acute leukemia New York:1987;299-320., 百拇医药