脂多糖、植物血凝素对人肾小球系膜细胞分泌IL-18的影响
作者：齐晖 李富荣 戴勇
单位：齐晖(深圳市人民医院中心实验室 深圳，518020)；李富荣(深圳市人民医院中心实验室 深圳，518020)；戴勇(深圳市人民医院中心实验室 深圳，518020)
关键词：人系膜细胞；IL-18；脂多糖
肾脏病与透折肾移植杂志000214
系膜细胞(mesangial cell，MC)数量的异常增加或减少是肾小球疾病的常见特征。在肾小球肾炎发病过程中，不管是肾小球受到损伤还是肾小球细胞过度增生的修复阶段，以及慢性肾小球细胞衰竭及肾小球硬化，都存在细胞凋亡。而Fas介导的细胞凋亡可能参与肾小球损伤过程中肾小球系膜细胞的死亡[1]。白细胞介素-18(IL-18)是新近发现的一种细胞因子，可直接增强FasL介导的Th1细胞毒效应[2]。为了解MC是否表达IL-18，以及IL-18在肾小球系膜细胞凋亡中的作用，我们对脂多糖(LPS)、植物血凝素(PHA)诱导人肾小球MC分泌IL-18的影响进行了研究。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 实验分组 人肾小球系膜细胞培养及鉴定见文献[3]。第2代系膜细胞培养7～10天后，用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化，制成1×106/L MC悬液加入24孔细胞培养板，1ml/孔，培养72h后更换无血清DMEM培养液培养，使细胞进入静止期，根据分组加入不同剂量LPS和PHA。分3组：①对照组 未加入LPS和PHA；②LPS组 分别加入LPS 12.5 μg/L，25 μg/L，50 μg/L，100 μg/L，200 μg/L；③PHA组 分别加入PHA 6.25 mg/L，12.5 mg/L，25 mg/L，50 mg/L，100 mg/L。体外培养刺激，37℃，5%CO2培养48 h，3000 r/min离心5min，收集上清液，-30℃冻存。
1.2 IL-18含量测定 采用酶联免疫吸附法检测IL-18含量，使用法国Diaclone公司生产的试剂盒。酶标仪(帝肯公司RAINBOW型，瑞士)450nm处测吸光度值。绘制标准曲线，计算IL-18浓度值。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 不同浓度LPS诱导MC产生IL-18的影响(表1) 5种浓度的LPS均可诱导MC释放IL-18。随着LPS浓度的升高，由MC释放的IL-18量呈显著升高的趋势。与无LPS刺激的细胞孔比较差异显著(P<0.01)。
表1 不同浓度LPS诱导MC产生IL-18的影响(n＝5) LPS浓度(μg/L)
IL-18(ng/L)
对照组
401±113
实验组
12.5
647±154*
, 百拇医药
25.0
681±173*
50.0
985±212**
100.0
1166±217***
200.0
1275±298***
与对照组比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001
2.2 不同浓度的PHA诱导产生IL-18的影响(表2) 由表2可见，5种不同浓度的PHA均可诱导MC释放IL-18。随着PHA浓度的升高，由MC释放的IL-18量呈升高的趋势，与无PHA刺激的细胞孔比较差异显著(P<0.01)。
, 百拇医药
表2 不同浓度的PHA诱导产生IL-18的影响(n＝5) PHA浓度(mg/L)
IL-18(mg/L)
对照组
401±113
实验组
6.25
684±137*
12.5
749±184**
25.0
761±176**
, http://www.100md.com
50.0
881±201***
100.0
945±245***
与对照组比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.0013 讨 论
肾小球疾病过程中肾小球炎症、增生，肾间质的单核细胞浸润、纤维化及相继的硬化，是疾病向慢性转化呈慢性肾功能衰竭的病理过程，其中系膜细胞是肾小球内重要的结构和功能单位。系膜细胞具有平滑肌细胞、纤维细胞性质及吞噬与自分泌功能，能产生许多细胞因子。
IL-18主要由活化的巨噬细胞产生[4]，在多种器官、组织和细胞中也可检测到IL-18的mRNA，如胸腺、肝脏、脾脏、胰腺细胞等[5]。为了观察人肾小球系膜细胞是否也产生IL-18，我们利用培养的人肾小球系膜细胞，用LPS和PHA激活MC释放IL-18。LPS和PHA呈浓度促进MC释放IL-18，而LPS诱导作用较PHA强，与未诱导组比较均差异显著(P<0.01)。
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IL-18作为一种新的细胞因子，它能促进外周血单个核细胞产生INF-γ、IL-2、和GM-CSF等细胞因子，增强NK细胞和Th1细胞的细胞毒作用，促进T细胞的增生，而且增强Fas表达，因此与细胞的凋亡发生具有密切关系。Fas系统是肾细胞实现细胞凋亡的机制之一，肾小球系膜细胞表达Fas，并且可通过激活Fas系统而引发细胞凋亡。IL-18在MC中表达受到多种细胞因子的调节，它在肾脏疾病中对Fas系统作用机制需进一步研究。
参考文献
1，Savill J，Mooney A，Hughes J et al.Apoptosis and renal scarring.Kidney Int，1995，49(suppl 54)：14
2，Dao T，Ohashi K，Kayano T et al.Interferon-γ-inducing factor.a novel cytokine，enhances Fas ligard-mediated cytotocicity of murine T helper 1 cells.Cell Immunol，1996，173：230
, 百拇医药
3，于力方，陈香美.正常人肾小球系膜细胞培养和鉴定.中华肾脏病杂志，1990，16(2)：70
4，Okamura H，Tsutsi H，Komatsu T et al.Cloning of a new cytokine that induces IFN-gamma production by T cells.Nature，1995，378：88
5，Ushio S，Namba M，Okura T et al.Cloning of the cDNA for human IFN-gamma-inducing factor，expression in Escherichia coli，and studies on the biologic activities of the protein.J Immunol，1996，156：4274
(1999-12-21收稿，2000-03-01修回)
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单位：齐晖(深圳市人民医院中心实验室 深圳，518020)；李富荣(深圳市人民医院中心实验室 深圳，518020)；戴勇(深圳市人民医院中心实验室 深圳，518020)
关键词：人系膜细胞；IL-18；脂多糖
肾脏病与透折肾移植杂志000214
系膜细胞(mesangial cell，MC)数量的异常增加或减少是肾小球疾病的常见特征。在肾小球肾炎发病过程中，不管是肾小球受到损伤还是肾小球细胞过度增生的修复阶段，以及慢性肾小球细胞衰竭及肾小球硬化，都存在细胞凋亡。而Fas介导的细胞凋亡可能参与肾小球损伤过程中肾小球系膜细胞的死亡[1]。白细胞介素-18(IL-18)是新近发现的一种细胞因子，可直接增强FasL介导的Th1细胞毒效应[2]。为了解MC是否表达IL-18，以及IL-18在肾小球系膜细胞凋亡中的作用，我们对脂多糖(LPS)、植物血凝素(PHA)诱导人肾小球MC分泌IL-18的影响进行了研究。
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1 材料和方法
1.1 实验分组 人肾小球系膜细胞培养及鉴定见文献[3]。第2代系膜细胞培养7～10天后，用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化，制成1×106/L MC悬液加入24孔细胞培养板，1ml/孔，培养72h后更换无血清DMEM培养液培养，使细胞进入静止期，根据分组加入不同剂量LPS和PHA。分3组：①对照组 未加入LPS和PHA；②LPS组 分别加入LPS 12.5 μg/L，25 μg/L，50 μg/L，100 μg/L，200 μg/L；③PHA组 分别加入PHA 6.25 mg/L，12.5 mg/L，25 mg/L，50 mg/L，100 mg/L。体外培养刺激，37℃，5%CO2培养48 h，3000 r/min离心5min，收集上清液，-30℃冻存。
1.2 IL-18含量测定 采用酶联免疫吸附法检测IL-18含量，使用法国Diaclone公司生产的试剂盒。酶标仪(帝肯公司RAINBOW型，瑞士)450nm处测吸光度值。绘制标准曲线，计算IL-18浓度值。
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2 结 果
2.1 不同浓度LPS诱导MC产生IL-18的影响(表1) 5种浓度的LPS均可诱导MC释放IL-18。随着LPS浓度的升高，由MC释放的IL-18量呈显著升高的趋势。与无LPS刺激的细胞孔比较差异显著(P<0.01)。
表1 不同浓度LPS诱导MC产生IL-18的影响(n＝5) LPS浓度(μg/L)
IL-18(ng/L)
对照组
401±113
实验组
12.5
647±154*
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25.0
681±173*
50.0
985±212**
100.0
1166±217***
200.0
1275±298***
与对照组比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001
2.2 不同浓度的PHA诱导产生IL-18的影响(表2) 由表2可见，5种不同浓度的PHA均可诱导MC释放IL-18。随着PHA浓度的升高，由MC释放的IL-18量呈升高的趋势，与无PHA刺激的细胞孔比较差异显著(P<0.01)。
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表2 不同浓度的PHA诱导产生IL-18的影响(n＝5) PHA浓度(mg/L)
IL-18(mg/L)
对照组
401±113
实验组
6.25
684±137*
12.5
749±184**
25.0
761±176**
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50.0
881±201***
100.0
945±245***
与对照组比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.0013 讨 论
肾小球疾病过程中肾小球炎症、增生，肾间质的单核细胞浸润、纤维化及相继的硬化，是疾病向慢性转化呈慢性肾功能衰竭的病理过程，其中系膜细胞是肾小球内重要的结构和功能单位。系膜细胞具有平滑肌细胞、纤维细胞性质及吞噬与自分泌功能，能产生许多细胞因子。
IL-18主要由活化的巨噬细胞产生[4]，在多种器官、组织和细胞中也可检测到IL-18的mRNA，如胸腺、肝脏、脾脏、胰腺细胞等[5]。为了观察人肾小球系膜细胞是否也产生IL-18，我们利用培养的人肾小球系膜细胞，用LPS和PHA激活MC释放IL-18。LPS和PHA呈浓度促进MC释放IL-18，而LPS诱导作用较PHA强，与未诱导组比较均差异显著(P<0.01)。
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IL-18作为一种新的细胞因子，它能促进外周血单个核细胞产生INF-γ、IL-2、和GM-CSF等细胞因子，增强NK细胞和Th1细胞的细胞毒作用，促进T细胞的增生，而且增强Fas表达，因此与细胞的凋亡发生具有密切关系。Fas系统是肾细胞实现细胞凋亡的机制之一，肾小球系膜细胞表达Fas，并且可通过激活Fas系统而引发细胞凋亡。IL-18在MC中表达受到多种细胞因子的调节，它在肾脏疾病中对Fas系统作用机制需进一步研究。
参考文献
1，Savill J，Mooney A，Hughes J et al.Apoptosis and renal scarring.Kidney Int，1995，49(suppl 54)：14
2，Dao T，Ohashi K，Kayano T et al.Interferon-γ-inducing factor.a novel cytokine，enhances Fas ligard-mediated cytotocicity of murine T helper 1 cells.Cell Immunol，1996，173：230
, 百拇医药
3，于力方，陈香美.正常人肾小球系膜细胞培养和鉴定.中华肾脏病杂志，1990，16(2)：70
4，Okamura H，Tsutsi H，Komatsu T et al.Cloning of a new cytokine that induces IFN-gamma production by T cells.Nature，1995，378：88
5，Ushio S，Namba M，Okura T et al.Cloning of the cDNA for human IFN-gamma-inducing factor，expression in Escherichia coli，and studies on the biologic activities of the protein.J Immunol，1996，156：4274
(1999-12-21收稿，2000-03-01修回)
, http://www.100md.com