银屑病外周血单个核细胞对链球菌抗原和植物血凝素刺激的反应
作者：张理涛 陈学荣 李瑞玲 殷金珠
单位：张理涛 陈学荣(北京大学第三医院皮肤科，北京 100083)；李瑞玲(中国煤矿工人临沂温泉疗养院)；殷金珠(北京大学第三医院基础医学院免疫学系，北京 100083)
关键词：银屑病；链球菌属；植物血凝素；药理学；单核细胞；药物作用；抗原；细菌；药理学
北京医科大学学报000430 [中图分类号] R758.63 [文献标识码] A [文章编号] 1000-1530(2000)04-0384-01
点滴型银屑病常继发于咽部链球菌感染之后，扁桃腺炎往往是斑块型银屑病加重的诱因。同时，与银屑病并发的皮肤疾病(如荨麻疹、异位性皮炎等)的罹患率显著降低[1]。银屑病患者接触性皮炎，尤其是对二硝基氯苯、镍的接触过敏反应消失[2]。这表明银屑病患者体内存在一种免疫失衡。为此，我们同时检测了银屑病患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)对链球菌抗原悬液和植物血凝素的反应，期望了解这种免疫失衡的机制。
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1 材料与方法
临床和病理确诊的斑块型银屑病10例，点滴型银屑病15例，对照组10例。点滴型者多为初发，10例有上呼吸道感染病史；年龄17～44岁；病程1周到20年。斑块型者年龄17～59岁；病程6月至20年。所有患者至少1月内未接受皮质类固醇及其它免疫抑制剂药物治疗。对照组为健康人。
主要试剂：β 溶血型链球菌菌株由我校病原生物学系提供。植物血凝素(phytoheomagglutinin, PHA)来自广州医学工业研究所。3H-TdR购于中国科学院上海原子核研究所。
A组β溶血型链球菌抗原悬液的制备：β 溶血型链球菌菌株接种于10%(体积分数)羊血培养平皿；37℃，24 h；收获细菌于生理盐水中，比浊定量，超声裂碎菌体，-20℃储存。
密度梯度离心法分离外周血单个核细胞， Hanks 液洗两次，计数。
, 百拇医药
3H-TdR参入法检测PBMCs对PHA和链球菌悬液刺激的增殖反应：用C-1640将PBMCs配成2×106 ml-1，按每孔200μl加入96孔板。分空白、PHA和链球菌悬液3组，每组至少3复孔分别加入C-1640、PHA(50μg.L-1)和链球菌悬液(每毫升106细菌)。37℃，5%(体积分数)CO2条件下培养72 h，于培养结束前6 h每孔加入3H-TdR(3.7×105 Bq.ml-1) 20μl，培养结束后用多头细胞收集器收获细胞于49型玻璃纤维滤纸上，干燥后入闪烁液，用闪烁仪测量放射性活度。刺激指数(SI)=刺激孔平均活度/空白孔平均活度。
各组SI以
±s表示；采用方差分析进行组间检验。
, 百拇医药
2 结果与讨论
所有个体的PBMCs对PHA 和链球菌悬液的刺激均有不同程度的增殖反应。其中银屑病组PBMCs对链球菌抗原的反应明显强于对照组(P均<0.01)；而与正常对照相比，银屑病患者PBMCs对PHA的反应减弱(P<0.01，表1)。
表1 PBMCs对PHA和链球菌抗原刺激的增殖反应(SI，±s)
Table 1 The responses of PBMCs to PHA and streptococcal antigens
from different groups ( stimulus index,±s) Group
, 百拇医药
n
Streptococcal antigens
PHA
Control
15
8.6±1.2
24.6±4.8
Guttate
10
14.8±1.2△△
16.7±2.2△△
Plague
, http://www.100md.com
10
12.6±2.6△△
18.7±3.2△△
△△P<0.01, vs control.
结果发现银屑病PBMCs对链球菌抗原的反应增强，与我们以往的研究结果一致[3]；同时发现银屑病PBMCs对PHA 的刺激反应减弱。这种对有丝分裂原反应的减弱提示外周血单个核细胞、尤其是T细胞存在功能缺陷；它可能是T细胞对其他抗原、尤其是超抗原(如链球菌M蛋白、致热外毒素、葡萄球菌肠毒素B等)敏感性增高的结果，更有可能是银屑病发病的根本原因。
银屑病PBMCs对链球菌抗原的增殖反应对咽部链球菌感染之后的点滴型银屑病的发病以及斑块型银屑病的加重起着积极的作用；受刺激活化的T淋巴细胞可以产生大量的细胞因子,可能成为银屑病角质形成细胞病理改变的重要原因。因此链球菌感染起到疾病激发点的作用,但并非所有银屑病皆发生于咽部或链球菌感染之后，发生于肝炎、HIV感染之后的银屑病也有报道。最近有人报道HPV-5的DNA检出率在银屑病人群显著升高[4]，提示病毒感染与银屑病发病有关，有待进一步研究。鉴于病毒感染的广泛性,特定银屑病素质的个体发病说明存在强烈的遗传背景。银屑病PBMCs对PHA反应的减弱和与银屑病伴发的皮肤病的罹患率下降可能有关;说明银屑病患者存在免疫失衡。
, http://www.100md.com
参考文献
1，Henseler T, Christophers E. Disease concomitance in psoriasis[J]. J Am Acad Dermatol， 1995， 32: 982-986
2，Fedler R, Stromer K. Nikel sensitivity in atopics , psoriasis and healthy subjects[J]. Contact Dermatitis， 1993， 29: 65-69
3，张理涛,陈学荣,殷金珠.β溶血型链球菌诱发点滴型银屑病发病机制的研究[J].中华皮肤科杂志， 1999，32(2):99-100
4，Favre M, Orth G, Majeski S, et al. Psoriasis: a possible reservoir for human papillomavirus type 5, the virus associated with skin carcinomas of epidermodysplasia verruciformis[J]. J Invest Dermatol， 1999，110(4):311-317
(2000-03-30收稿), 百拇医药
单位：张理涛 陈学荣(北京大学第三医院皮肤科，北京 100083)；李瑞玲(中国煤矿工人临沂温泉疗养院)；殷金珠(北京大学第三医院基础医学院免疫学系，北京 100083)
关键词：银屑病；链球菌属；植物血凝素；药理学；单核细胞；药物作用；抗原；细菌；药理学
北京医科大学学报000430 [中图分类号] R758.63 [文献标识码] A [文章编号] 1000-1530(2000)04-0384-01
点滴型银屑病常继发于咽部链球菌感染之后，扁桃腺炎往往是斑块型银屑病加重的诱因。同时，与银屑病并发的皮肤疾病(如荨麻疹、异位性皮炎等)的罹患率显著降低[1]。银屑病患者接触性皮炎，尤其是对二硝基氯苯、镍的接触过敏反应消失[2]。这表明银屑病患者体内存在一种免疫失衡。为此，我们同时检测了银屑病患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)对链球菌抗原悬液和植物血凝素的反应，期望了解这种免疫失衡的机制。
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1 材料与方法
临床和病理确诊的斑块型银屑病10例，点滴型银屑病15例，对照组10例。点滴型者多为初发，10例有上呼吸道感染病史；年龄17～44岁；病程1周到20年。斑块型者年龄17～59岁；病程6月至20年。所有患者至少1月内未接受皮质类固醇及其它免疫抑制剂药物治疗。对照组为健康人。
主要试剂：β 溶血型链球菌菌株由我校病原生物学系提供。植物血凝素(phytoheomagglutinin, PHA)来自广州医学工业研究所。3H-TdR购于中国科学院上海原子核研究所。
A组β溶血型链球菌抗原悬液的制备：β 溶血型链球菌菌株接种于10%(体积分数)羊血培养平皿；37℃，24 h；收获细菌于生理盐水中，比浊定量，超声裂碎菌体，-20℃储存。
密度梯度离心法分离外周血单个核细胞， Hanks 液洗两次，计数。
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3H-TdR参入法检测PBMCs对PHA和链球菌悬液刺激的增殖反应：用C-1640将PBMCs配成2×106 ml-1，按每孔200μl加入96孔板。分空白、PHA和链球菌悬液3组，每组至少3复孔分别加入C-1640、PHA(50μg.L-1)和链球菌悬液(每毫升106细菌)。37℃，5%(体积分数)CO2条件下培养72 h，于培养结束前6 h每孔加入3H-TdR(3.7×105 Bq.ml-1) 20μl，培养结束后用多头细胞收集器收获细胞于49型玻璃纤维滤纸上，干燥后入闪烁液，用闪烁仪测量放射性活度。刺激指数(SI)=刺激孔平均活度/空白孔平均活度。
各组SI以
±s表示；采用方差分析进行组间检验。, 百拇医药
2 结果与讨论
所有个体的PBMCs对PHA 和链球菌悬液的刺激均有不同程度的增殖反应。其中银屑病组PBMCs对链球菌抗原的反应明显强于对照组(P均<0.01)；而与正常对照相比，银屑病患者PBMCs对PHA的反应减弱(P<0.01，表1)。
表1 PBMCs对PHA和链球菌抗原刺激的增殖反应(SI，
±s)Table 1 The responses of PBMCs to PHA and streptococcal antigens
from different groups ( stimulus index,
±s) Group, 百拇医药
n
Streptococcal antigens
PHA
Control
15
8.6±1.2
24.6±4.8
Guttate
10
14.8±1.2△△
16.7±2.2△△
Plague
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10
12.6±2.6△△
18.7±3.2△△
△△P<0.01, vs control.
结果发现银屑病PBMCs对链球菌抗原的反应增强，与我们以往的研究结果一致[3]；同时发现银屑病PBMCs对PHA 的刺激反应减弱。这种对有丝分裂原反应的减弱提示外周血单个核细胞、尤其是T细胞存在功能缺陷；它可能是T细胞对其他抗原、尤其是超抗原(如链球菌M蛋白、致热外毒素、葡萄球菌肠毒素B等)敏感性增高的结果，更有可能是银屑病发病的根本原因。
银屑病PBMCs对链球菌抗原的增殖反应对咽部链球菌感染之后的点滴型银屑病的发病以及斑块型银屑病的加重起着积极的作用；受刺激活化的T淋巴细胞可以产生大量的细胞因子,可能成为银屑病角质形成细胞病理改变的重要原因。因此链球菌感染起到疾病激发点的作用,但并非所有银屑病皆发生于咽部或链球菌感染之后，发生于肝炎、HIV感染之后的银屑病也有报道。最近有人报道HPV-5的DNA检出率在银屑病人群显著升高[4]，提示病毒感染与银屑病发病有关，有待进一步研究。鉴于病毒感染的广泛性,特定银屑病素质的个体发病说明存在强烈的遗传背景。银屑病PBMCs对PHA反应的减弱和与银屑病伴发的皮肤病的罹患率下降可能有关;说明银屑病患者存在免疫失衡。
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参考文献
1，Henseler T, Christophers E. Disease concomitance in psoriasis[J]. J Am Acad Dermatol， 1995， 32: 982-986
2，Fedler R, Stromer K. Nikel sensitivity in atopics , psoriasis and healthy subjects[J]. Contact Dermatitis， 1993， 29: 65-69
3，张理涛,陈学荣,殷金珠.β溶血型链球菌诱发点滴型银屑病发病机制的研究[J].中华皮肤科杂志， 1999，32(2):99-100
4，Favre M, Orth G, Majeski S, et al. Psoriasis: a possible reservoir for human papillomavirus type 5, the virus associated with skin carcinomas of epidermodysplasia verruciformis[J]. J Invest Dermatol， 1999，110(4):311-317
(2000-03-30收稿), 百拇医药