薄层扫描法测定消积片中盐酸小檗碱的含量
作者：魏波 代雪平 刘平香
单位：刘平香(洛阳医专附属医院药剂科，洛阳市 471000)；魏波 代雪平(河南省人民医院药剂科，郑州市 450003)
关键词：
中国药房000124
中图分类号：R927.2 文献标识码：B
文章编号：1001-0408(2000)01-0040-01▲
消积片由人参、白术、甘草、黄连、陈皮等12味常用中药经提取加工而成。为了压片及矫正口感，处方中加入了大量的乳糖和蔗糖，以及其它添加剂，这些成分的存在，影响了盐酸小檗碱的含量测定。以往曾用氧化铝柱层析法[1]除杂，但供试品溶液中仍含有较多的糖，使薄层色谱分离度差，影响扫描测定。本文采用大孔树脂吸附法较好地解决了这一问题。
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1 实验材料
1.1 仪器
瑞士CAMAGⅡ型薄层色谱扫描仪(3.15版本数据处理软件)。
1.2 药品与试剂
消积片，由河南新乡人民制药厂提供；盐酸小檗碱对照品，由中国药品生物制品检定所提供(批号713-9204)，纯度符合含量测定要求。
2 测定方法
2.1 扫描条件
采用以3%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液(12∶6∶3∶3∶1)为展开剂，展开前与等体积浓氨试液共同预平衡15分钟；扫描波长λs∶350nm。
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2.2 溶液配制
2.2.1 对照品溶液：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加乙醇制成每1ml约含0.3mg的溶液，备用。
2.2.2 样品溶液：取消积片20片，精密称重，研细，精密称取约5片量细粉置索氏提取器中，加甲醇回流提取至提取液无色。回收提取液，残渣加水溶解并完全转移入已处理好的D101大孔树脂柱(内径1cm，树脂层高15cm，50ml水预洗)上，以1滴/秒的速度洗脱(下同)，再用50ml水洗脱，最后用50ml乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，置水浴上蒸至少量，并完全移入5ml量瓶中，用乙醇定容，备用。
2.3 测定方法
吸取对照品溶液2μl、5μl及样品溶液5μl，按上述扫描条件进行扫描，测定样品及对照品吸收度积分值，计算，即得。
3 结果
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3.1 薄层色谱分离结果
薄层色谱扫描结果见图1。图1中Ⅱ为样品溶液色谱图，可以看出盐酸小檗碱斑点较集中，且前后均无干扰峰，近于基线分离，适用于扫描测定含量。
Ⅰ阴性对照(缺黄连) Ⅱ消积片 Ⅲ盐酸小檗碱
图1 薄层色谱扫描图
3.2 标准曲线
吸取每1ml含盐酸小檗碱0.3 064mg的对照品溶液1μl、2μl、3μl、4μl、5μl，点于同一硅胶G薄层板上，按上述条件展开取出，晾干，扫描，测定吸收峰面积，进行回归分析，得回归方程：Y(积分值)=451.58X(点样量μl)+217.96。测定结果表明，在0.3 064μg～1.532μg的考察范围内点样量和吸收积分值之间线性关系较好(γ=0.9 996，n=5)。
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3.3 回收率
精密称取已知盐酸小檗碱含量的消积片供试品约5片量，置索氏提取器中，加入对照品溶液2.00ml，按供试品溶液制备方法操作，最后定容于10ml量瓶中，作为供试品溶液，按测定方法进行测定，计算加样回收率。结果，加样回收率平均为98.6%(n=5，RSD=0.9%)，说明本方法回收率较高。
3.4 精密度
取同一批消积片样品，按测定方法先后共测定5次，各次测定结果间的RSD为1.0%。
3.5 阴性对照试验
除黄连外，方中其余各味按消积片制法项下规定制成阴性对照样品，取阴性对照样品按样品溶液制备方法制成阴性对照溶液，取上述溶液5μl及盐酸小檗碱对照品溶液2μl，点于同一块硅胶G薄层板上，按上述色谱条件展开。结果，阴性对照色谱中在与对照品色谱同一位置上不显相同的斑点，对本测定无干扰(扫描色谱见图1)。
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3.6 实际测定3批样品
测定3批消积片中盐酸小檗碱含量，并同时测定原料药材黄连中盐酸小檗碱含量，求出消积片中盐酸小檗碱理论含量，二者较为符合(见表1)。
表1 3批消积片盐酸小檗碱含量测定结果 批号
950201
950202
950203
实测含量
1.1mg/片
1.4mg/片
1.6mg/片
, http://www.100md.com 理论含量
1.2mg/片
1.5mg/片
16.mg/片
4 讨论
4.1 pH值对大孔树脂吸附盐酸小檗碱的影响
大孔树脂是有机高分子聚合物，结构骨架与离子交换树脂相似，但不含离子交换基因。因此，大孔树脂对生物碱的吸附只是表面吸附。这种吸附作用受pH影响较大。本实验中曾采用盐酸-甲酸回流提取小檗碱，提取物水溶液酸性，当用大孔树脂进行除杂时，小檗碱亦被洗脱下来；后改用甲醇提取，提取物水溶液呈中性，大孔树脂吸附小檗碱较牢固，方法回收率好。
4.2 本法的特点及应用
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文献[2]报道，用大孔树脂提取三颗针中的生物碱，提取率达97%，这与本文结果一致。本实验表明，大孔树脂是定量分析中除去糖类杂质干扰的有效方法，适用于口服液、含片等含糖制剂的分析。■
参考文献：
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典(一部)[S].1995年版.广州：广东科技出版社、化学工业出版社，1995：547～548.
[2]中国医学科学院药物研究所植化室.大孔吸附树脂在中草药化学成分提取分离中的一些应用[J].中草药，1980，11(3)：138.
收稿日期：1999-08-02
修回日期：1999-09-13, 百拇医药
单位：刘平香(洛阳医专附属医院药剂科，洛阳市 471000)；魏波 代雪平(河南省人民医院药剂科，郑州市 450003)
关键词：
中国药房000124
中图分类号：R927.2 文献标识码：B
文章编号：1001-0408(2000)01-0040-01▲
消积片由人参、白术、甘草、黄连、陈皮等12味常用中药经提取加工而成。为了压片及矫正口感，处方中加入了大量的乳糖和蔗糖，以及其它添加剂，这些成分的存在，影响了盐酸小檗碱的含量测定。以往曾用氧化铝柱层析法[1]除杂，但供试品溶液中仍含有较多的糖，使薄层色谱分离度差，影响扫描测定。本文采用大孔树脂吸附法较好地解决了这一问题。
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1 实验材料
1.1 仪器
瑞士CAMAGⅡ型薄层色谱扫描仪(3.15版本数据处理软件)。
1.2 药品与试剂
消积片，由河南新乡人民制药厂提供；盐酸小檗碱对照品，由中国药品生物制品检定所提供(批号713-9204)，纯度符合含量测定要求。
2 测定方法
2.1 扫描条件
采用以3%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液(12∶6∶3∶3∶1)为展开剂，展开前与等体积浓氨试液共同预平衡15分钟；扫描波长λs∶350nm。
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2.2 溶液配制
2.2.1 对照品溶液：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加乙醇制成每1ml约含0.3mg的溶液，备用。
2.2.2 样品溶液：取消积片20片，精密称重，研细，精密称取约5片量细粉置索氏提取器中，加甲醇回流提取至提取液无色。回收提取液，残渣加水溶解并完全转移入已处理好的D101大孔树脂柱(内径1cm，树脂层高15cm，50ml水预洗)上，以1滴/秒的速度洗脱(下同)，再用50ml水洗脱，最后用50ml乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，置水浴上蒸至少量，并完全移入5ml量瓶中，用乙醇定容，备用。
2.3 测定方法
吸取对照品溶液2μl、5μl及样品溶液5μl，按上述扫描条件进行扫描，测定样品及对照品吸收度积分值，计算，即得。
3 结果
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3.1 薄层色谱分离结果
薄层色谱扫描结果见图1。图1中Ⅱ为样品溶液色谱图，可以看出盐酸小檗碱斑点较集中，且前后均无干扰峰，近于基线分离，适用于扫描测定含量。
Ⅰ阴性对照(缺黄连) Ⅱ消积片 Ⅲ盐酸小檗碱
图1 薄层色谱扫描图
3.2 标准曲线
吸取每1ml含盐酸小檗碱0.3 064mg的对照品溶液1μl、2μl、3μl、4μl、5μl，点于同一硅胶G薄层板上，按上述条件展开取出，晾干，扫描，测定吸收峰面积，进行回归分析，得回归方程：Y(积分值)=451.58X(点样量μl)+217.96。测定结果表明，在0.3 064μg～1.532μg的考察范围内点样量和吸收积分值之间线性关系较好(γ=0.9 996，n=5)。
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3.3 回收率
精密称取已知盐酸小檗碱含量的消积片供试品约5片量，置索氏提取器中，加入对照品溶液2.00ml，按供试品溶液制备方法操作，最后定容于10ml量瓶中，作为供试品溶液，按测定方法进行测定，计算加样回收率。结果，加样回收率平均为98.6%(n=5，RSD=0.9%)，说明本方法回收率较高。
3.4 精密度
取同一批消积片样品，按测定方法先后共测定5次，各次测定结果间的RSD为1.0%。
3.5 阴性对照试验
除黄连外，方中其余各味按消积片制法项下规定制成阴性对照样品，取阴性对照样品按样品溶液制备方法制成阴性对照溶液，取上述溶液5μl及盐酸小檗碱对照品溶液2μl，点于同一块硅胶G薄层板上，按上述色谱条件展开。结果，阴性对照色谱中在与对照品色谱同一位置上不显相同的斑点，对本测定无干扰(扫描色谱见图1)。
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3.6 实际测定3批样品
测定3批消积片中盐酸小檗碱含量，并同时测定原料药材黄连中盐酸小檗碱含量，求出消积片中盐酸小檗碱理论含量，二者较为符合(见表1)。
表1 3批消积片盐酸小檗碱含量测定结果 批号
950201
950202
950203
实测含量
1.1mg/片
1.4mg/片
1.6mg/片
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1.2mg/片
1.5mg/片
16.mg/片
4 讨论
4.1 pH值对大孔树脂吸附盐酸小檗碱的影响
大孔树脂是有机高分子聚合物，结构骨架与离子交换树脂相似，但不含离子交换基因。因此，大孔树脂对生物碱的吸附只是表面吸附。这种吸附作用受pH影响较大。本实验中曾采用盐酸-甲酸回流提取小檗碱，提取物水溶液酸性，当用大孔树脂进行除杂时，小檗碱亦被洗脱下来；后改用甲醇提取，提取物水溶液呈中性，大孔树脂吸附小檗碱较牢固，方法回收率好。
4.2 本法的特点及应用
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文献[2]报道，用大孔树脂提取三颗针中的生物碱，提取率达97%，这与本文结果一致。本实验表明，大孔树脂是定量分析中除去糖类杂质干扰的有效方法，适用于口服液、含片等含糖制剂的分析。■
参考文献：
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典(一部)[S].1995年版.广州：广东科技出版社、化学工业出版社，1995：547～548.
[2]中国医学科学院药物研究所植化室.大孔吸附树脂在中草药化学成分提取分离中的一些应用[J].中草药，1980，11(3)：138.
收稿日期：1999-08-02
修回日期：1999-09-13, 百拇医药