醋氯芬酸抑制大鼠佐剂关节炎及小鼠迟发型超敏反应
作者：戴 岳 于得志 禹志领 王志刚 陈 焱
单位：南京 210038 中国药科大学中药药理教研室
关键词：醋氯芬酸；佐剂关节炎；原发反应；继发反应；迟发型超敏反应
中国现代应用药学990105摘要 目的：研究醋氯芬酸对佐剂关节炎大鼠的治疗作用及对迟发型超敏反应的抑制作用。方法：大鼠足跖及尾部注射弗化完全佐剂，形成实验性关节炎，19d后明显出现继发性反应，此时分组给药，观察醋氯芬酸对关节炎大鼠左、右后足跖肿胀及胸腺、脾脏和肾上腺重量的影响。此外，分别于抗原攻击前后给药，观察醋氯芬酸对SRBC或PC所致小鼠迟发型超敏反应的抑制作用。结果：醋氯芬酸明显抑制关节炎大鼠的原发性和继发性足跖肿胀，并对大鼠的胸腺萎缩、脾脏和肾上腺增重具有对抗作用，其作用强度与等剂量双氯灭痛相近。醋氯芬酸于抗原攻击后给药，显著抑制SRBC或PC所致小鼠迟发型超敏反应，而抗原攻击前给药则无明显作用。结论：醋氯芬酸对大鼠佐剂关节炎具有治疗作用，其作用机制可能与其抗炎作用及对迟发型超敏反应的抑制作用有关。
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Treatment with aceclofenac on adjuvant-induced arthritis in rats and delayed type hypersensitivity in mice
Dai Yue(Dai Y),Yu Dezhi(Yu DZ),Yu Zhiling(Yu ZL),et al(Dept. of Pharmacology of Chinese Materia Medica,China Pharmaceutical University,Nanjing 210038)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the therapeutic effect on adjuvant-induced arthritis and inhibitory effect on delayed type hypersensitivity(DTH) of aceclofenac.METHODS:Freund′s complete adjuvant was injected into the footpads and tails of rats,to induce experimental arthritis.Aceclofenac was orally administered from 19th day when the secondary response was clear,its therapeutic effects on the footpad swelling and weights of thymus,spleen and adreal were observed.On the other hand,the inhibitory effect of aceclofenac on DTH with SRBC or PC was also examined,orally administered before and after antigen challenge,respectively.RESULTS:Aceclofenac significantly inhibited the primary and secondary footpad swelling,diminished the thymic atrophy and enlargement of the spleen and adrealin adjuvant-induced arthritic rats.Aceclofenac also suppressed DTH with SRBC or PC in mice when it was administered after antigen challenge,but it had no marked effect when administered before antigon challege.CONCLUSION:Aceclofenac exerted marked therapeutic activity against adjuvant-induced arthritis,associated with its inhibiton to inflammatory response and DTH.
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KEY WORDS aceclofenac,adjuvant-induced arthritis,primary response,secondary response,delayed type hypersensitivity
醋氯芬酸为新型灭酸类非甾体抗炎药物，1992年在西班牙首次上市，其解热、镇痛、抗炎作用与另一灭酸类药物双氯灭痛相当，但其口服给药对大鼠胃肠道的刺激作用仅为后者的1/4，而半数致死量约为后者的2倍[1，2]，因此该药比双氯灭痛具有更为广泛的临床应用前景。本文研究醋氯芬酸对大鼠佐剂关节炎及小鼠迟发型超敏反应的影响，探讨其治疗关节炎的可能作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物
昆明种小鼠，18～22g，分别由中国药科大学及南京中医药大学实验动物中心提供；雄性SD大鼠，150～200g，由江苏省实验动物中心提供。
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1.2 药品与试剂
醋氯芬酸(aceclofenac)、双氯灭痛(diclofenac sodium),由本校生药学研究室董辉博士提供，含量分别为99.3%,99.6%醋酸泼尼松片(prednisone)，江苏省南通制药厂产品，临用前均以0.5%CMC-Na配成混悬液；热杀死乳酪分枝杆菌(Mycobacterium butyricum),Difco产品；氯化钅 苦(Picryl chloride,PC),日本东京化成工业株式会社产品；绵羊红细胞(sheep red blood cell,SRBC)，江苏省江宁县卫生防疫站提供。
1.3 大鼠佐剂关节炎[3]
将热杀死乳酪分枝杆菌以液体石腊配成10mg/ml,充分研磨混匀，经高压灭菌后作为Freund′c完全佐剂使用。各鼠右后足跖皮内注射上述佐剂50μl,同时在尾部距尾根约3cm处皮内注射50μl,分别于注射前及注射后不同时间测量大鼠左、右后跖的容积(ml),以其前后差值作为肿胀度。并按下列标准评价大鼠左后足继发性病变的程度：0，无红肿；1，小趾关节稍肿；2，趾关节和足跖肿胀；3，踝关节以下的足爪肿胀；4，包括踝关节在内的全部足爪肿胀。
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1.4 SRBC诱导小鼠迟发型足跖肿胀[4]
小鼠颈背部sc 2%SRBC 0.2ml致敏,4d后右后足跖sc 10%SRBC 40μl攻击,24h后以千分卡测量小鼠左、右后足跖的厚度(×10-2mm),以其差值作为足跖肿胀度。
1.5 PC诱导小鼠耳廓接触性皮炎[4]
刮去小鼠腹部的毛，24h后以1%PC无水乙醇液0.1ml涂于小鼠腹部致敏,5d后以1%PC橄榄油溶液30μl涂于小鼠右耳廓两面进行攻击，左耳廓涂等体积橄榄油作对照,24h后测量左、右耳廓厚度(×10-2mm),以其差值表示接触性皮炎的强度。
1.6 统计学处理
以student-t检验方法比较组间差异。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 对大鼠佐剂关节炎的治疗作用
大鼠右后足跖注射佐剂后数小时即发生持续肿胀,4～6d后达到第一高峰，随后开始消肿，第14天后再次持续肿胀。第25天达到第二高峰。继发性病变出现于第14天，至第19天较为明显。并持续至第32天，主要表现为左后足和前肢关节明显红肿、耳部出现红斑、尾部有串珠状结节突起。在注射佐剂后第19天将大鼠按左后足跖肿胀度随机分组，并开始给药。实验组ig醋氯芬酸1.25,2.5,5mg/kg,阳性对照组ig双氯灭痛5mg/kg,空白对照组ig等体积0.5%CMC-Na每天一次，连续14d,分别于第19天，第25天，第28天及第32天测量大鼠左、右后足跖的肿胀度，并在末次给药日内(第32天)解剖大鼠，摘取肾上腺、胸腺及脾脏，称其湿重，计算脏器指数(mg/100g体重)。
2.1.1 对大鼠右后足跖原发性肿胀的影响：由表1可见，醋氯芬酸1.25,2.5,5mg/kg给药3d后，剂量依赖性显著抑制大鼠右后足跖的原发性肿胀。醋氯芬酸5mg/kg的抑制作用与等剂量双氯灭痛相近。
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2.1.2 对大鼠左后足跖继发性肿胀的影响：由表2可表1 对关节炎大鼠右后足跖原发性肿胀的影响(
±s,n=10) 组 别
剂 量
(mg/kg)
右后足跖肿胀度(ml)(d)
19
22
25
28
32
对照组
, http://www.100md.com
-
1.18±0.30
1.32±0.28
1.34±0.23
1.33±0.23
1.28±0.20
醋氯芬酸
1.25
1.10±0.31
0.98±0.29*
0.94±0.25*
, 百拇医药 0.84±0.22*
0.78±0.19*
2.5
1.20±0.41
1.05±0.33
0.85±0.25*
0.74±0.25*
0.66±0.23*
5
1.41±0.23
0.73±0.25*
, 百拇医药
0.59±0.32*
0.55±0.30*
0.52±0.25*
双氯灭痛
5
1.18±0.44
0.91±0.32*
0.70±0.33*
0.59±0.28*
0.46±0.24*
, 百拇医药
与对照组比较，*P<0.01
见，醋氯芬酸1.25,2.5,5mg/kg给药6d后，剂量依赖性显著抑制大鼠左后足跖的继发性肿胀，醋氯芬酸5mg/kg的抑制作用与等剂量双氯灭痛相近。此外，末次给药日(第32天)对照组、醋氯芬酸1.25,2.5,5mg/kg组、双氯灭痛5mg/kg组的病变积分分别为3.0±0.9、2.4±1.1、2.1±1.1、1.7±1.2(P<0.05)、1.4±1.1(P<0.01),表明醋氯芬酸、双氯灭痛5mg/kg可明显改善大鼠左后足的继发性病变。
表2 对关节炎大鼠左后足继发性肿胀的影响(±s,n=10)
组 别
剂 量
, http://www.100md.com
(mg/kg)
右后足跖肿胀度(ml)(d)
19
22
25
28
32
对照组
-
0.42±0.13
0.50±0.17
0.54±0.14
0.56±0.15
, http://www.100md.com
0.48±0.10
醋氯芬酸
1.25
0.39±0.14
0.42±0.13
0.38±0.13*1
0.43±0.14
0.34±0.13*1
2.5
0.46±0.15
0.38±0.13
, 百拇医药
0.36±0.13*2
0.29±0.13*2
0.27±0.12*2
5
0.44±0.15
0.36±0.12*1
0.30±0.12*2
0.25±0.10*2
0.22±0.09*2
双氯灭痛
, 百拇医药
5
0.40±0.19
0.34±0.16*1
0.28±0.18*2
0.23±0.13*2
0.19±0.14*2
与对照组比较，*1P<0.05，*2P<0.01
2.1.3 对佐剂关节炎大鼠脏器重量的影响：由表3可见，关节炎大鼠胸腺重量明显减轻，而脾脏、肾上腺重量显著增加，醋氯芬酸2.5,5mg/kg使关节炎大鼠胸腺呈增重趋势,5mg/kg明显减轻大鼠脾脏及肾上腺重量，双氯灭痛5mg/kg对大鼠胸腺、脾脏重量均无明显影响，但降低大鼠升高的肾上腺重量。
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表3 对关节炎大鼠脏器重量的影响(±s,n=10)
组 别
剂量(mg/kg)
胸 腺
脾脏(mg/100g体重)
肾上腺
正常组
-
165.2±20.3
252.6±94.5
15.2±2.8
, 百拇医药
对照组
-
110.9±23.6*1
597.0±158.7*1
18.9±3.4*1
醋氯芬酸
1.25
112.5±23.2
556.5±118.9
20.8±3.9
2.5
, 百拇医药
130.3±30.3
503.8±149.6
16.3±2.0
5
127.2±26.7
439.3±114.4*2
14.5±3.0*3
双氯灭痛
5
117.0±19.4
585.2±128.9
, 百拇医药
14.5±3.1*2
与正常组比较，*1P<0.01；与对照组比较，*2P<0.05，*3P<0.01
2.2 对SRBC诱导小鼠迟发型足跖肿胀的影响
2.2.1 致敏后给药的影响：雌性昆明种小鼠，实验组ig醋氯芬酸10,20,40mg/kg,阳性对照组ig泼尼松20mg/kg,空白对照组ig等体积的0.5%CMC-Na,连续5d。首次给药在SRBC致敏后1h,末次给药在SRBC攻击前3h。由表4可见，醋氯芬酸10,20,40mg/kg于抗原致敏至攻击期间给药，对SRBC诱导的小鼠迟发型足跖肿胀无明显影响，但使小鼠胸腺重量显著减轻，脾脏重量明显增加。
表4 致敏后给药对SRBC诱导小鼠迟发型足跖肿胀的影响(±s,n=9～10)
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组 别
剂量(mg/kg)
足跖肿胀度(×10-2mm)
胸腺(mg/10g体重)
脾脏(mg/10g体重)
对照组
-
25.1±9.2
21.3±7.5
46.5±8.2
醋氯芬酸
10
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18.6±8.5
13.8±4.8*1
49.6±7.1
20
26.7±10.9
15.9±4.1*2
71.8±22.5*2
40
20.7±6.9
8.9±6.2*2
79.9±31.2*2
, 百拇医药
泼尼松
20
19.6±7.8
9.1±3.0*2
37.4±5.3*1
与对照组比较，*1P<0.05，*2P<0.01
2.2.2 攻击后给药的影响：雌性昆明种小鼠，实验组及阳性对照组分别于SRBC攻击同时及其后16h,两次ig醋氯芬酸25,50mg/kg或泼尼松50mg/kg,对照组ig等容量0.5% CMC-Na。由表5可见，醋氯芬酸、泼尼松50mg/kg于抗原攻击后给药，明显抑制SRBC诱导的小鼠迟发型足跖肿胀。
, 百拇医药 表5 攻击后给药对SRBC诱导小鼠迟发型足跖肿胀的影响((±s,n=10) 组 别
剂量(mg/kg)
足跖肿胀度(×10-2mm)
抑制率(%)
对照组
-
18.4±6.9
醋氯芬酸
25
16.8±7.2
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8.7
50
12.8±4.0*1
30.4
泼尼松
50
8.0±5.5*2
56.5
与对照组比较，*1P<0.05，*2P<0.01
2.3 对PC诱导小鼠耳廓接触性皮炎的影响
2.3.1 致敏后给药的影响：雄性昆明种小鼠，实验组与阳性对照组自PC致敏前一日始分别ig醋氯芬酸10,20,40mg/kg或泼尼松25mg/kg,对照组ig等容积的0.5% CMC-Na,连续7d,末次给药后3h进行PC攻击。由表6可见，醋氯芬酸对PC诱导的小鼠接触性皮炎无明显影响，但使小鼠胸腺重量减轻、脾脏重量增加，泼尼松25mg/kg则明显抑制小鼠接触性皮炎，并使小鼠胸腺、脾脏重量均显著减轻。
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2.3.2 攻击后给药的影响：雌性昆明种小鼠，实验组、阳性对照组分别于PC攻击同时及其后16h,两次ig醋氯芬酸25,50mg/kg或泼尼松50mg/kg,空白对照组ig等容量0.5% CMC-Na。由表7可见，醋氯芬酸、泼尼松50mg/kg在抗原攻击后给药，显著抑制PC所致小鼠
表6 致敏后给药对PC诱导小鼠耳廓接触性皮炎的影响(±s,n=8)
组 别
剂量(mg/kg)
足跖肿胀度(×10-2mm)
胸腺(mg/10g体重)
脾脏(mg/10g体重)
, 百拇医药
对照组
-
5.2±1.5
45.0±10.1
37.6±9.7
醋氯芬酸
10
6.0±2.2
38.4±7.9
47.3±12.2
20
5.1±1.6
33.4±14.8
, 百拇医药
54.3±16.6*1
40
5.3±2.0
32.6±10.2*1
68.0±29.7*2
泼尼松
25
2.8±1.8*2
12.4±1.9*2
20.4±3.5*2
, 百拇医药 与对照组比较，*1P<0.05，*2P<0.01
耳廓接触性皮炎。
表7 攻击后给药对PC诱导小鼠耳廓接触性皮炎的影响(±s,n=8) 组 别
剂量(mg/kg)
耳廓肿胀度(×10-2mm)
抑制率(%)
对照组
-
13.4±5.4
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醋氯芬酸
25
12.4±4.9
7.5
50
7.8±4.7*1
41.8
泼尼松
50
3.4±1.0*2
74.6
与对照组比较，*1P<0.05，*2P<0.01
, 百拇医药
3 讨 论
大鼠佐剂关节炎的一些病理特征与人类的类风湿关节炎相似，其发生过程可分为两个阶段，大鼠注射佐剂足跖的第一次肿胀为非免疫性炎症反应，发生于注射后数小时，4～6d后达到高峰，其后逐渐减低，第14天后出现的第二次肿胀及对侧左后足、尾部及前肢关节等处的继发性病变为免疫性炎症反应，与抗原抗体复合物的参与、补体活化及迟发型超敏反应等因素有关[3，5]。醋氯芬酸自大鼠左后足继发性肿胀较为明显的第19天始给药，剂量依赖性显著抑制佐剂关节炎大鼠原发性及继发性足跖肿胀，改善左后足的继发性病变，并对抗关节炎大鼠的胸腺重量减轻及脾脏、肾上腺重量增加，其抗炎作用强度与等剂量双氯灭痛相当。醋氯芬酸在大鼠口服的胃肠道刺激性及急性毒性均低于双氯灭痛[1，2]，表明它优于双氯灭痛，可望成为新一代灭酸类抗类风湿关节炎药物。
SRBC诱导的小鼠迟发型足跖肿胀及PC诱导的小鼠耳廓接触性皮炎，均为迟发型超敏反应(DTH)实验模型。醋氯芬酸在抗原致敏至攻击期间给药，对上述两种DTH均无明显影响，而在抗原攻击后给药，则呈现显著的抑制作用，提示它可能不影响DTH诱导相的T淋巴细胞活化与增殖过程，其减轻DTH效应相的组织细胞损伤可能通过抑制淋巴因子释放或由其引起的炎症反应。醋氯芬酸在DTH诱导相给药，可使小鼠胸腺重量明显减轻，脾脏重量显著增加，这一作用与双氯灭痛类似。但双氯灭痛在致敏后给药显著抑制SRBC或PC所致小鼠DTH，而在攻击后给药仅呈现抑制趋势[4]，提示醋氯芬酸抑制DTH的作用机制有别于双氯灭痛。此外，阳性对照药泼尼松在诱导相或效应相给药均能抑制DTH，并使小鼠胸腺、脾脏重量都明显减轻，表明醋氯芬酸抑制DTH的作用特点亦明显不同于泼尼松等甾体类抗炎药物，其详细机制尚有待于进一步探讨。
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综上所述，醋氯芬酸明显减轻佐剂关节炎大鼠的原发件和继发性足跖肿胀，并抑制小鼠迟发型超敏反应后期的免疫性炎症。其对关节炎的治疗作用可能与抗迟发型超敏反应及抗炎作用有关。
参考文献
[1] Grau M,Guasch J,Monterol,et al.Pharmacology of the potent new nonsteroidal anti-inflammatory agent aceclofenac.Arzneim Forsch Drug Res,1991,41(Ⅱ) Nr,12,1265.
[2] 曹于平，杨英丽，戴岳，等.醋氯芬酸的解热、镇痛及抗炎作用.中国药科大学学报，1997，28(特).
[3] Matsuda H,Ido Y,Kubo M.Pharmacological study of NANPAO Ⅲ:On anti-inflammatory and antinociceptive effects.Journal of Medical and Pharmaceutical Society for WAKAN-YAKU,1993,10∶238.
[4] 戴岳，王志刚，禹志领，等.双氯灭痛的免疫抑制作用.现代应用药学，1996，13(6)∶11.
[5] 安平公夫，鹤藤 丞，水岛 裕编.炎症学双书4 炎症动物实验法.医学书院，东京，1975∶104.
收稿日期：1998-01-21, http://www.100md.com
单位：南京 210038 中国药科大学中药药理教研室
关键词：醋氯芬酸；佐剂关节炎；原发反应；继发反应；迟发型超敏反应
中国现代应用药学990105摘要 目的：研究醋氯芬酸对佐剂关节炎大鼠的治疗作用及对迟发型超敏反应的抑制作用。方法：大鼠足跖及尾部注射弗化完全佐剂，形成实验性关节炎，19d后明显出现继发性反应，此时分组给药，观察醋氯芬酸对关节炎大鼠左、右后足跖肿胀及胸腺、脾脏和肾上腺重量的影响。此外，分别于抗原攻击前后给药，观察醋氯芬酸对SRBC或PC所致小鼠迟发型超敏反应的抑制作用。结果：醋氯芬酸明显抑制关节炎大鼠的原发性和继发性足跖肿胀，并对大鼠的胸腺萎缩、脾脏和肾上腺增重具有对抗作用，其作用强度与等剂量双氯灭痛相近。醋氯芬酸于抗原攻击后给药，显著抑制SRBC或PC所致小鼠迟发型超敏反应，而抗原攻击前给药则无明显作用。结论：醋氯芬酸对大鼠佐剂关节炎具有治疗作用，其作用机制可能与其抗炎作用及对迟发型超敏反应的抑制作用有关。
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Treatment with aceclofenac on adjuvant-induced arthritis in rats and delayed type hypersensitivity in mice
Dai Yue(Dai Y),Yu Dezhi(Yu DZ),Yu Zhiling(Yu ZL),et al(Dept. of Pharmacology of Chinese Materia Medica,China Pharmaceutical University,Nanjing 210038)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the therapeutic effect on adjuvant-induced arthritis and inhibitory effect on delayed type hypersensitivity(DTH) of aceclofenac.METHODS:Freund′s complete adjuvant was injected into the footpads and tails of rats,to induce experimental arthritis.Aceclofenac was orally administered from 19th day when the secondary response was clear,its therapeutic effects on the footpad swelling and weights of thymus,spleen and adreal were observed.On the other hand,the inhibitory effect of aceclofenac on DTH with SRBC or PC was also examined,orally administered before and after antigen challenge,respectively.RESULTS:Aceclofenac significantly inhibited the primary and secondary footpad swelling,diminished the thymic atrophy and enlargement of the spleen and adrealin adjuvant-induced arthritic rats.Aceclofenac also suppressed DTH with SRBC or PC in mice when it was administered after antigen challenge,but it had no marked effect when administered before antigon challege.CONCLUSION:Aceclofenac exerted marked therapeutic activity against adjuvant-induced arthritis,associated with its inhibiton to inflammatory response and DTH.
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KEY WORDS aceclofenac,adjuvant-induced arthritis,primary response,secondary response,delayed type hypersensitivity
醋氯芬酸为新型灭酸类非甾体抗炎药物，1992年在西班牙首次上市，其解热、镇痛、抗炎作用与另一灭酸类药物双氯灭痛相当，但其口服给药对大鼠胃肠道的刺激作用仅为后者的1/4，而半数致死量约为后者的2倍[1，2]，因此该药比双氯灭痛具有更为广泛的临床应用前景。本文研究醋氯芬酸对大鼠佐剂关节炎及小鼠迟发型超敏反应的影响，探讨其治疗关节炎的可能作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物
昆明种小鼠，18～22g，分别由中国药科大学及南京中医药大学实验动物中心提供；雄性SD大鼠，150～200g，由江苏省实验动物中心提供。
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1.2 药品与试剂
醋氯芬酸(aceclofenac)、双氯灭痛(diclofenac sodium),由本校生药学研究室董辉博士提供，含量分别为99.3%,99.6%醋酸泼尼松片(prednisone)，江苏省南通制药厂产品，临用前均以0.5%CMC-Na配成混悬液；热杀死乳酪分枝杆菌(Mycobacterium butyricum),Difco产品；氯化钅 苦(Picryl chloride,PC),日本东京化成工业株式会社产品；绵羊红细胞(sheep red blood cell,SRBC)，江苏省江宁县卫生防疫站提供。
1.3 大鼠佐剂关节炎[3]
将热杀死乳酪分枝杆菌以液体石腊配成10mg/ml,充分研磨混匀，经高压灭菌后作为Freund′c完全佐剂使用。各鼠右后足跖皮内注射上述佐剂50μl,同时在尾部距尾根约3cm处皮内注射50μl,分别于注射前及注射后不同时间测量大鼠左、右后跖的容积(ml),以其前后差值作为肿胀度。并按下列标准评价大鼠左后足继发性病变的程度：0，无红肿；1，小趾关节稍肿；2，趾关节和足跖肿胀；3，踝关节以下的足爪肿胀；4，包括踝关节在内的全部足爪肿胀。
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1.4 SRBC诱导小鼠迟发型足跖肿胀[4]
小鼠颈背部sc 2%SRBC 0.2ml致敏,4d后右后足跖sc 10%SRBC 40μl攻击,24h后以千分卡测量小鼠左、右后足跖的厚度(×10-2mm),以其差值作为足跖肿胀度。
1.5 PC诱导小鼠耳廓接触性皮炎[4]
刮去小鼠腹部的毛，24h后以1%PC无水乙醇液0.1ml涂于小鼠腹部致敏,5d后以1%PC橄榄油溶液30μl涂于小鼠右耳廓两面进行攻击，左耳廓涂等体积橄榄油作对照,24h后测量左、右耳廓厚度(×10-2mm),以其差值表示接触性皮炎的强度。
1.6 统计学处理
以student-t检验方法比较组间差异。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 对大鼠佐剂关节炎的治疗作用
大鼠右后足跖注射佐剂后数小时即发生持续肿胀,4～6d后达到第一高峰，随后开始消肿，第14天后再次持续肿胀。第25天达到第二高峰。继发性病变出现于第14天，至第19天较为明显。并持续至第32天，主要表现为左后足和前肢关节明显红肿、耳部出现红斑、尾部有串珠状结节突起。在注射佐剂后第19天将大鼠按左后足跖肿胀度随机分组，并开始给药。实验组ig醋氯芬酸1.25,2.5,5mg/kg,阳性对照组ig双氯灭痛5mg/kg,空白对照组ig等体积0.5%CMC-Na每天一次，连续14d,分别于第19天，第25天，第28天及第32天测量大鼠左、右后足跖的肿胀度，并在末次给药日内(第32天)解剖大鼠，摘取肾上腺、胸腺及脾脏，称其湿重，计算脏器指数(mg/100g体重)。
2.1.1 对大鼠右后足跖原发性肿胀的影响：由表1可见，醋氯芬酸1.25,2.5,5mg/kg给药3d后，剂量依赖性显著抑制大鼠右后足跖的原发性肿胀。醋氯芬酸5mg/kg的抑制作用与等剂量双氯灭痛相近。
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2.1.2 对大鼠左后足跖继发性肿胀的影响：由表2可表1 对关节炎大鼠右后足跖原发性肿胀的影响(
±s,n=10) 组 别剂 量
(mg/kg)
右后足跖肿胀度(ml)(d)
19
22
25
28
32
对照组
, http://www.100md.com
-
1.18±0.30
1.32±0.28
1.34±0.23
1.33±0.23
1.28±0.20
醋氯芬酸
1.25
1.10±0.31
0.98±0.29*
0.94±0.25*
, 百拇医药 0.84±0.22*
0.78±0.19*
2.5
1.20±0.41
1.05±0.33
0.85±0.25*
0.74±0.25*
0.66±0.23*
5
1.41±0.23
0.73±0.25*
, 百拇医药
0.59±0.32*
0.55±0.30*
0.52±0.25*
双氯灭痛
5
1.18±0.44
0.91±0.32*
0.70±0.33*
0.59±0.28*
0.46±0.24*
, 百拇医药
与对照组比较，*P<0.01
见，醋氯芬酸1.25,2.5,5mg/kg给药6d后，剂量依赖性显著抑制大鼠左后足跖的继发性肿胀，醋氯芬酸5mg/kg的抑制作用与等剂量双氯灭痛相近。此外，末次给药日(第32天)对照组、醋氯芬酸1.25,2.5,5mg/kg组、双氯灭痛5mg/kg组的病变积分分别为3.0±0.9、2.4±1.1、2.1±1.1、1.7±1.2(P<0.05)、1.4±1.1(P<0.01),表明醋氯芬酸、双氯灭痛5mg/kg可明显改善大鼠左后足的继发性病变。
表2 对关节炎大鼠左后足继发性肿胀的影响(
±s,n=10)组 别
剂 量
, http://www.100md.com
(mg/kg)
右后足跖肿胀度(ml)(d)
19
22
25
28
32
对照组
-
0.42±0.13
0.50±0.17
0.54±0.14
0.56±0.15
, http://www.100md.com
0.48±0.10
醋氯芬酸
1.25
0.39±0.14
0.42±0.13
0.38±0.13*1
0.43±0.14
0.34±0.13*1
2.5
0.46±0.15
0.38±0.13
, 百拇医药
0.36±0.13*2
0.29±0.13*2
0.27±0.12*2
5
0.44±0.15
0.36±0.12*1
0.30±0.12*2
0.25±0.10*2
0.22±0.09*2
双氯灭痛
, 百拇医药
5
0.40±0.19
0.34±0.16*1
0.28±0.18*2
0.23±0.13*2
0.19±0.14*2
与对照组比较，*1P<0.05，*2P<0.01
2.1.3 对佐剂关节炎大鼠脏器重量的影响：由表3可见，关节炎大鼠胸腺重量明显减轻，而脾脏、肾上腺重量显著增加，醋氯芬酸2.5,5mg/kg使关节炎大鼠胸腺呈增重趋势,5mg/kg明显减轻大鼠脾脏及肾上腺重量，双氯灭痛5mg/kg对大鼠胸腺、脾脏重量均无明显影响，但降低大鼠升高的肾上腺重量。
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表3 对关节炎大鼠脏器重量的影响(
±s,n=10)组 别
剂量(mg/kg)
胸 腺
脾脏(mg/100g体重)
肾上腺
正常组
-
165.2±20.3
252.6±94.5
15.2±2.8
, 百拇医药
对照组
-
110.9±23.6*1
597.0±158.7*1
18.9±3.4*1
醋氯芬酸
1.25
112.5±23.2
556.5±118.9
20.8±3.9
2.5
, 百拇医药
130.3±30.3
503.8±149.6
16.3±2.0
5
127.2±26.7
439.3±114.4*2
14.5±3.0*3
双氯灭痛
5
117.0±19.4
585.2±128.9
, 百拇医药
14.5±3.1*2
与正常组比较，*1P<0.01；与对照组比较，*2P<0.05，*3P<0.01
2.2 对SRBC诱导小鼠迟发型足跖肿胀的影响
2.2.1 致敏后给药的影响：雌性昆明种小鼠，实验组ig醋氯芬酸10,20,40mg/kg,阳性对照组ig泼尼松20mg/kg,空白对照组ig等体积的0.5%CMC-Na,连续5d。首次给药在SRBC致敏后1h,末次给药在SRBC攻击前3h。由表4可见，醋氯芬酸10,20,40mg/kg于抗原致敏至攻击期间给药，对SRBC诱导的小鼠迟发型足跖肿胀无明显影响，但使小鼠胸腺重量显著减轻，脾脏重量明显增加。
表4 致敏后给药对SRBC诱导小鼠迟发型足跖肿胀的影响(
±s,n=9～10), http://www.100md.com
组 别
剂量(mg/kg)
足跖肿胀度(×10-2mm)
胸腺(mg/10g体重)
脾脏(mg/10g体重)
对照组
-
25.1±9.2
21.3±7.5
46.5±8.2
醋氯芬酸
10
, http://www.100md.com
18.6±8.5
13.8±4.8*1
49.6±7.1
20
26.7±10.9
15.9±4.1*2
71.8±22.5*2
40
20.7±6.9
8.9±6.2*2
79.9±31.2*2
, 百拇医药
泼尼松
20
19.6±7.8
9.1±3.0*2
37.4±5.3*1
与对照组比较，*1P<0.05，*2P<0.01
2.2.2 攻击后给药的影响：雌性昆明种小鼠，实验组及阳性对照组分别于SRBC攻击同时及其后16h,两次ig醋氯芬酸25,50mg/kg或泼尼松50mg/kg,对照组ig等容量0.5% CMC-Na。由表5可见，醋氯芬酸、泼尼松50mg/kg于抗原攻击后给药，明显抑制SRBC诱导的小鼠迟发型足跖肿胀。
, 百拇医药 表5 攻击后给药对SRBC诱导小鼠迟发型足跖肿胀的影响((
±s,n=10) 组 别剂量(mg/kg)
足跖肿胀度(×10-2mm)
抑制率(%)
对照组
-
18.4±6.9
醋氯芬酸
25
16.8±7.2
, http://www.100md.com
8.7
50
12.8±4.0*1
30.4
泼尼松
50
8.0±5.5*2
56.5
与对照组比较，*1P<0.05，*2P<0.01
2.3 对PC诱导小鼠耳廓接触性皮炎的影响
2.3.1 致敏后给药的影响：雄性昆明种小鼠，实验组与阳性对照组自PC致敏前一日始分别ig醋氯芬酸10,20,40mg/kg或泼尼松25mg/kg,对照组ig等容积的0.5% CMC-Na,连续7d,末次给药后3h进行PC攻击。由表6可见，醋氯芬酸对PC诱导的小鼠接触性皮炎无明显影响，但使小鼠胸腺重量减轻、脾脏重量增加，泼尼松25mg/kg则明显抑制小鼠接触性皮炎，并使小鼠胸腺、脾脏重量均显著减轻。
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2.3.2 攻击后给药的影响：雌性昆明种小鼠，实验组、阳性对照组分别于PC攻击同时及其后16h,两次ig醋氯芬酸25,50mg/kg或泼尼松50mg/kg,空白对照组ig等容量0.5% CMC-Na。由表7可见，醋氯芬酸、泼尼松50mg/kg在抗原攻击后给药，显著抑制PC所致小鼠
表6 致敏后给药对PC诱导小鼠耳廓接触性皮炎的影响(
±s,n=8)组 别
剂量(mg/kg)
足跖肿胀度(×10-2mm)
胸腺(mg/10g体重)
脾脏(mg/10g体重)
, 百拇医药
对照组
-
5.2±1.5
45.0±10.1
37.6±9.7
醋氯芬酸
10
6.0±2.2
38.4±7.9
47.3±12.2
20
5.1±1.6
33.4±14.8
, 百拇医药
54.3±16.6*1
40
5.3±2.0
32.6±10.2*1
68.0±29.7*2
泼尼松
25
2.8±1.8*2
12.4±1.9*2
20.4±3.5*2
, 百拇医药 与对照组比较，*1P<0.05，*2P<0.01
耳廓接触性皮炎。
表7 攻击后给药对PC诱导小鼠耳廓接触性皮炎的影响(
±s,n=8) 组 别剂量(mg/kg)
耳廓肿胀度(×10-2mm)
抑制率(%)
对照组
-
13.4±5.4
, http://www.100md.com
醋氯芬酸
25
12.4±4.9
7.5
50
7.8±4.7*1
41.8
泼尼松
50
3.4±1.0*2
74.6
与对照组比较，*1P<0.05，*2P<0.01
, 百拇医药
3 讨 论
大鼠佐剂关节炎的一些病理特征与人类的类风湿关节炎相似，其发生过程可分为两个阶段，大鼠注射佐剂足跖的第一次肿胀为非免疫性炎症反应，发生于注射后数小时，4～6d后达到高峰，其后逐渐减低，第14天后出现的第二次肿胀及对侧左后足、尾部及前肢关节等处的继发性病变为免疫性炎症反应，与抗原抗体复合物的参与、补体活化及迟发型超敏反应等因素有关[3，5]。醋氯芬酸自大鼠左后足继发性肿胀较为明显的第19天始给药，剂量依赖性显著抑制佐剂关节炎大鼠原发性及继发性足跖肿胀，改善左后足的继发性病变，并对抗关节炎大鼠的胸腺重量减轻及脾脏、肾上腺重量增加，其抗炎作用强度与等剂量双氯灭痛相当。醋氯芬酸在大鼠口服的胃肠道刺激性及急性毒性均低于双氯灭痛[1，2]，表明它优于双氯灭痛，可望成为新一代灭酸类抗类风湿关节炎药物。
SRBC诱导的小鼠迟发型足跖肿胀及PC诱导的小鼠耳廓接触性皮炎，均为迟发型超敏反应(DTH)实验模型。醋氯芬酸在抗原致敏至攻击期间给药，对上述两种DTH均无明显影响，而在抗原攻击后给药，则呈现显著的抑制作用，提示它可能不影响DTH诱导相的T淋巴细胞活化与增殖过程，其减轻DTH效应相的组织细胞损伤可能通过抑制淋巴因子释放或由其引起的炎症反应。醋氯芬酸在DTH诱导相给药，可使小鼠胸腺重量明显减轻，脾脏重量显著增加，这一作用与双氯灭痛类似。但双氯灭痛在致敏后给药显著抑制SRBC或PC所致小鼠DTH，而在攻击后给药仅呈现抑制趋势[4]，提示醋氯芬酸抑制DTH的作用机制有别于双氯灭痛。此外，阳性对照药泼尼松在诱导相或效应相给药均能抑制DTH，并使小鼠胸腺、脾脏重量都明显减轻，表明醋氯芬酸抑制DTH的作用特点亦明显不同于泼尼松等甾体类抗炎药物，其详细机制尚有待于进一步探讨。
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综上所述，醋氯芬酸明显减轻佐剂关节炎大鼠的原发件和继发性足跖肿胀，并抑制小鼠迟发型超敏反应后期的免疫性炎症。其对关节炎的治疗作用可能与抗迟发型超敏反应及抗炎作用有关。
参考文献
[1] Grau M,Guasch J,Monterol,et al.Pharmacology of the potent new nonsteroidal anti-inflammatory agent aceclofenac.Arzneim Forsch Drug Res,1991,41(Ⅱ) Nr,12,1265.
[2] 曹于平，杨英丽，戴岳，等.醋氯芬酸的解热、镇痛及抗炎作用.中国药科大学学报，1997，28(特).
[3] Matsuda H,Ido Y,Kubo M.Pharmacological study of NANPAO Ⅲ:On anti-inflammatory and antinociceptive effects.Journal of Medical and Pharmaceutical Society for WAKAN-YAKU,1993,10∶238.
[4] 戴岳，王志刚，禹志领，等.双氯灭痛的免疫抑制作用.现代应用药学，1996，13(6)∶11.
[5] 安平公夫，鹤藤 丞，水岛 裕编.炎症学双书4 炎症动物实验法.医学书院，东京，1975∶104.
收稿日期：1998-01-21, http://www.100md.com