薄层扫描法测定真心平胶囊中延胡索乙素含量
作者：王 杰* 李 建 吕归宝
单位：天津市药品检验所 300070
关键词：真心平胶囊；延胡索乙素；薄层色谱法
中草药990714 摘 要 采用硅胶G薄层层析对含有延胡索、丹参等7味药材的制剂中延胡索乙素进行分离分析，得到分离度高、背景干扰小的薄层层析图谱。建立了含量测定的方法，平均回收率为100.58%，RSD为2.3%(n=5)。
真心平胶囊由延胡索、丹参、栝楼等中药组成。延胡索为主药，其主要成分为延胡索乙素，该制剂质量标准研究中选择了延胡索乙素为含量测定成分。本方法采用氨水碱化后直接乙醚提取，利用硅胶G薄层层析对样品进行分离分析，建立了真心平胶囊中延胡索乙素含量测定方法
1 实验部分
, http://www.100md.com
1.1 仪器与试剂：岛津CS-9000 型薄层扫描仪，定量毛细管(CAMAG公司)；延胡索乙素对照品(中国药品生物制品检定所)；真心平胶囊由天津万通药业有限公司提供；试剂均为分析纯。
1.2 供试液的制备：取真心平胶囊内容物10 g精密称定，置250 mL棕色锥形瓶中，加入浓氨水40 mL，摇匀，超声提取20 min，精密加入乙醚100 mL，精密称定重量，超声提取2 h，放至室温，精密称定重量，用乙醚补足重量。摇匀，倾出上清液，精密吸取50 mL，减压浓缩至干。用氯仿转入5 mL容量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
1.3 对照品溶液的制备：精密称取延胡索乙素对照品，用氯仿溶液使成1 mg/mL溶液，作为对照品溶液。
1.4 薄层层析及扫描：分别定量吸取供试品溶液10 μL，对照品溶液2、4 μL，分别点于同一含羧甲基纤维素钠的硅胶G薄层板上，以苯-丙酮(8∶2)为展开剂上行展开，展距10 cm，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，用冷风吹干，双波长锯齿扫描，测定波长500 nm，参比波长 570 nm，狭缝1.0 mm×1.0 mm, Sx=3，灵敏度×1，按外标两点法计算得供试品液中延胡索乙素含量。
, 百拇医药
2 结果
2.1 提取方法的选择：据文献报道延胡索乙素溶于乙醚和氯仿，提取前先用浓氨水进行碱化，使延胡索乙素游离，然后用乙醚提取。
2.2 提取时间的考察：选用同一批号样品，分别进行1.5、2、2.5、3 h超声处理，点在同一板上，测定延胡索乙素的含量，结果见表1。
表1 提取时间的考察 时间(h)
1.5
2
2.5
3
含量(mg/g)
0.17
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0.22
0.22
0.18
测定数据表明，选定提取时间为2h。
2.3 碱化方法的选择：开始选用浓氨水20 mL碱化，但在实验中发现，加浓氨水后样品很快成膏状，加入乙醚提取时，膏体不能充分分散，膏体内的成分不能提取完全，而加入40 mL浓氨水后，样品成流体，经充分振摇后能充分将样品分散，乙醚能充分提取。因此选定加浓氨水40 mL。
2.4 扫描波长：经过对延胡索乙素进行全波长扫描，在500 nm处有最大吸收，参比波长选在570 nm最为合适。
2.5 标准曲线的绘制：本品1 mg/mL的延胡索乙素氯仿液作为对照品溶液，定量吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 μL分别点于同一硅胶G薄层板上，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，扫描测定，以浓度为横坐标，斑点面积积分值为纵坐标绘制曲线。延胡索乙素在1.0～5.0 μg之间呈良好线性关系，回归方程为：Y=84 566.46X+72 613.11,r=0.9975。
, 百拇医药
2.6 空白实验：取延胡索阴性样品，提取方法同供试品溶液处理、提取、扫描，空白样品在与对照品Rf值相应位置上没有斑点，不影响含量测定，所以此方法对延胡索乙素专属性强。
2.7 稳定性实验：将显色后的薄层板进行扫描，然后在1、2 h后进行测定，结果积分面积值在2 h内基本稳定。扫描时间可在2 h内进行。
2.8 精密度实验
2.8.1 仪器精密度：对同一斑点连续测定5次，RSD=1.3%，表明仪器精密度较高。
2.8.2 同板精密度：将样品分别点于同一薄层板上进行扫描测定，RSD=2.2%，表明同板精密度符合规定。
2.8.3 异板精密度实验：对同一样品用不同的板进行测定，计算含量，结果RSD=4.5%。表明异板精密度结果符合规定。
, 百拇医药
2.9 重现性实验：对同一批号样品分别测定5次，结果RSD=3.9%。表明该方法重现性较好。
2.10 回收率实验：取样品10 g，精密称定，精密加入2 mL对照品溶液(1.05 mg/mL)，按供试品溶液的制备方法操作，制成供试品溶液，进行测定。同时对样品进行含量测定，计算回收率，平均为100.6%，RSD=2.3%(n=5)。
2.11 样品分析：按照制定的方法对10批样品进行测定，结果见表2。
表2 样品测定结果 批号
9509004
9507004
9507003
9507002
, 百拇医药
9507001
9505001
9503001
9509001
9509002
9509003
含量(mg/g)
0.223
0.072
0.045
0.148
0.133
, 百拇医药
0.117
0.166
0.333
0.365
0.376
3 讨论
3.1 10批样品测定结果有高有低，这可能与选用的不同药材有关。因此，必须制定延胡索药材中延胡索乙素的含量测定方法及限度，在药品生产投产前，应对药材进行含量测定，严格控制药材的质量。
3.2 加氨水碱化时应充分振摇，混匀，充分碱化后，再进行提取。
*Address WAng Jie,Tianjin Municipal Insitue for Drug Control,Tianjing
作者简介：王杰 1984年毕业于沈阳药科大学药学系，理学学士，主管药师，主要从事新药审批、药品检验，心脏各级标准的起草，主要论文《厚朴中季胺碱的研究》[日本Natural Medicines，1996，50(6)：413]，《气相色谱测定开元活血贴中樟脑、冰片的含量》[中药新药与临床药理1998，9(2)]等.
收稿日期：1998-12-30, 百拇医药(王 杰* 李 建 吕归宝)
单位：天津市药品检验所 300070
关键词：真心平胶囊；延胡索乙素；薄层色谱法
中草药990714 摘 要 采用硅胶G薄层层析对含有延胡索、丹参等7味药材的制剂中延胡索乙素进行分离分析，得到分离度高、背景干扰小的薄层层析图谱。建立了含量测定的方法，平均回收率为100.58%，RSD为2.3%(n=5)。
真心平胶囊由延胡索、丹参、栝楼等中药组成。延胡索为主药，其主要成分为延胡索乙素，该制剂质量标准研究中选择了延胡索乙素为含量测定成分。本方法采用氨水碱化后直接乙醚提取，利用硅胶G薄层层析对样品进行分离分析，建立了真心平胶囊中延胡索乙素含量测定方法
1 实验部分
, http://www.100md.com
1.1 仪器与试剂：岛津CS-9000 型薄层扫描仪，定量毛细管(CAMAG公司)；延胡索乙素对照品(中国药品生物制品检定所)；真心平胶囊由天津万通药业有限公司提供；试剂均为分析纯。
1.2 供试液的制备：取真心平胶囊内容物10 g精密称定，置250 mL棕色锥形瓶中，加入浓氨水40 mL，摇匀，超声提取20 min，精密加入乙醚100 mL，精密称定重量，超声提取2 h，放至室温，精密称定重量，用乙醚补足重量。摇匀，倾出上清液，精密吸取50 mL，减压浓缩至干。用氯仿转入5 mL容量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
1.3 对照品溶液的制备：精密称取延胡索乙素对照品，用氯仿溶液使成1 mg/mL溶液，作为对照品溶液。
1.4 薄层层析及扫描：分别定量吸取供试品溶液10 μL，对照品溶液2、4 μL，分别点于同一含羧甲基纤维素钠的硅胶G薄层板上，以苯-丙酮(8∶2)为展开剂上行展开，展距10 cm，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，用冷风吹干，双波长锯齿扫描，测定波长500 nm，参比波长 570 nm，狭缝1.0 mm×1.0 mm, Sx=3，灵敏度×1，按外标两点法计算得供试品液中延胡索乙素含量。
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2 结果
2.1 提取方法的选择：据文献报道延胡索乙素溶于乙醚和氯仿，提取前先用浓氨水进行碱化，使延胡索乙素游离，然后用乙醚提取。
2.2 提取时间的考察：选用同一批号样品，分别进行1.5、2、2.5、3 h超声处理，点在同一板上，测定延胡索乙素的含量，结果见表1。
表1 提取时间的考察 时间(h)
1.5
2
2.5
3
含量(mg/g)
0.17
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0.22
0.22
0.18
测定数据表明，选定提取时间为2h。
2.3 碱化方法的选择：开始选用浓氨水20 mL碱化，但在实验中发现，加浓氨水后样品很快成膏状，加入乙醚提取时，膏体不能充分分散，膏体内的成分不能提取完全，而加入40 mL浓氨水后，样品成流体，经充分振摇后能充分将样品分散，乙醚能充分提取。因此选定加浓氨水40 mL。
2.4 扫描波长：经过对延胡索乙素进行全波长扫描，在500 nm处有最大吸收，参比波长选在570 nm最为合适。
2.5 标准曲线的绘制：本品1 mg/mL的延胡索乙素氯仿液作为对照品溶液，定量吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 μL分别点于同一硅胶G薄层板上，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，扫描测定，以浓度为横坐标，斑点面积积分值为纵坐标绘制曲线。延胡索乙素在1.0～5.0 μg之间呈良好线性关系，回归方程为：Y=84 566.46X+72 613.11,r=0.9975。
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2.6 空白实验：取延胡索阴性样品，提取方法同供试品溶液处理、提取、扫描，空白样品在与对照品Rf值相应位置上没有斑点，不影响含量测定，所以此方法对延胡索乙素专属性强。
2.7 稳定性实验：将显色后的薄层板进行扫描，然后在1、2 h后进行测定，结果积分面积值在2 h内基本稳定。扫描时间可在2 h内进行。
2.8 精密度实验
2.8.1 仪器精密度：对同一斑点连续测定5次，RSD=1.3%，表明仪器精密度较高。
2.8.2 同板精密度：将样品分别点于同一薄层板上进行扫描测定，RSD=2.2%，表明同板精密度符合规定。
2.8.3 异板精密度实验：对同一样品用不同的板进行测定，计算含量，结果RSD=4.5%。表明异板精密度结果符合规定。
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2.9 重现性实验：对同一批号样品分别测定5次，结果RSD=3.9%。表明该方法重现性较好。
2.10 回收率实验：取样品10 g，精密称定，精密加入2 mL对照品溶液(1.05 mg/mL)，按供试品溶液的制备方法操作，制成供试品溶液，进行测定。同时对样品进行含量测定，计算回收率，平均为100.6%，RSD=2.3%(n=5)。
2.11 样品分析：按照制定的方法对10批样品进行测定，结果见表2。
表2 样品测定结果 批号
9509004
9507004
9507003
9507002
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9507001
9505001
9503001
9509001
9509002
9509003
含量(mg/g)
0.223
0.072
0.045
0.148
0.133
, 百拇医药
0.117
0.166
0.333
0.365
0.376
3 讨论
3.1 10批样品测定结果有高有低，这可能与选用的不同药材有关。因此，必须制定延胡索药材中延胡索乙素的含量测定方法及限度，在药品生产投产前，应对药材进行含量测定，严格控制药材的质量。
3.2 加氨水碱化时应充分振摇，混匀，充分碱化后，再进行提取。
*Address WAng Jie,Tianjin Municipal Insitue for Drug Control,Tianjing
作者简介：王杰 1984年毕业于沈阳药科大学药学系，理学学士，主管药师，主要从事新药审批、药品检验，心脏各级标准的起草，主要论文《厚朴中季胺碱的研究》[日本Natural Medicines，1996，50(6)：413]，《气相色谱测定开元活血贴中樟脑、冰片的含量》[中药新药与临床药理1998，9(2)]等.
收稿日期：1998-12-30, 百拇医药(王 杰* 李 建 吕归宝)