HLA-B27抗原与前葡萄膜炎的相关性及其临床意义
作者：周红颜 杨培增 黄祥坤 陈玲 钟晖 金浩丽 籍莉 陆惠玲 陈盛强
单位：周红颜 杨培增 黄祥坤 陈玲 钟晖 金浩丽(510060广州，中山医科大学中山眼科中心)；籍莉(广州白云区人民医院)；陆惠玲(中山医科大学法医物证教研室)；陈盛强(广州医学院)
关键词：前葡萄膜炎；免疫遗传；HLA-B27抗原
眼科研究000302 摘要 目的探讨HLA-B27抗原与前葡萄膜炎的相关性及可能的意义。方法用多聚酶链反应(PCR)和微量淋巴细胞毒试验对20例伴有关节强直性脊椎炎(AS)的急性前葡萄膜炎(AAU)、67例AAU、70例慢性前葡萄膜炎和708个健康人进行HLA-B27分型。结果AS伴有AAU和单纯的AAU患者中HLA-B27阳性率分别为70%和49.25%，显著高于对照组(2.97%，P<0.001)，慢性前葡萄膜炎患者中HLA-B27的阳性率(4.28%)与对照组无显著差别。结论AAU与HLA-B27有密切的相关性，在这些患者中进行HLA-B27分型对评价葡萄膜炎的病因和预后有一定的价值。
, 百拇医药
分类号 R773
The association of various forms of anterior uveitis with HLA-B27 antigen and its clinical implication
Zhou Hongyan，Yang Peizeng，Huang Xiangkun
(Zhongshan Ophthalmic Center，Sun Yat-sen University
of Medical Sciences，Guangzhou 510060)
Abstract Objective：To investigate the association of various forms of anterior uveitis with HLA-B27 antigen and its possible clinical implication.Methods：Polymerase chain reaction (PCR) or microcytotoxity assay was used for determinating HLA-B27 on 20 patients with ankylosing spondylitis(AS) and acute anterior uveitis(AAU)，67 patients with AAU，70 patients with chronic anterior uveits including idiopathic anterior uveitis and Fuchs syndrome，and 708 healthy individuals.Results：Determination of HLA-B27 in 51 samples with both PCR and microcytotoxity assay revealed the same result，indicating that data from each method may be compared.A strong association between HLA-B27 and AS and AAU (70%)，and with AAU (49.25%) was noted compared with the controls (2.97%， P<0.001).No positive association was found between HLA-B27 and chronic anterior uveitis.Conclusion：AAU，especially in company with AS，is strongly associated with HLA-B27 antigen.Determinating HLA-B27 is helpful in the investigation of the etiology，and evaluation of prognosis of AAU.
, 百拇医药
Key words anterior uveitis immunogenetics HLA-B27antigen
葡萄膜炎是一类常见的致盲眼病。近年来，免疫遗传方面的研究已揭示出多种类型葡萄膜炎与特定的人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)相关[1]，如HLA-B27与急性前葡萄膜炎(acute anterior uveitis，AAU)有密切的相关性[2-6]，但有关HLA-B27与其它类型的前葡萄膜炎以及与关节强直性脊椎炎(ankylosing spondylysis，AS)相伴的葡萄膜炎之间的相关性国内尚无大宗病例的研究报道，我们用多聚酶链反应(Polymerase chain reaction，PCR)方法和传统的微量淋巴细胞毒试验探讨了157例前葡萄膜炎与HLA-B27的相关性。
1 材料和方法
, http://www.100md.com 检测对象为中山眼科中心葡萄膜炎专科门诊的前葡萄膜炎患者，共157例，均为汉族，其中AAU67例，AS伴发的AAU20例，其它类型前葡萄膜炎70例，对照为广东地区708个汉族健康人。
取受检者血，加入抗凝剂，用酚抽提法提取DNA。所用HLA-B27序列特异引物为：(1)5′-CAGTCTGTGCCTTGGCGTTGC，(2)5′-GGCTACGTGGACGACACGCT，扩增产物为144bp；我们选择人类生长激素基因特异性引物为内对照，序列为：(1)5′-GCCTTCCCAACCCCCTTA，(2)5′-TCACGGATTTCTGTTGTGTTT，扩增产物为429bp。以上引物均由加拿大真达科技贸易有限公司提供。PCR反应体系包括50～100ng基因DNA，多聚酶1U、B27特异性引物(0.5μmol)、200mdNTP和PCR缓冲液。实验过程为：95℃预先变性5min，在基因扩增仪上进行30个周期的热循环，3个温度条件分别是94℃30s、58℃40s、79℃60s。于2%琼脂糖凝胶上进行电泳20min，电压5V/cm，紫外灯下观察结果。
, http://www.100md.com
2 结果
为了比较PCR和微量淋巴细胞毒试验的一致性，我们对51例受检者同时进行两种试验，发现二者检查结果相同，所以我们将早期的微量淋巴细胞毒试验结果和后期的PCR所测结果一并计算。
在不同类型的前葡萄膜炎中，HLA-B27阳性率有显著差别，AS伴发的AAU患者阳性率最高，为70%，AAU患者的阳性率为49.25%，二者均显著高于正常人群中此抗原的阳性率(2.97%，P<0.001)，慢性前葡萄膜炎患者的阳性率(4.28%)与正常人群则无显著性差别(表1)。
表1 不同类型前葡萄膜炎和正常人群的HLA-B27阳性率比较
Tab.1 The prevalence of HLA-B27 antigen in patients
with anterior uveitis and healthy individuals
, http://www.100md.com
n
Positive rate(%)
χ2
Relative risk
AS+AAU
20
70.0
190.98
71.33
AAU
67
49.25
, 百拇医药
202.47
31.05
Chronic anterior uveitis
70
4.28
0.46
1.66
Controls
708
2.97
3 讨论
微量淋巴细胞毒性试验是进行HLA-B27分型的传统方法，此方法需要高质量的抗血清，所用费用高，在一般医院难于推广，但以PCR方法检测HLA-B27全部等位基因，方法较为简便，所需样品量少[7]，且我们同时扩增人类生长激素基因作为内对照，避免假阳性和假阴性结果。经过对比两种方法检测的结果，我们发现二者相同，表明PCR方法可以取代传统的血清学方法，两种方法所测的结果具有可比性。
, 百拇医药
前葡萄膜炎是葡萄膜炎中最常见的类型，血清阴性的椎关节病变如AS、炎症性肠道疾病是其常见的伴随疾病，此类疾病与HLA-B27有明显的相关性。我们的结果也证实了这一观点，患者阳性率高于单纯AAU患者阳性率，更高于人群中的阳性率。Linsen等[5]发现在AAU患者中约50%为HLA-B27阳性，在AS伴发的AAU患者中阳性率近100%。
HLA-B27与AAU和AS的密切相关性为我们确定AAU的病因和类型提供了帮助。在我们诊治的20例AS患者中仅有2例在眼科就诊时知道患有AS，根据HLA-B27阳性的结果，我们建议这些患者进行骶髂关节及腰椎X线检查，最后明确了诊断。我们还对30例HLA-B27阴性的慢性前葡萄膜炎患者的骶髂关节拍片进行了分析，未发现AS存在。可见，对HLA-B27阴性的慢性前葡萄膜炎患者没有必要进行骶髂关节X线检查。
根据与HLA-B27的相关性把前葡萄膜炎分为两大类，一类是HLA-B27阳性，另一类为HLA-B27阴性，我们发现，前者主要表现为急性非肉芽肿性虹膜睫状体炎，多为双眼发病，但多先后发病，易于复发，如在急性期处理得当则预后较好。后一类则多为慢性前葡萄膜炎，多为肉芽肿性炎症，易发生虹膜后粘连、青光眼等并发症，预后较差。因此对患者进行HLA-B27分型不但有助于临床诊断、确定病因和伴随的全身疾病，而且对指导治疗和了解患者的预后也有一定的价值。
, http://www.100md.com
本文受国家杰出青年基金基金编号：39925034、教育部跨世纪人才培养计划基金1999-2、广东省自然科学基金980114和广东省重点科技攻关项目基金资助。
参考文献
1，杨培增，李绍珍.葡萄膜炎.北京：人民卫生出版社，1998.245-280
2，Pavesio CG.Clinical features of uveitis.In：Easty DL，Sparrow JM，eds.Oxford：Oxford Textbook of Ophthalmology，1999.518-520
3，张晓艳，胡天圣，汪秀明.急性前色素膜炎与HLA抗原相关的临床研究.中华眼科杂志，1990，26∶2
4，高永庆，雷红，王津津，等.HLA与急性前葡萄膜炎相关的研究.实用眼科杂志，1991，9∶461
, 百拇医药
5，Linssen A，Dekker-Saeys AJ，Dijkstra PF，et al.The use of HLA-B27 as a diagnostic and prognostic aid in acute anterior uveitis(AAU) in the Netherlands.Docum Ophthalmol，1986，64∶217
6，孙世珉，薛南平，刘焕业，等.前色素膜炎患者HLA-B27及T-细胞亚群的检测.中华眼科杂志，1990，26∶258
7，陈盛强，胡朝辉，燕启江，等.用PCR方法检测HLA-B27基因.上海医学检验杂志，1998，13∶131
(收稿：2000-02-12 修回：2000-03-08), 百拇医药
单位：周红颜 杨培增 黄祥坤 陈玲 钟晖 金浩丽(510060广州，中山医科大学中山眼科中心)；籍莉(广州白云区人民医院)；陆惠玲(中山医科大学法医物证教研室)；陈盛强(广州医学院)
关键词：前葡萄膜炎；免疫遗传；HLA-B27抗原
眼科研究000302 摘要 目的探讨HLA-B27抗原与前葡萄膜炎的相关性及可能的意义。方法用多聚酶链反应(PCR)和微量淋巴细胞毒试验对20例伴有关节强直性脊椎炎(AS)的急性前葡萄膜炎(AAU)、67例AAU、70例慢性前葡萄膜炎和708个健康人进行HLA-B27分型。结果AS伴有AAU和单纯的AAU患者中HLA-B27阳性率分别为70%和49.25%，显著高于对照组(2.97%，P<0.001)，慢性前葡萄膜炎患者中HLA-B27的阳性率(4.28%)与对照组无显著差别。结论AAU与HLA-B27有密切的相关性，在这些患者中进行HLA-B27分型对评价葡萄膜炎的病因和预后有一定的价值。
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分类号 R773
The association of various forms of anterior uveitis with HLA-B27 antigen and its clinical implication
Zhou Hongyan，Yang Peizeng，Huang Xiangkun
(Zhongshan Ophthalmic Center，Sun Yat-sen University
of Medical Sciences，Guangzhou 510060)
Abstract Objective：To investigate the association of various forms of anterior uveitis with HLA-B27 antigen and its possible clinical implication.Methods：Polymerase chain reaction (PCR) or microcytotoxity assay was used for determinating HLA-B27 on 20 patients with ankylosing spondylitis(AS) and acute anterior uveitis(AAU)，67 patients with AAU，70 patients with chronic anterior uveits including idiopathic anterior uveitis and Fuchs syndrome，and 708 healthy individuals.Results：Determination of HLA-B27 in 51 samples with both PCR and microcytotoxity assay revealed the same result，indicating that data from each method may be compared.A strong association between HLA-B27 and AS and AAU (70%)，and with AAU (49.25%) was noted compared with the controls (2.97%， P<0.001).No positive association was found between HLA-B27 and chronic anterior uveitis.Conclusion：AAU，especially in company with AS，is strongly associated with HLA-B27 antigen.Determinating HLA-B27 is helpful in the investigation of the etiology，and evaluation of prognosis of AAU.
, 百拇医药
Key words anterior uveitis immunogenetics HLA-B27antigen
葡萄膜炎是一类常见的致盲眼病。近年来，免疫遗传方面的研究已揭示出多种类型葡萄膜炎与特定的人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)相关[1]，如HLA-B27与急性前葡萄膜炎(acute anterior uveitis，AAU)有密切的相关性[2-6]，但有关HLA-B27与其它类型的前葡萄膜炎以及与关节强直性脊椎炎(ankylosing spondylysis，AS)相伴的葡萄膜炎之间的相关性国内尚无大宗病例的研究报道，我们用多聚酶链反应(Polymerase chain reaction，PCR)方法和传统的微量淋巴细胞毒试验探讨了157例前葡萄膜炎与HLA-B27的相关性。
1 材料和方法
, http://www.100md.com 检测对象为中山眼科中心葡萄膜炎专科门诊的前葡萄膜炎患者，共157例，均为汉族，其中AAU67例，AS伴发的AAU20例，其它类型前葡萄膜炎70例，对照为广东地区708个汉族健康人。
取受检者血，加入抗凝剂，用酚抽提法提取DNA。所用HLA-B27序列特异引物为：(1)5′-CAGTCTGTGCCTTGGCGTTGC，(2)5′-GGCTACGTGGACGACACGCT，扩增产物为144bp；我们选择人类生长激素基因特异性引物为内对照，序列为：(1)5′-GCCTTCCCAACCCCCTTA，(2)5′-TCACGGATTTCTGTTGTGTTT，扩增产物为429bp。以上引物均由加拿大真达科技贸易有限公司提供。PCR反应体系包括50～100ng基因DNA，多聚酶1U、B27特异性引物(0.5μmol)、200mdNTP和PCR缓冲液。实验过程为：95℃预先变性5min，在基因扩增仪上进行30个周期的热循环，3个温度条件分别是94℃30s、58℃40s、79℃60s。于2%琼脂糖凝胶上进行电泳20min，电压5V/cm，紫外灯下观察结果。
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2 结果
为了比较PCR和微量淋巴细胞毒试验的一致性，我们对51例受检者同时进行两种试验，发现二者检查结果相同，所以我们将早期的微量淋巴细胞毒试验结果和后期的PCR所测结果一并计算。
在不同类型的前葡萄膜炎中，HLA-B27阳性率有显著差别，AS伴发的AAU患者阳性率最高，为70%，AAU患者的阳性率为49.25%，二者均显著高于正常人群中此抗原的阳性率(2.97%，P<0.001)，慢性前葡萄膜炎患者的阳性率(4.28%)与正常人群则无显著性差别(表1)。
表1 不同类型前葡萄膜炎和正常人群的HLA-B27阳性率比较
Tab.1 The prevalence of HLA-B27 antigen in patients
with anterior uveitis and healthy individuals
, http://www.100md.com
n
Positive rate(%)
χ2
Relative risk
AS+AAU
20
70.0
190.98
71.33
AAU
67
49.25
, 百拇医药
202.47
31.05
Chronic anterior uveitis
70
4.28
0.46
1.66
Controls
708
2.97
3 讨论
微量淋巴细胞毒性试验是进行HLA-B27分型的传统方法，此方法需要高质量的抗血清，所用费用高，在一般医院难于推广，但以PCR方法检测HLA-B27全部等位基因，方法较为简便，所需样品量少[7]，且我们同时扩增人类生长激素基因作为内对照，避免假阳性和假阴性结果。经过对比两种方法检测的结果，我们发现二者相同，表明PCR方法可以取代传统的血清学方法，两种方法所测的结果具有可比性。
, 百拇医药
前葡萄膜炎是葡萄膜炎中最常见的类型，血清阴性的椎关节病变如AS、炎症性肠道疾病是其常见的伴随疾病，此类疾病与HLA-B27有明显的相关性。我们的结果也证实了这一观点，患者阳性率高于单纯AAU患者阳性率，更高于人群中的阳性率。Linsen等[5]发现在AAU患者中约50%为HLA-B27阳性，在AS伴发的AAU患者中阳性率近100%。
HLA-B27与AAU和AS的密切相关性为我们确定AAU的病因和类型提供了帮助。在我们诊治的20例AS患者中仅有2例在眼科就诊时知道患有AS，根据HLA-B27阳性的结果，我们建议这些患者进行骶髂关节及腰椎X线检查，最后明确了诊断。我们还对30例HLA-B27阴性的慢性前葡萄膜炎患者的骶髂关节拍片进行了分析，未发现AS存在。可见，对HLA-B27阴性的慢性前葡萄膜炎患者没有必要进行骶髂关节X线检查。
根据与HLA-B27的相关性把前葡萄膜炎分为两大类，一类是HLA-B27阳性，另一类为HLA-B27阴性，我们发现，前者主要表现为急性非肉芽肿性虹膜睫状体炎，多为双眼发病，但多先后发病，易于复发，如在急性期处理得当则预后较好。后一类则多为慢性前葡萄膜炎，多为肉芽肿性炎症，易发生虹膜后粘连、青光眼等并发症，预后较差。因此对患者进行HLA-B27分型不但有助于临床诊断、确定病因和伴随的全身疾病，而且对指导治疗和了解患者的预后也有一定的价值。
, http://www.100md.com
本文受国家杰出青年基金基金编号：39925034、教育部跨世纪人才培养计划基金1999-2、广东省自然科学基金980114和广东省重点科技攻关项目基金资助。
参考文献
1，杨培增，李绍珍.葡萄膜炎.北京：人民卫生出版社，1998.245-280
2，Pavesio CG.Clinical features of uveitis.In：Easty DL，Sparrow JM，eds.Oxford：Oxford Textbook of Ophthalmology，1999.518-520
3，张晓艳，胡天圣，汪秀明.急性前色素膜炎与HLA抗原相关的临床研究.中华眼科杂志，1990，26∶2
4，高永庆，雷红，王津津，等.HLA与急性前葡萄膜炎相关的研究.实用眼科杂志，1991，9∶461
, 百拇医药
5，Linssen A，Dekker-Saeys AJ，Dijkstra PF，et al.The use of HLA-B27 as a diagnostic and prognostic aid in acute anterior uveitis(AAU) in the Netherlands.Docum Ophthalmol，1986，64∶217
6，孙世珉，薛南平，刘焕业，等.前色素膜炎患者HLA-B27及T-细胞亚群的检测.中华眼科杂志，1990，26∶258
7，陈盛强，胡朝辉，燕启江，等.用PCR方法检测HLA-B27基因.上海医学检验杂志，1998，13∶131
(收稿：2000-02-12 修回：2000-03-08), 百拇医药