薄层色谱—荧光分光光度法测定黄连中小檗碱的含量
作者：杨广德 杨二库 王嗣岑 贺浪冲
单位：杨广德 杨二库 王嗣岑 贺浪冲(西安交通大学药学院 西安 710061)
关键词：薄层色谱-荧光分光光度法；黄连；小檗碱
西北药学杂志000411摘要 建立了薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连中小檗碱的含量。以1%盐酸甲醇为溶剂超声提取，用苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)展开，甲醇洗脱，调节pH值为12，在Ex＝365nm，Em＝409nm的条件下测定其荧光强度，线性范围为0.012～0.12ng/ml，r＝0.9991，平均回收率为97.5%。
中图分类号：R284 文献标识码：A
黄连为毛莨科植物黄连(Coptis chinensis Franch)、三角叶黄连(Coptis deltoides C.Y.Cheng et Hsiao)或云连(Coptis teeta Wall)的干燥根茎。其主要生物活性成分为小檗碱。本文采用薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连药材中小檗碱的含量。
, http://www.100md.com
1 仪器与试药
1.1 仪器 RF-540型荧光分光光度仪，CS-930双波长薄层扫描仪(日本岛津)。
1.2 试药 盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所)；黄连药材(市售)。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加入甲醇制成1mg/ml贮备液。用前取贮备液适量用甲醇稀释成20μg/ml的对照品溶液。
2.2 薄层色谱条件〔1，2〕 以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂，展开前用氨水饱和15min，展距为13cm，晾干后置紫外灯(365nm)下检视，小檗碱呈现黄绿色荧光斑点(Rf＝0.37)。
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2.3 荧光测定条件的选择
2.3.1 pH条件的选择 取0.1ml对照品溶液，加入不同体积的1mol/L氢氧化钠溶液，在Ex＝365nm，Em＝409nm处测定盐酸小檗碱的荧光强度。结果显示20mmol/L氢氧化钠溶液荧光强度最大(见表1)。
表1 氢氧化钠浓度对小檗碱荧光强度的影响 氢氧化钠(mmol/L)
5
12.5
20
25
50
小檗碱荧光强度
, 百拇医药
11.6
49.1
81.7
65.9
28.1
2.3.2 荧光光谱的绘制 取对照品溶液用甲醇稀释成约100ng/ml(碱液浓度为20mmol/L)，进行荧光强度扫描测定，从扫描图谱得到小檗碱最大激发波长365nm，最大发射波长为409nm(见图1)。
图1 小檗碱荧光扫描图谱
2.4 线性关系及精密度试验 取对照品溶液2，8，12，16，20μl分别点于同一薄层板上，依法展开、洗脱，将洗脱液依次移入试管内，精密加入甲醇2ml，1mol/L氢氧化钠溶液75μl，摇匀后测定荧光强度。结果表明，小檗碱在0.012～0.12ng/ml范围内与荧光强度有良好的线性关系，线性方程为F＝24.17+164.0C，r＝0.9991。采用外标两点法计算样品中小檗碱的含量。精密度实验结果表明，同板误差RSD＝2.14%，板间误差RSD＝2.79%(n＝5)。
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2.5 样品含量测定 取黄连药材粉末约0.2g，精密称定，加1%盐酸甲醇溶液约150ml，60℃水浴加热15min，超声30min，加甲醇稀释至200ml，摇匀，静置后取上清液作为供试品溶液。精密吸取对照溶液4，8μl及黄连提取液2μl点于同一硅胶G板上，展开，将板上相应斑点刮入离心管中，加入甲醇1ml，振摇约15min，超声20min，离心10min(4000r/min)，吸取上清液0.8ml于试管内，加入甲醇2ml和1mol/L氢氧化钠溶液75μl，摇匀，测定荧光强度，结果3批黄连药材中小檗碱平均含量为5.16%(g/g)。
2.6 回收率试验 取已知小檗碱含量的黄连药材5份，精密称定，加入与小檗碱含量相当的对照品溶液，溶剂挥干后，依2.5项下操作，测定小檗碱的含量。结果表明平均回收率为96.5%，RSD＝5.70%。
3 讨论
文中采用的薄层展开条件优于文献报道方法，灵敏度高，选择性好，能够将小檗碱与其他成分有效分离，且斑点圆整，无拖尾现象。适用于小檗碱的痕量分析及复方制剂中小檗碱的含量分析。
参考文献
〔1〕 中国药典中药薄层色谱彩色图集.1993：70
〔2〕 中国药典2000年版.一部.2000：251
〔3〕 藏凤和.薄层-比色法测定黄连中小檗碱的含量.药物分析杂志，1986，6(2)：100
(收稿：2000-01-04), 百拇医药
单位：杨广德 杨二库 王嗣岑 贺浪冲(西安交通大学药学院 西安 710061)
关键词：薄层色谱-荧光分光光度法；黄连；小檗碱
西北药学杂志000411摘要 建立了薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连中小檗碱的含量。以1%盐酸甲醇为溶剂超声提取，用苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)展开，甲醇洗脱，调节pH值为12，在Ex＝365nm，Em＝409nm的条件下测定其荧光强度，线性范围为0.012～0.12ng/ml，r＝0.9991，平均回收率为97.5%。
中图分类号：R284 文献标识码：A
黄连为毛莨科植物黄连(Coptis chinensis Franch)、三角叶黄连(Coptis deltoides C.Y.Cheng et Hsiao)或云连(Coptis teeta Wall)的干燥根茎。其主要生物活性成分为小檗碱。本文采用薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连药材中小檗碱的含量。
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1 仪器与试药
1.1 仪器 RF-540型荧光分光光度仪，CS-930双波长薄层扫描仪(日本岛津)。
1.2 试药 盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所)；黄连药材(市售)。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加入甲醇制成1mg/ml贮备液。用前取贮备液适量用甲醇稀释成20μg/ml的对照品溶液。
2.2 薄层色谱条件〔1，2〕 以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂，展开前用氨水饱和15min，展距为13cm，晾干后置紫外灯(365nm)下检视，小檗碱呈现黄绿色荧光斑点(Rf＝0.37)。
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2.3 荧光测定条件的选择
2.3.1 pH条件的选择 取0.1ml对照品溶液，加入不同体积的1mol/L氢氧化钠溶液，在Ex＝365nm，Em＝409nm处测定盐酸小檗碱的荧光强度。结果显示20mmol/L氢氧化钠溶液荧光强度最大(见表1)。
表1 氢氧化钠浓度对小檗碱荧光强度的影响 氢氧化钠(mmol/L)
5
12.5
20
25
50
小檗碱荧光强度
, 百拇医药
11.6
49.1
81.7
65.9
28.1
2.3.2 荧光光谱的绘制 取对照品溶液用甲醇稀释成约100ng/ml(碱液浓度为20mmol/L)，进行荧光强度扫描测定，从扫描图谱得到小檗碱最大激发波长365nm，最大发射波长为409nm(见图1)。
图1 小檗碱荧光扫描图谱
2.4 线性关系及精密度试验 取对照品溶液2，8，12，16，20μl分别点于同一薄层板上，依法展开、洗脱，将洗脱液依次移入试管内，精密加入甲醇2ml，1mol/L氢氧化钠溶液75μl，摇匀后测定荧光强度。结果表明，小檗碱在0.012～0.12ng/ml范围内与荧光强度有良好的线性关系，线性方程为F＝24.17+164.0C，r＝0.9991。采用外标两点法计算样品中小檗碱的含量。精密度实验结果表明，同板误差RSD＝2.14%，板间误差RSD＝2.79%(n＝5)。
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2.5 样品含量测定 取黄连药材粉末约0.2g，精密称定，加1%盐酸甲醇溶液约150ml，60℃水浴加热15min，超声30min，加甲醇稀释至200ml，摇匀，静置后取上清液作为供试品溶液。精密吸取对照溶液4，8μl及黄连提取液2μl点于同一硅胶G板上，展开，将板上相应斑点刮入离心管中，加入甲醇1ml，振摇约15min，超声20min，离心10min(4000r/min)，吸取上清液0.8ml于试管内，加入甲醇2ml和1mol/L氢氧化钠溶液75μl，摇匀，测定荧光强度，结果3批黄连药材中小檗碱平均含量为5.16%(g/g)。
2.6 回收率试验 取已知小檗碱含量的黄连药材5份，精密称定，加入与小檗碱含量相当的对照品溶液，溶剂挥干后，依2.5项下操作，测定小檗碱的含量。结果表明平均回收率为96.5%，RSD＝5.70%。
3 讨论
文中采用的薄层展开条件优于文献报道方法，灵敏度高，选择性好，能够将小檗碱与其他成分有效分离，且斑点圆整，无拖尾现象。适用于小檗碱的痕量分析及复方制剂中小檗碱的含量分析。
参考文献
〔1〕 中国药典中药薄层色谱彩色图集.1993：70
〔2〕 中国药典2000年版.一部.2000：251
〔3〕 藏凤和.薄层-比色法测定黄连中小檗碱的含量.药物分析杂志，1986，6(2)：100
(收稿：2000-01-04), 百拇医药